En este video, presentamos cómo utilizar un cilindro y una prueba de campo abierto para estrechar la función motora en el modelo MPTP de la enfermedad de Parkinson. La principal ventaja es que los ratones no necesitan ser entrenados antes de la prueba de comportamiento. Además, este método es eficiente y el costo del equipo es bajo.
Las personas que son nuevas en las pruebas de comportamiento pueden subestimar el efecto de la interferencia ambiental. Mantenerse callado y evitar cambios en el revestimiento ayudará. Aquí, las pruebas conductuales se llevan a cabo 24 horas después de la inyección final de un régimen de siete días de MPTP o inyecciones salinas y 40 minutos después de la administración intragástrica de L-DOPA a un subconjunto de los animales.
Si las pruebas conductuales no se realizan en la misma habitación donde se alojan los animales, aclimate a los ratones a la nueva habitación durante 30 a 60 minutos antes de la prueba. Comience colocando un cilindro de vidrio transparente en el centro de una mesa. Rodear el cilindro en tres lados con cartón negro, colocado de cuatro a ocho centímetros de distancia del cilindro para reducir el efecto de la iluminación ambiental.
Deje un lado del cilindro mirando hacia la cámara para la grabación de vídeo. Coloque una cámara capaz de tener al menos un millón de píxeles de resolución de 40 a 60 centímetros de distancia del cilindro para asegurarse de que todo el cilindro está contenido en el campo de visión. Coloque un ratón en el cilindro a la vez y comience a filmar a la vez.
Durante este proceso trate de evitar el ruido o los cambios de luz con el fin de evitar influir en el comportamiento del ratón. Los levantamientos de patas se producen cuando el ratón se levanta sobre sus extremidades traseras, eleva ambas extremidades delanteras por encima del nivel del hombro y aterriza. Deje de filmar después de tres minutos y vuelva a colocar el ratón en la jaula de casa.
Limpie el cilindro con agua y luego rocíe 70%ethnol sobre la pared interior para desinfectarlo y eliminar los aromas del ratón. Limpie el cilindro antes de probar el siguiente ratón. Una vez completada la prueba, reproduzca el vídeo a una velocidad de 0,5 veces la velocidad regular y cuente el número de levantamientos de patas contra la pared de cada ratón.
Si el ratón eleva sus extremidades delanteras por encima del nivel del hombro varias veces continuamente sin aterrizar, debe contarse una sola vez. Realice pruebas de campo abierto durante la misma sesión que la prueba del cilindro. Prepare una caja de reacción transparente de campo abierto con una placa de madera, cubierta por un paño blanco o negro en contraste dependiendo del color del ratón.
Fije una cámara sobre el campo a una altura de un metro. Ajuste la cámara para asegurarse de que el cuadro de reacción de campo abierto está justo en el centro del vídeo. Ponga un ratón de prueba en la caja y deje que el ratón se familiarice con el entorno durante aproximadamente un minuto.
Grabe un vídeo de cinco minutos con la cámara conectada al ordenador. Por último, limpie las heces de la caja de reacción de campo abierto, rocíe 70% de etanol en la caja y límpiela. En la prueba del cilindro, se observó una disminución en el número de traseros contra la pared en ratones tratados con MPTP en comparación con ratones tratados con solución salina.
Se observó un aumento de las crías en los ratones tratados con MTPT que recibieron L-Dopamina el día de las pruebas en comparación con los ratones tratados con MPTP que reciben solución salina. Esta imagen muestra la traza de movimiento representativo y la distribución del tiempo estático, el tiempo de caminata y el tiempo de ejecución en ratones de control no tratados con MPTP. Los ratones tratados con MTPT demostraron una menor velocidad de movimiento, una distancia de movimiento más corta, un tiempo estático más largo y un tiempo de funcionamiento más corto que los ratones tratados con solución salina, lo que demuestra un déficit motor inducido por MTPT.
Los ratones tratados con MPTP que recibieron L-dopamina mostraron una mayor velocidad de movimiento, una distancia de movimiento más larga, un tiempo estático más corto, y un tiempo de funcionamiento más largo que los ratones tratados con sólo MPTP, lo que indica que la L-dopamina mitiga el déficit motor inducido por MPTP. Al cambiar los ratones que se están probando limpiar el área por completo y rociar etanol para eliminar el efecto del aroma de los ratones anteriores. Después de este procedimiento, se pueden realizar otras medidas como la prueba de marcha de la viga, la prueba del polo.
Los datos relacionados con la capacidad de equilibrio y la capacidad motora se pueden obtener a través de estos métodos. MPTP es neurotóxico tanto para ratones como para humanos, por lo que se deben tomar precauciones estrictas para evitar la exposición. Se debe usar EPP adicional, como una máscara o un respirador.
