11.19 : Chromatographie liquide haute performance: instrumentation

La chromatographie liquide haute performance, ou HPLC, est une technique d'analyse qui sépare des échantillons liquides sous haute pression. Un instrument HPLC se compose de bouteilles en verre pour stocker des solvants appelés réservoirs de phase mobile. Des solvants de qualité HPLC sont utilisés pour maintenir une pureté élevée et les gaz dissous sont éliminés à l'aide d'un dégazeur, tel qu'un système de pompage à vide ou un barbotage à l'hélium. Les solvants sont ensuite pompés dans la colonne d'analyse à l'aide d'une seringue à vis ou de pompes à piston alternatif. La plupart des instruments HPLC modernes utilisent des pompes à piston alternatif qui créent un flux de phase mobile pulsé, qui est lissé en les connectant à un amortisseur d'impulsions. Dans certaines analyses, l'élution par gradient est utilisée. Cette technique consiste à modifier progressivement la composition de la phase mobile, ce qui peut améliorer la séparation de mélanges complexes en fonction de leur polarité. Des contrôleurs de gradient sont utilisés pour maintenir le débit des solvants pendant ce processus.

Avant que la phase mobile n'atteigne la colonne, l'échantillon est introduit dans l'injecteur à boucle ou l'auto-injecteur. La phase mobile, ainsi que l'échantillon, pénètrent dans la colonne, qui est remplie d'une phase stationnaire. La colonne analytique est placée dans un four à colonne pour maintenir une température constante. Parfois, des précolonnes telles que des colonnes de récupération et de garde sont utilisées pour protéger la longévité de la colonne. Une fois les composants de l'analyte séparés, ils se dirigent vers le détecteur, qui les identifie et convertit les résultats en un chromatogramme que l'ordinateur affiche. Enfin, l'éluant, le solvant transportant les composants séparés, est soit jeté dans les déchets, soit collecté dans le collecteur fractionnaire.