Este protocolo proporciona una necesidad detallada de desarrollar un modelo de rata de fibrilación ventricular a largo plazo utilizando el aparato de Langendorff. Llena el vacío de la fibrilación ventricular a largo plazo en el modelo de animales pequeños. La técnica es simple, económica, repetible y estable.
Esta técnica se puede utilizar en el estudio de la parada de la fibrilación ventricular bajo perfusión que se realiza en determinadas situaciones clínicas en el campo de las sesiones y operaciones de cirugía cardíaca. Para comenzar, prepare el tampón Krebs-Henseleit o KH agregando cloruro de sodio 118 milimolar, cloruro de potasio milimolar, cloruro de magnesio milimolar 1.2, dihidrógenofosfato de sodio milimolar, cloruro de calcio milimolar, bicarbonato de sodio milimolar, 11.1 glucosa milimolar y EDTA 0.5 milimolar en agua destilada. A continuación, prepare el sistema de perfusión Langendorff modificado.
Gasear continuamente el matraz que contiene tampón KH con 95% de oxígeno y 5% de dióxido de carbono a una presión de aproximadamente 80 milímetros de mercurio. Coloque un extremo del tubo de perfusión en el tampón KH, pase el centro del tubo de perfusión a través del baño de agua y conecte una aguja roma de calibre 20 al otro extremo del tubo de perfusión. Después de suspender la aguja en un soporte de alambre, ajuste la temperatura del baño de agua para que la temperatura del tampón KH desde el final del sistema de perfusión sea de 37 grados centígrados.
Utilice un registrador de señales fisiológicas para digitalizar y registrar todas las señales analógicas. Use dos electrodos de aguja de acero inoxidable para registrar un electrocardiograma bipolar o ECG y dos electrodos de aguja de acero inoxidable para la estimulación eléctrica. Conecte un extremo de los cuatro electrodos al registrador de señales fisiológicas y el otro extremo cerca del área donde se colocará el corazón después de la fijación al aparato.
A continuación, utilice el software de la computadora portátil para reconocer, ajustar y registrar automáticamente el ECG bipolar y los parámetros hemodinámicos. Ajuste los parámetros del estimulador eléctrico a 30 hercios de corriente alterna con el grupo de bajo voltaje que recibe 2 voltios y el grupo de alto voltaje que recibe 6 voltios. Con la rata anestesiada conectada a un ventilador después de la disección cervical y la intubación traqueal, levante la piel del proceso xifoide con fórceps dentados y haga una incisión transversal de tres centímetros en la piel con tijeras de tejido.
Extienda las incisiones de piel y costillas a las axilas en ambos lados en forma de V. Use la disección roma para separar el tronco braquiocefálico del tejido circundante. Luego sujete el tronco braquiocefálico con fórceps curvos para facilitar la extirpación del corazón.
Inmediatamente sumerja el corazón en una placa de Petri con tampón KH a 0 a 4 grados centígrados para lavar y bombear la sangre residual. Transfiera el corazón a una segunda placa de Petri. Cortar el tejido redundante e identificar la aorta.
Use dos fórceps oftálmicos para levantar la aorta e inserte la aorta en la aguja roma del aparato de Langendorff. Luego, con la ayuda de un asistente, ate un nudo con un hilo de sutura 0. Encienda el regulador de flujo de perfusión.
Empuje el balón a través de la válvula mitral hasta el ventrículo izquierdo. Llene el globo con agua destilada para lograr una presión diastólica final de 5 a 10 milímetros de mercurio. Conecte el ECG y los electrodos de estimulación eléctrica al corazón.
Coloque el corazón en el centro de la cámara de vidrio encamisada mantenida a 37 grados centígrados. Permita que el corazón se equilibre durante 20 minutos dentro de la cámara. Luego ajuste la temperatura del baño de agua para mantener la temperatura dentro de la cámara de vidrio encamisada a 30 grados centígrados.
Después de que la temperatura haya alcanzado el nivel deseado, active el interruptor de estimulación eléctrica en el software de la computadora portátil. Si el animal es parte del grupo de fibrilación ventricular a largo plazo estimulada continuamente o fibrilación VF, permita 90 minutos de estimulación eléctrica. Después de 90 minutos de FV, use electrodos para dar 0.1 julios de desfibrilación de corriente continua.
Simultáneamente, regule la temperatura del baño de agua para permitir que la temperatura aumente lentamente dentro de la cámara de vidrio encamisada a 37 grados centígrados durante 10 minutos. Después de la desfibrilación, deje que el corazón lata durante 60 minutos y luego detenga los latidos por perfusión lenta con cloruro de potasio al 10% a aproximadamente 37 grados centígrados. Extirpar el corazón para la creatina quinasa o el ensayo CK-MB y el análisis histológico.
Aquí se muestran las tasas de FV, la tasa de éxito de la desfibrilación y la tasa de éxito del modelo de FV. El grupo LC y el grupo HC recibieron estimulación eléctrica continua y, por lo tanto, la FV ocurrió con una tasa de éxito del 100%. Pero el grupo HC demostró tasas de éxito más bajas para la desfibrilación.
El grupo LI y el grupo HI en los que la estimulación eléctrica se desactivó después de cinco minutos tuvieron diferentes tasas de FV, pero la tasa de FV fue más lenta en ambos grupos en comparación con el Grupo LC y el Grupo HC. Tanto el Grupo LC como el Grupo LI tuvieron mejores tasas de éxito de desfibrilación. Pero en general, el Grupo LC tuvo la tasa de éxito del modelo más alta, mientras que el Grupo LI tuvo una tasa de éxito del modelo más baja. La frecuencia cardíaca o FC, el flujo coronario o la FQ, y la diferencia de presión ventricular izquierda o las tasas de recuperación de LVPD se muestran aquí.
La hemodinámica del Grupo C se mantuvo estable durante el experimento y mostró una ligera disminución de la FC, la FQ y la PDVI. Los dos grupos con FV inducida por bajo voltaje tuvieron un rendimiento similar y una buena tasa de recuperación. La FC y la PDVI no fueron significativamente diferentes en esos grupos en comparación con el Grupo C.Pero la tasa de recuperación de la FQ fue significativamente mejor que en el Grupo C.In contraste, la tasa de recuperación hemodinámica de los dos grupos con alto voltaje inducido a FV a largo plazo fue pobre y el grupo de FV a largo plazo estimulado continuamente de alto voltaje mostró la peor tasa de recuperación.
El análisis de los fluidos de derrame coronario mostró que los niveles de CK-MB fueron más altos en ambos grupos de alto voltaje. No se encontraron diferencias entre los dos grupos de baja tensión y el Grupo C.La tinción de hematoxilina y eosina mostró una región de quemadura de electrodos en el Grupo HC. Este protocolo es adecuado para el estudio relacionado con la detención de la fibrilación ventricular y la perfusión en cirugía cardiovascular.
