Name: long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs
Uploaded: 2016-03-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
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The work was supported in part by funding from Alberta Livestock and Meat Agency and Natural Science and Research Council Discovery grant to S. D. Proctor.

Todos los procedimientos descritos en animales de experimentación, tanto en el video y el manuscrito fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales institucional y siguieron las directrices establecidas por el Consejo Canadiense de Cuidado de Animales. 1. La anestesia quirúrgica y la preparación quirúrgica de los cerdos recién nacidos <ol><li> En una antesala separada, premedicar 25 kg cerdos cerca de la base del cuello con un cóctel de fármacos sedantes anestesia intramuscular que contiene: azaperona (0,3 mg / kg), clorhidrato de ketamina (10 mg / kg), la dexmedetomidina (15 mg / kg). Nota: Añadir buprenorfina (0,005-0,02 mg / kg) en el cóctel de fármacos preanestésica para un mejor control del dolor intraoperatorio. </li><li> Anestesiar a los cerdos con la inhalación de gas isoflurano inhalado (4-5% de isoflurano en 500 ml-1000 ml / min de O2) usando una máscara facial. Visualizar las cuerdas vocales de la laringe usando un alcance de veterinaria (17-25 cm de longitud hoja recta), y aplicar un 10% de esterilización tópica de lidocaína al vocalcuerdas. Dejar que la lidocaína en aerosol para contactar las cuerdas vocales 30 a 60 seg antes de la intubación para reducir la posibilidad de espasmo de las cuerdas vocales y la obstrucción de las vías respiratorias. </li><li> Intubate los cerdos pasando un tubo endotraqueal con balón (5,0 a 7,0 mm de diámetro interno (ID)) entre las cuerdas vocales y mantener la anestesia con gas isoflurano (0,5 a 2,0% de isoflurano en 1.000-2.000 ml / min O 2) utilizando un cerrado circuito de respiración del aire exhalado sistema de anestesia durante la cirugía. Evaluar el nivel de anestesia por el tono de la mandíbula, y las dos respuestas reflejas del pedal y palpebrales. gas anestésico espirado se compactarse y ventilado fuera de la sala de cirugía. </li><li> Limpiar la superficie exterior de la oreja con una solución de lavado quirúrgico 2,0% de clorhexidina seguido de un enjuague con alcohol isopropílico al 70%. Con un catéter intravenoso 20 G, sondar una vena de la oreja para proporcionar líquidos por vía intravenosa (solución de Ringer lactato; 5-10 ml / kg / h) durante la cirugía. Asegurar un oxímetro de pulso a la superficie mucosa de la lengua con medcinta de iCal para monitorear el ritmo cardíaco y la saturación de oxigenación de la sangre periférica (SpO2). </li><li> Coloque el cerdo anestesiado en una posición de decúbito dorsal y afeitar el abdomen ventral desde la mitad del tórax caudalmente a la cara ventral del pubis. Limpiar esta área con dos alternando 2,0% de clorhexidina lavados quirúrgicos y lavados con agua estéril. </li><li> Transferir el cerdo anestesiado a la sala de cirugía y aplicar el lavado quirúrgico final de 70% de enjuague alcohol isopropílico, deje que se seque, y luego cubrir el animal. </li><li> Inserte una sonda de temperatura rectal aproximadamente 2-4 cm en el recto para controlar la temperatura del cuerpo. Coloque los cerdos de una almohadilla eléctrica de recirculación de agua para mantener la temperatura corporal normal (38-40 ° C) durante el procedimiento quirúrgico. </li><li> Coloque el cerdo con cuatro cortinas toallas colocadas en un patrón cuadrante suprayacente alrededor del abdomen. Coloque la primera cortina a través de xiphisternum, la segunda cortina a lo largo de la cara lateral de abdomen aproximadamente 5 cm lateral a la línea media abdominal. Coloque la tercera cubrir a través de la cresta ileal de la pelvis y el cuarto cortina, como el segundo paño (aunque en el lado opuesto), se coloca a lo largo de la cara lateral del abdomen aproximadamente 5 cm lateral a la línea media abdominal. </li><li> Coloque un paño de mesa, con una abertura de ranura que permite el acceso a la zona quirúrgica, a través de las cortinas de toallas subyacentes y cubrir el cerdo y toda mesa de operaciones. La caída final es un Steri-paño desechable colocado sobre la mesa de cortina grande. </li></ol> 2. Cirugía abdominal y la cateterización de la linfático intestinal Tronco <ol><li> Hacer una incisión en la piel 20 cm con una cuchilla de escalpelo para exponer los músculos abdominales subyacentes. Incisión en las capas musculares abdominales con electrocauterio monopolar (20 ajuste de vatios) para exponer el peritoneo parietal. Abrir un segmento lineal de 20 cm de peritoneo parietal con tijeras Metzenbaum para acceder a las vísceras abdominales y vasos linfáticos. </li><li&gt; Coloque un retractor en el aspecto craneal de la incisión quirúrgica para mantener la cavidad abdominal abierta para la duración de la cirugía. </li><li> Humedecer todos los tejidos con agua caliente (37 ° C) solución salina estéril durante todo el procedimiento quirúrgico. Levante suavemente un gran segmento de intestino incluyendo el colon, intestino ciego, íleon y el yeyuno de la cavidad abdominal y exteriorizar que el flanco izquierdo del cerdo para acceder a la parte superior del abdomen, el hígado y vasos linfáticos. Asegurar el intestino exteriorizado en posición con cortinas de toallas adicionales para formar un cabestrillo para apoyar suavemente el intestino. </li><li> Localizar el vaso linfático, que establece unos 4 cm craneal-medial de la vena renal derecha, 6 cm ventral caudal-medial- de los capataces cava y por debajo de la cara visceral del lóbulo hepático derecho, cerca del páncreas 22,36,37. Identificar el vaso linfático como una estructura translúcida yuxtapuesto al segmento ventral derecha de la vena portal 36,37. </li><li> Se separa la Vess linfáticoel de la fascia que rodean por las burlas suavemente el tejido adjunto con aplicadores Q-tip. Una vez que las caras laterales de recipiente se separan del tejido circundante, crear una abertura &quot;túnel&quot; bajo el buque con finas punta roma fórceps. </li><li> Pasar tres suturas de seda 2-0 debajo del vaso linfático con unas pinzas finas. Ligar la sutura más caudal primero para ocluir, dilatar y llenar el recipiente con la linfa. A propósito dejar los extremos de este hilo de sutura relativamente largo (4 cm) para asegurar el catéter al vaso linfático. Colocan otros dos suturas separadas 1,0 cm entre sí y son aproximadamente 1,0-1,5 cm craneales a la sutura caudal garantizado. Deje estas dos suturas con una &#39;sola lazo de ligadura floja&#39; para permitir la obtención más rápida del catéter en el vaso. Nota: El segmento del vaso linfático situado entre la sutura de ligadura más caudal y la sutura media (de las dos suturas craneales) es el sitio para la cateterización. En cuanto a sutura de material, 2-0 poliglactina de sutura puede sustituir a 2-0 suturas de seda, si es necesario. </li><li> Corte un pequeño agujero en el vaso con tijeras iris y dilatar el vaso con unas pinzas finas romos. Inserto de aproximadamente 1,0 a 1,5 cm de tubo de catéter especializado (4,06 Diámetro exterior (OD) X 2,31 mm ID) con un extremo biselado en el recipiente y atar los dos suturas craneales para asegurar el catéter en su lugar. Usa los extremos de la sutura largos de la sutura caudal para asegurar el catéter al vaso. </li><li> Lavar el intestino exteriorizado con cantidades copiosas de solución salina tibia y suavemente volver a la cavidad abdominal asegurar el posicionamiento anatómica correcta del intestino. </li><li> Exteriorizar el catéter en la mitad del flanco izquierdo (5-10 cm ventral desde la fosa paralumbar). Hacer una incisión en la piel con un bisturí y pasar un trocar de la cavidad abdominal a la superficie de la piel para crear una abertura para la exteriorización del catéter. Utilizar una gran pinza de Kelly para exteriorizar el catéter del cav abdominaldad a través del orificio de un trócar. </li><li> Cerrar el peritoneo parietal con un simple patrón de sutura continua de 2-0 sutura de poliglactina con una aguja redonda (cónica). Cierre las capas musculares abdominales con un simple patrón de sutura interrumpida con una sutura de poliglactina 2-0 en una aguja redonda. </li><li> Cerrar la piel en un patrón subcuticular con 2-0 sutura de poliglactina en una aguja de corte. Asegurar el catéter exteriorizada a la piel con un patrón de sutura en bolsa de tabaco y una sutura 2-0 nylon en una aguja de corte. </li><li> Colocar una chaqueta especializado en el cerdo mientras que todavía anestesiado para facilitar su colocación y reducir el estrés del cerdo durante la recuperación. </li></ol> 3. La recuperación post-quirúrgica y la linfa Colección <ol><li> Aproximadamente 10 minutos antes de la interrupción de la anestesia de inhalación, administrar bupenorphine (0,1 mg / kg) por vía intramuscular para proporcionar analgesia inmediata post-cirugía. Continuar bupenorphine (0,1 mg / kg) cada 12 h durante 24-48 horas para manteneranalgesia post-cirugía. </li><li> Monitorear los cerdos de complicaciones post-quirúrgicas cada 8-12 h durante un período de 7 días. </li><li> Recoger la linfa en botellas de 500 ml de lavado de polipropileno, revestidos con ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), y suplementado con antibióticos; penicilina (6.000 UI), estreptomicina (6 mg) y anfotericina B (3 mg) cada 12 horas durante un período de 7 días. </li></ol> 4. Cuantificación de lipoproteína APOB48, triglicéridos, colesterol y proteínas totales Recogidos de linfa <ol><li> Centrifugar la muestra de la linfa a 1.800 xg durante 5 min a 4 ° C. Recoger el sobrenadante y utilizarla para la cuantificación de triglicéridos, colesterol y proteínas totales. </li><li> Divida el sobrenadante en tres muestras: una muestra no diluida, un 1:20 de agua destilada muestra diluida y una muestra final se diluyó 1: 100 con agua destilada. </li><li> Usar el sobrenadante sin diluir para medir niveles de colesterol, con un kit disponible en el mercado. </li><li> Utilice la 1:20 y 1:100 muestras diluidas para medir niveles de triglicéridos y de proteína total con un kit disponible en el mercado y el ensayo de ácido bicinconínico total de proteína, respectivamente. </li></ol> 5. La cuantificación de la lipoproteína APOB48, recopilada a partir de nódulos 38 <ol><li> Determinar la concentración de lipoproteínas de APOB48 con un método de Western Blotting inmune adaptado 38. linfático total de separada con 3-8% de sodio dodecil electroforesis en gel de poliacrilamida con tris-etilo-(SDS-PAGE). </li><li> Transferir las proteínas separadas a una membrana de fluoruro de polivinilideno (0,45 micras) y se incuba con un anticuerpo policlonal de cabra a la ApoB (1: 4.000), y luego se unen con un anticuerpo secundario anti-cabra. </li><li> Cuantificar la lipoproteína APOB48 con quimioluminiscencia utilizando una comparación densitométrica lineal con el estándar de proteína APOB48 roedor purificada. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Recogida linfático intestinal es un excelente método para investigar los mecanismos que participan en los lípidos 8-12 y 13-15 de drogas metabolismo, metástasis de cáncer de 16,17, el tráfico de células y la función inmune 18-26, en varios modelos animales experimentales. De hecho, la capacidad para cosechar grandes cantidades de cualquiera periférica (aferente) y central (eferente y los grandes vasos del tronco) linfático durante un período prolongado ha sido especialmente importante para la comprensión de los cambios temporales que se producen en las poblaciones de células siguientes desafíos con agentes moduladores inmunes 18-22 , 25,26. Del mismo modo, la recogida de la linfa central ha sido de gran ayuda en los procesos que intervienen en el metabolismo de las lipoproteínas de 8-12 delinear. La utilidad de la recogida de la linfa depende del éxito del procedimiento de cateterización y la permeabilidad del catéter dentro del vaso linfático. La cateterización de los vasos linfáticos principales implicados enEl drenaje linfático intestinal en animales grandes generalmente utiliza uno de los tres enfoques quirúrgicos. La primera técnica utiliza un enfoque de hombro del cráneo para entrar en el conducto torácico que cubre la vena yugular común (vaca conducto torácico) 5. El segundo utiliza un enfoque flanco superior sobre el aspecto mediados de los laterales del riñón derecho 32,33. La tercera técnica como se describe en este vídeo emplea, ya sea una línea media ventral o paramedian 22,35 laparotomía para exponer el tronco linfático intestinal cerca del páncreas y yuxtapuesta a la cara ventral derecha de la vena portal 22,36,37. Aunque tanto el flanco superior y de la línea media ventral técnicas quirúrgicas permiten el cateterismo del tronco linfático intestinal, creemos que el enfoque de la línea media ventral permite una mejor exposición del recipiente con un espacio adecuado dentro de la parte superior del abdomen de manejar y manipular el recipiente. Es importante destacar que, como en cualquier cirugía experimental hay pasos que son particialmente crucial para el éxito del procedimiento experimental. Hay cuatro áreas clave que requieren atención cuidadosa mediante el abordaje ventral para acceder al vaso linfático intestinal. En primer lugar, se requiere un excelente suministro de sangre al intestino exteriorizado, como prolongada circulación comprometida al intestino induce isquémica necrosis de la mucosa intestinal y el fracaso quirúrgico. En este procedimiento una &quot;toalla cabestrillo &#39;reduce la tensión sobre los vasos sanguíneos mesentéricos por soportar el peso de los intestinos, lo que garantiza una excelente perfusión tisular. En segundo lugar, cuidadosas manipulaciones del buque, incluidos: la liberación del buque de los alrededores de la fascia y el tejido adiposo, insertar y sujetar firmemente el dispositivo de catéter dentro del recipiente para la recogida de la linfa a largo plazo es fundamental para el éxito del procedimiento. De hecho, se sugiere que la integridad estructural de los vasos en cerdos neonatales no es tan robusto como en animales maduros y como tal puede rasgar fácilmente 39,40 </sup&gt;. El uso de aplicadores de Q-tip para lenta y suavemente por separado las fascias y los instrumentos de calidad de punta roma para pasar la sutura bajo el buque reduce en gran medida la punción inadvertida o desgarro de los vasos linfáticos. El manejo brusco de la embarcación a menudo crea un recipiente friable con una débil estructura de toma de cateterismo muy difícil. En tercer lugar, una causa común de fallo es la cateterización &#39;tirando de salida del catéter&#39; no intencional del vaso linfático. Fijación del catéter directamente a la vasija reduce la incidencia de la pérdida de catéter. Esto se logra mediante la vinculación del catéter directamente a la vasija con la sutura caudal empleado para dilatar el vaso. Por último, es importante para asegurar un buen flujo de la linfa está presente cateterismo siguiente y antes del cierre abdomen. De hecho, si el flujo de la linfa es lenta durante el procedimiento, con el tiempo esto induce la formación de coágulos dentro del catéter y reduce notablemente el periodo de recogida de la linfa. En exper del investigadoriencia, con la colección de la linfa a largo plazo de la linfa no intestinal en ovejas 41, es muy difícil de eliminar el coágulo del catéter como el coágulo se desarrolla dentro del catéter y es profunda dentro del vaso linfático. En consecuencia, esto reducirá en gran medida (aproximadamente 40%) el número de animales por sondaje con éxito a largo plazo de experimentación (datos no publicados). Por lo tanto, si el flujo de la linfa se hace más lenta o se ha interrumpido durante el procedimiento, el catéter linfático debe ser reinsertado craneal 0,5-1 cm desde el punto de cateterismo inicial. Todos los modelos utilizados para investigar cuestiones científicas tienen limitaciones inherant y cateterización del tronco linfático intestinal no es una excepción. La limitación más pronunciado para el procedimiento es la incapacidad de aislar eficazmente, cateterizar los vasos linfáticos, y estabilizar el catéter dentro del vaso. Como tal, este procedimiento requiere que las personas con una excelente habilidad técnica y quirúrgicas. Otra limitación importante es que los tiempos quirúrgicos prolongados durante la cirugía mayor abdominal aumenta el riesgo y la morbilidad y la mortalidad post-quirúrgica. Notablemente, sin embargo, los cerdos en nuestro experimento se recuperaron rápidamente de la cirugía y no hubo complicaciones tales como infecciones, íleo intestinal, lesión tisular excesiva, o inapetencia después del procedimiento. Sin duda alguna, se observaron los cerdos a ser brillante, sensible, deambular y comer normalmente 24 horas después de la cirugía y esto continuó durante el periodo de recogida de la linfa de 7 días. Cabe destacar que, a pesar de bioquímica sérica o recuentos sanguíneos completos no se evaluaron en estos cerdos siguientes experimento de 7 días, el trabajo previo de los investigadores en la recolección de la linfa a largo plazo en el ganado ovino 41 demostró que las ovejas por sondaje nunca fueron leucopenia, linfopenia, hipoproteinemia con desequilibrios electrolíticos o clínicamente retratar la mala salud (datos no publicados). Es importante destacar que, y como se ha indicado anteriormente, esta observación se correlaciona con catheteriZed cerdos también presentan características clínicas de buena salud. Curiosamente, los investigadores observaron variaciones en el volumen de flujo de la linfa. El flujo fue mayor durante el día cuando los cerdos se alimentaban y activa con aproximadamente el 70% de la linfa recogida diaria que ocurre en este momento. El 30% restante del flujo de la linfa pasa por la noche durante el descanso y el sueño. Además de la caracterización de las muestras de ganglios se proporcionan en las Figuras 1, 2 y en la Tabla 1. La figura 1 muestra una pequeña cantidad de contaminación con aproximadamente 15% de plasma derivado ApoB100. La presencia de la lipoproteína de plasma dentro de la linfa intestinal es una observación que a menudo se produce en los cerdos 42. En lechones, la mayoría de la lipoproteína es producida por el hígado y se libera en el plasma. Desde el plasma, ApoB100 probable filtra en la recogida de lactíferos 42 y luego a través de la red vascular linfáticodesagües en el tronco linfático intestinal. Varios métodos de cromatografía se utilizan para evaluar el colesterol, los triglicéridos y otros contenidos de fosfolípidos en las muestras de ganglios recogidos 42-45. El único pico en la Figura 2 demuestra claramente el colesterol y los triglicéridos están presentes en la fracción de quilomicrones. Este método es una técnica conveniente y precisa de los perfiles de las lipoproteínas de ganglios y se debe considerar al evaluar la pureza de las muestras de quilomicrones de la linfa intestinal 45. Por último, la Tabla 1 proporciona los componentes bioquímicos de la linfa intestinal recogidos de cerdos neonatales 7 días después de la cirugía. En conclusión, la cateterización a largo plazo del tronco linfático intestinal es éxito en cerdos jóvenes. Con esta técnica, la cateterización linfático se puede utilizar para recoger e investigar los componentes del metabolismo lipídico. La pureza de la linfa, la cantidad de linfa producido y las cantidades de los componentes del metabolismo lipídicoson similares a las cantidades presentes en cerdos linfático central en otros experimentos 9,25,26,42. Los resultados indican que el empleo de un enfoque quirúrgico línea media ventral con disección de los tejidos y los vasos cuidadosa manipulación de sondar el tronco linfático intestinal en cerdos jóvenes es un método excelente para recoger grandes cantidades de linfático central.

El sistema linfático es un área poco estudiada de la fisiología. Los modelos preclínicos de cateterismo linfático se producen en diferentes especies animales 1-8 y son utilizados por las industrias farmacéuticas e instituciones de investigación para investigar los mecanismos implicados en lípidos y metabolismo de los fármacos 8-12 13-15, 16 metástasis del cáncer con el tratamiento experimental de 17, 18 y la función inmune -26. Este estudio explora el uso de cateterismo intestinal linfático tronco en un modelo de cerdo doméstico para medir los componentes del metabolismo de las lipoproteínas. metabolismo de las lipoproteínas está implicada en la producción y secreción de quilomicrones, así como cambios en los lípidos asociados y proteína total. Estas consideraciones son importantes, ya que hay grandes diferencias en el metabolismo de los lípidos entre los modelos de roedores y humanos utilizados habitualmente y, como tal, empleando modelos porcinos para recoger la linfa intestinal podría proporcionar información comparable para el estudio de lípidos mímetabo- en las personas 27-31. Varias técnicas quirúrgicas se utilizan para recoger la linfa intestinal en grandes especies animales: un enfoque hombro craneal (es decir, torácica cateterización del conducto) 5, una aproximación lateral flanco superior 32-34, y una línea media ventral o enfoque paramedian 22,35. Este video describe en detalle el procedimiento quirúrgico en los cerdos utilizando un enfoque quirúrgico línea media ventral para la cateterización del tronco linfático intestinal. Cuidadosas permisos técnica quirúrgica este método de cateterismo linfático para recoger grandes cantidades de la linfa y de sus componentes durante períodos prolongados de tiempo. Esta técnica abre una gran variedad de aplicaciones en muchas disciplinas que examinan diversas funciones fisiológicas. Las aplicaciones podrían incluir, pero no se limitan a, las lipoproteínas de todo el cuerpo y el metabolismo de los lípidos, la inmunovigilancia, génesis tumoral y la metástasis, la función intestinal, y la DESARROLLOent y la progresión de la enfermedad inflamatoria intestinal.

<table><tbody><tr><td>Miller laryngoscope blade</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>182 mm length</td></tr><tr><td>Surgivet advisor: Vital signs monitor</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Rectal temperature probe</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Mono-polar electrosurgery generator</td><td>Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum scissors</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Tuffier retractor</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Mosquito forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kelly forceps-curved (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Allis tissue forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-eye (10.2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-Adison (12.1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Needle Drivers</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Circulating water pump</td><td>Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl blanket</td><td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td>Q tip applicators</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Catheterization&amp;nbsp; tubing (4.06 OD X 2.31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Micro-Renethane implantation tubing</td></tr><tr><td>2-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 polyglactin suture</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Large animal jacket</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene wash bottles</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Animal Health</td><td></td><td>Stresnil</td></tr><tr><td>Dexmedetomidine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal&amp;nbsp; Health</td><td>05260-5</td><td>IsoFlo</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Bupenorphine hydrochloride</td><td>Champion Alstoe Animal Health</td><td></td><td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Endotracheal tube</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% Lidocaine spray</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4 % Chlorhexidine surgical scrub</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Diluted: 2.0% solution</td></tr><tr><td>3M Surgical steri- drape</td><td>3M Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS page gel</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8 % tris acetate</td></tr><tr><td>Polyvinylidene fluoride membrane</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>0.45 &amp;mu;m pore size</td></tr><tr><td>ApoB antibody&amp;nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>1:4000 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting Reagent</td><td>GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triglyceride Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Total Cholesterol Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Total Protein</td><td>&amp;nbsp;Pierce&amp;nbsp;</td><td>23225</td><td>Bicinchoninic Acid Assay</td></tr></tbody></table>

long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

<html> cateterismo linfático del tronco linfático intestinal de cerdos recién nacidos permite colección de aproximadamente 1 l / 24 h de la linfa central sobre un período de 7 días. La linfa recogida en estos experimentos contenía componentes del metabolismo de los lípidos, la proteína es decir, total de la linfa, la lipoproteína de APOB48, triglicéridos, proteínas totales, y el colesterol. La Tabla 1 destaca cantidades representativas de estos componentes lipídicos de muestras ganglios agrupados de tres cerdos. Notablemente, el flujo linfático y lípidos constituyentes están en línea con los valores de los ganglios centro reportados por otros investigadores tras la cateterización de vasos linfáticos intestinales (linfa flujo 570 ± 158 a 979 ± 284 ml / 24 hr 25, 360 ± 120 MLL / 24 hr a 1080 ± 720 ml / 24 h 26; triglicérido 687 ± 110 mg / dl 9; el colesterol 63,1 ± 5,6 mg / dl 9); que indica la colocación correcta del catéter dentro del vaso linfático. ontenido &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; 1 &quot;&gt; <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53457/53457fig2.jpg" /> Figura 2. A Liquid perfil de proteínas rápida Chromatography (FPLC) que demuestra la pureza de la preparación de quilomicrones en el cerdo neonatal linfático intestinal. Linfáticos recogidos de tres cerdos se separa usando un protocolo de ultracentrifugación en gradiente de densidad de 1,006 g / ml. El perfil muestra un pico único para el colesterol (A) y triglicéridos (B) en la muestra de linfa. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53457/53457fig2large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53457/53457fig1.jpg" /> Figura 1. Un análisis de Western blot representativo que demuestra la contribución de la apolipoproteína B100 APOB48 y lipoproteínas en cerdos neonatales linfático intestinal. La linfa recogieron del discursocerdos se separaron utilizando un protocolo de ultracentrifugación en gradiente de densidad de 1,006 g / ml. La figura muestra una pequeña cantidad de contaminación con aproximadamente el 15% de plasma derivado ApoB100. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53457/53457fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> Características ganglios </td></tr><tr><td> APOB48 (mg / ml) </td><td> 3022,4 ± 440,4 </td></tr><tr><td> Triglicéridos (mg / dL) </td><td> 607 ± 203,6 </td></tr><tr><td> Colesterol (mg / dL) </td><td> 58,5 ± 9,6 </td></tr><tr><td colspan="2"> Los resultados se expresan como media ± SD (n = 3) </td></tr></tbody></table> Tabla 1. Componentes de la linfa intestinal recogidos de cerdos neonatales 7 días después de la cirugía. Los resultados se repiten meaSures de la linfa y se expresaron como media ± DE (n = 3)

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Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Largo Plazo La cateterización de la linfa intestinal Tronco y colección de linfa en cerdos neonatales

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

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Universidad San Sebastian

Research

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Video: Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Multispectral Real-time Fluorescence Imaging for Intraoperative Detection of the Sentinel Lymph Node in Gynecologic Oncology

The prognosis in virtually all solid tumors depends on the presence or absence of lymph node metastases.1-3 Surgical treatment most often combines radical excision of the tumor with a full lymphadenectomy in the drainage area of the tumor. However, removal of lymph nodes is associated with increased morbidity due to infection, wound breakdown and lymphedema.4,5 As an alternative, the sentinel lymph node procedure (SLN) was developed several decades ago to detect the first draining lymph node from the tumor.6 In case of lymphogenic dissemination, the SLN is the first lymph node that is affected (Figure 1). Hence, if the SLN does not contain metastases, downstream lymph nodes will also be free from tumor metastases and need not to be removed. The SLN procedure is part of the treatment for many tumor types, like breast cancer and melanoma, but also for cancer of the vulva and cervix.7 The current standard methodology for SLN-detection is by peritumoral injection of radiocolloid one day prior to surgery, and a colored dye intraoperatively. Disadvantages of the procedure in cervical and vulvar cancer are multiple injections in the genital area, leading to increased psychological distress for the patient, and the use of radioactive colloid.
Multispectral fluorescence imaging is an emerging imaging modality that can be applied intraoperatively without the need for injection of radiocolloid. For intraoperative fluorescence imaging, two components are needed: a fluorescent agent and a quantitative optical system for intraoperative imaging. As a fluorophore we have used indocyanine green (ICG). ICG has been used for many decades to assess cardiac function, cerebral perfusion and liver perfusion.8 It is an inert drug with a safe pharmaco-biological profile. When excited at around 750 nm, it emits light in the near-infrared spectrum around 800 nm. A custom-made multispectral fluorescence imaging camera system was used.9.
The aim of this video article is to demonstrate the detection of the SLN using intraoperative fluorescence imaging in patients with cervical and vulvar cancer. Fluorescence imaging is used in conjunction with the standard procedure, consisting of radiocolloid and a blue dye. In the future, intraoperative fluorescence imaging might replace the current method and is also easily transferable to other indications like breast cancer and melanoma.

Fluorescence imaging is a promising innovative modality for image-guided surgery in surgical oncology. In this video we describe the technical procedure for detection of the sentinel lymph node using fluorescence imaging as showcased in gynecologic oncologicy. A multispectral fluorescence camera system, together with the fluorescent agent indocyanine green, is applied.

Multiespectrales en tiempo real imágenes de fluorescencia para la detección intraoperatoria del ganglio centinela en Oncología Ginecológica

The prognosis in virtually all solid tumors depends on the presence or absence of lymph node metastases.1-3 Surgical treatment most often combines radical ...

Investigación

Medicina

A Swine Model of Neonatal Asphyxia

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, perfusion deficit, hypoxic-ischemic encephalopathy, pulmonary hypertension, vasculopathic enterocolitis, renal failure and thrombo-embolic complications. Animal models are developed to help us understand the patho-physiology and pharmacology of neonatal asphyxia. In comparison to rodents and newborn lambs, the newborn piglet has been proven to be a valuable model. The newborn piglet has several advantages including similar development as that of 36-38 weeks human fetus with comparable body systems, large body size (&tilde;1.5-2 kg at birth) that allows the instrumentation and monitoring of the animal and controls the confounding variables of hypoxia and hemodynamic derangements.
We here describe an experimental protocol to simulate neonatal asphyxia and allow us to examine the systemic and regional hemodynamic changes during the asphyxiating and reoxygenation process as well as the respective effects of interventions. Further, the model has the advantage of studying multi-organ failure or dysfunction simultaneously and the interaction with various body systems. The experimental model is a non-survival procedure that involves the surgical instrumentation of newborn piglets (1-3 day-old and 1.5-2.5 kg weight, mixed breed) to allow the establishment of mechanical ventilation, vascular (arterial and central venous) access and the placement of catheters and flow probes (Transonic Inc.) for the continuously monitoring of intra-vascular pressure and blood flow across different arteries including main pulmonary, common carotid, superior mesenteric and left renal arteries. Using these surgically instrumented piglets, after stabilization for 30-60 minutes as defined by Z&lt;10% variation in hemodynamic parameters and normal blood gases, we commence an experimental protocol of severe hypoxemia which is induced via normocapnic alveolar hypoxia. The piglet is ventilated with 10-15% oxygen by increasing the inhaled concentration of nitrogen gas for 2h, aiming for arterial oxygen saturations of 30-40%. This degree of hypoxemia will produce clinical asphyxia with severe metabolic acidosis, systemic hypotension and cardiogenic shock with hypoperfusion to vital organs. The hypoxia is followed by reoxygenation with 100% oxygen for 0.5h and then 21% oxygen for 3.5h. Pharmacologic interventions can be introduced in due course and their effects investigated in a blinded, block-randomized fashion.

Large animal models have good translational values in the examination of physiology and pharmacology of neonatal asphyxia. Using newborn piglets, we develop an experimental protocol to simulate neonatal asphyxia which has advantages of studying the systemic and regional hemodynamics, oxygen transport with biochemical and pathologic pathways and correlations.

Un modelo porcino de la asfixia neonatal

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future therapies. Severe lung injury with a reproducible deterioration of pulmonary gas exchange and hemodynamics can be induced in anesthetized pigs using repeated lung lavages with warmed 0.9% saline (50 ml/kg body weight). Including standard respiratory and hemodynamic monitoring with clinically applied devices in this model allows the evaluation of novel therapeutic strategies (drugs, modern ventilators, extracorporeal membrane oxygenators, ECMO), and bridges the gap between bench and bedside. Furthermore, induction of lung injury with lung lavages does not require the injection of pathogens/endotoxins that impact on measurements of pro- and anti-inflammatory cytokines. A disadvantage of the model is the high recruitability of atelectatic lung tissue. Standardization of the model helps to avoid pitfalls, to ensure comparability between experiments, and to reduce the number of animals needed.

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome ARDS

Repeated pulmonary lavages in anesthetized pigs induce lung injury resembling major aspects of human acute respiratory distress syndrome (ARDS). For this purpose the lungs are repeatedly lavaged with 0.9% saline at 37 &#176;C. The goal of the protocol is a reproducible mitigation of gas exchange and hemodynamics for research in ARDS.

Lavado inducida por agotamiento de surfactante en los cerdos como modelo del síndrome de distrés respiratorio agudo (SDRA)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future ...

Surgical Placement of Catheters for Long-term Cardiovascular Exercise Testing in Swine

This protocol describes the surgical procedure to chronically instrument swine and the procedure to exercise swine on a motor-driven treadmill. Early cardiopulmonary dysfunction is difficult to diagnose, particularly in animal models, as cardiopulmonary function is often measured invasively, requiring anesthesia. As many anesthetic agents are cardiodepressive, subtle changes in cardiovascular function may be masked. In contrast, chronic instrumentation allows for measurement of cardiopulmonary function in the awake state, so that measurements can be obtained under quiet resting conditions, without the effects of anesthesia and acute surgical trauma. Furthermore, when animals are properly trained, measurements can also be obtained during graded treadmill exercise.
Flow probes are placed around the aorta or pulmonary artery for measurement of cardiac output and around the left anterior descending coronary artery for measurement of coronary blood flow. Fluid-filled catheters are implanted in the aorta, pulmonary artery, left atrium, left ventricle and right ventricle for pressure measurement and blood sampling. In addition, a 20 G&#160;catheter is positioned in the anterior interventricular vein to allow coronary venous blood sampling.
After a week of recovery, swine are placed on a motor-driven treadmill, the catheters are connected to pressure and flow meters, and swine are subjected to a five-stage progressive exercise protocol, with each stage lasting 3 min. Hemodynamic signals are continuously recorded and blood samples are taken during the last 30 sec of each exercise stage.
The major advantage of studying chronically instrumented animals is that it allows serial assessment of cardiopulmonary function, not only at rest but also during physical stress such as exercise. Moreover, cardiopulmonary function can be assessed repeatedly during disease development and during chronic treatment, thereby increasing statistical power and hence limiting the number of animals required for a study.

Here we present a protocol to assess cardiopulmonary function in awake swine, at rest and during graded treadmill exercise. Chronic instrumentation allows for repeated hemodynamic measurements uninfluenced by cardiodepressive anesthetic agents.

La colocación quirúrgica de catéteres de larga duración cardiovascular prueba de esfuerzo en los cerdos

This protocol describes the surgical procedure to chronically instrument swine and the procedure to exercise swine on a motor-driven treadmill. Early ...

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces and has been implicated in the clearance of neurotoxic peptides such as amyloid-beta. Impaired glymphatic function exacerbates disease pathology in animal models of neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's, which highlights the importance of understanding this clearance system. The glymphatic system is often studied by cisterna magna cannulations (CMc), where tracers are delivered directly into the cerebrospinal fluid (CSF). Most studies, however, have been carried out in rodents. Here, we demonstrate an adaptation of the CMc technique in pigs. Using CMc in pigs, the glymphatic system can be studied at a high optical resolution in gyrencephalic brains and in doing so bridges the knowledge gap between rodent and human glymphatics.

This article presents a step-by-step protocol for the direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs.

Implantación directa de cánula en la Cisterna Magna de Cerdos

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Neurociencias

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important phenomenon in the gut immunity. The stroma of secondary lymphoid organs, such as Peyer&#8217;s patches (PPs) or mesenteric lymph nodes, are where na&#239;ve lymphocytes sense antigens. Na&#239;ve lymphocytes circulate through the bloodstream to reach high endothelial venules, the portal of entry into PPs. Some immunomodulators are estimated to influence lymphocyte migration, but the precise evaluation of microcirculation dynamics is very difficult, and establishing a method to observe lymphocyte migration in vivo can contribute to the clarification of the precise mechanisms. We refined the method of collecting lymphocytes from the lymph duct and observing the detailed dynamics of gut-tropic lymphocytes in rat PPs. We chose confocal laser scanning microscopy to observe rat PPs in vivo and recorded it using time-lapse photography. We can now obtain clear images that can contribute to the analysis of lymphocyte dynamics.

Here, we describe a precise method for collecting thoracic duct lymphocytes and observing the migration of gut-tropic lymphocytes in rat Peyer&#8217;s patches for 3 hours using time-lapse photography. This technique can clarify how the dynamics of lymphocytes are affected under inflammatory conditions.

Observación microscópica de la dinámica de linfocitos en los parches de Rat Peyer

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries does not solely rely on the research team's surgical skills; perioperative care and management procedures, like intubation, central venous line, and arterial line placement, are necessary and of the utmost importance for favorable experiment results. As it is uncommon for research teams to have anesthesiologists or any other staff other than the surgical team, the surgical team involved in translational research must acquire and/or develop the skills to perform the perioperative care. The purpose of this paper is to show the techniques of intubation, central venous catheter, and arterial line placement used and perfected at the Toronto Organ Preservation Laboratory over the last 10 years, to be used as a reference for future researchers joining either this team or any other lab performing translational research protocols in swine and/or abdominal transplantation.

To obtain the best possible results, surgeons performing translational research experiments should be proficient at intubation and vascular line placement. This paper describes the techniques used by the Toronto Organ Preservation Laboratory to perform these procedures.

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries ...

Catéter Hickman para acceso vascular a largo plazo en cerdos

Hickman Catheter Use for Long-Term Vascular Access in a Preclinical Swine Model

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood monitoring and reliable intravenous fluid and drug administration. Specifically, the tunneled multi-lumen Hickman catheter (HC) is commonly used in swine models due to its lower extrication and complication rates. Despite fewer complications relative to other CVCs, HC-related morbidity presents a significant challenge, as it can significantly delay or otherwise negatively impact ongoing studies. The proper insertion and maintenance of HCs is paramount in preventing these complications, but there is no consensus on best practices. The purpose of this protocol is to comprehensively describe an approach for the insertion and maintenance of a tunneled HC in swine that mitigates HC-related complications and morbidity. The use of these techniques in &gt;100 swine has resulted in complication-free patent lines up to 8 months and no catheter-related mortality or infection of the ventral surgical site. This protocol offers a method to optimize the lifespan of the HC and guidance for approaching issues during use.

Autor destacado: Uso del catéter Hickman para el acceso vascular a largo plazo en un modelo porcino preclínico  

A reliable and reproducible approach for the insertion and maintenance of a tunneled Hickman catheter for long-term vascular access in swine is described. Placement of a central venous catheter allows for convenient daily sampling of whole blood from awake animals and intravenous administration of medication and fluids.

Uso del catéter Hickman para el acceso vascular a largo plazo en un modelo porcino preclínico

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood ...

Largo Plazo La cateterización de la linfa intestinal Tronco y colección de linfa en cerdos neonatales

Resumen

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Multiespectrales en tiempo real imágenes de fluorescencia para la detección intraoperatoria del ganglio centinela en Oncología Ginecológica

Un modelo porcino de la asfixia neonatal

Lavado inducida por agotamiento de surfactante en los cerdos como modelo del síndrome de distrés respiratorio agudo (SDRA)

La colocación quirúrgica de catéteres de larga duración cardiovascular prueba de esfuerzo en los cerdos

Implantación directa de cánula en la Cisterna Magna de Cerdos

Observación microscópica de la dinámica de linfocitos en los parches de Rat Peyer

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Uso del catéter Hickman para el acceso vascular a largo plazo en un modelo porcino preclínico

Uso del catéter Hickman para el acceso vascular a largo plazo en un modelo porcino preclínico

Uso del catéter Hickman para el acceso vascular a largo plazo en un modelo porcino preclínico