The authors acknowledge the following funding sources, Whittier Foundation, Harrington Foundation, National Institutes of Health and Research to Prevent Blindness.

Todos los ojos enucleados se obtuvieron de un matadero y todos los experimentos se realizaron de acuerdo con las leyes de bioseguridad institucionales. <ol><li> Asegure ojo enucleado abajo sobre una superficie. Para ello, la colocación de pasadores de tejido a través del exceso de tejido alrededor de los ojos y la obtención abajo en un tablero de espuma de poliestireno. </li><li> Diseccionar y separar la conjuntiva del ojo perilimbal. <ol><li> Utilice unas pinzas finas (0,3 fórceps) y micro tijeras (tijeras Westcott) para incidir la conjuntiva en el limbo y sin rodeos diseccionarlo de la esclerótica. Cortar la conjuntiva a lo largo del limbo como la disección roma procede a permitir una mayor disección. </li><li> Retire conjuntiva todo el camino alrededor del ojo (360 grados) para exponer tanto esclerótica posible. NOTA: Es conveniente dejar una pequeña cantidad de la conjuntiva para facilitar fijando el ojo con los pasadores quirúrgicos o un fórceps durante el resto del procedimiento. </li></ol></li><li> Crear un colgajo escleral de espesor total a lo largo de unolado del ojo (hoja de bisturí 69). <ol><li> Hacer un ~ 5 mm incisión escleral paralela al limbo y 3 mm posterior al limbo cortando suavemente en la esclerótica con un bisturí (hoja de bisturí 11) hasta que coroides pigmentación oscura es visible. Tenga cuidado de no incidir la propia coroides. </li><li> Diseccionar cuidadosamente a lo largo del plano entre la esclerótica y la coroides, ya sea con tijeras (utilizando disección roma) o con el bisturí, hasta que sea posible para agrandar el espacio potencial entre estos tejidos empujando la coroides suavemente hacia adentro. </li><li> Hacer otra incisión escleral perpendicular a la primera incisión escleral con micro tijeras afiladas, la creación de una incisión en forma de T. </li><li> Luego continuar para diseccionar sin rodeos de una manera circunferencial para eliminar el tejido de la esclerótica de la coroides subyacente y empuje suavemente la coroides lejos de la esclerótica como se mencionó anteriormente. </li><li> Agrandar el colgajo escleral según sea necesario. <ol><li> Suavemente blunt diseccionar la coroides lejos de la escleróticadurante todo el proceso. </li><li> Ampliar la solapa hasta que la incisión hecha perpendicular al limbo alcanza el nervio óptico y la incisión hecha paralela al limbo es de al menos un tercio de la circunferencia del ojo (45º). </li><li> Utilice el colgajo escleral como una fuente de apalancamiento para manipular el ojo durante la disección roma. El contra-tracción en la solapa hace que sea más fácil para la disección roma. </li></ol></li><li> Repita el paso anterior en el otro colgajo escleral. </li></ol></li><li> Cortar las aletas esclerales para exponer una gran área de coroides. </li><li> Continuar la incisión hecha en el paso 3 alrededor de la circunferencia del ojo (360 grados). </li><li> Retire el tejido coroides-retina restante. <ol><li> Dentro de la región expuesta, utilice una punta de algodón para cepillar suavemente el tejido coroides retina restante. Alternativamente, agarra suavemente el tejido con pinzas y despegarlo el cuerpo vítreo subyacente. </li><li> Si es necesario hacer una incisión en la coroides starting desde el nervio óptico. Luego retire la coroides suavemente para exponer la retina y la corteza vítrea. </li></ol></li><li> Continuar contundente disección de la coroides lejos de la esclerótica y luego retire la coroides para obtener todo el vítreo, intacto. </li><li> Utilice el borde escleral unido a la córnea para colocar todo el vítreo en el lugar deseado. En este punto, el vítreo se adjunta a la esclerótica anterior y la lente. </li><li> Blunt diseccionar el vítreo desde el interior de la esclerótica, alrededor de la lente, la eliminación de todos esclerótica. </li><li> Utilice una herramienta contundente para sacar la lente de distancia del vítreo si es necesario. Usa el ejemplo de varios experimentos vitreodynamic. <ol><li> Coloque la muestra en un vaso de precipitados de vidrio con superficie conocida se expone al aire. Coloque oxígeno sonda sensible en el borde de la muestra. Use un micro-manipulador para mover la sonda a una distancia conocida (r) en la muestra. </li><li> Utilice Ley de Fick para obtener la ecuación de difusión teórica. Con la data recogido en el paso 10.1, obtenga el término coeficiente de difusión experimental / reacción, etc. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siggers, J. H., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+Mechanics+of+the+Eye%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Fluid+Mechanics%22%5BJournal%5D)">Fluid Mechanics of the Eye.</a> Annual Review of Fluid Mechanics. 44 (1), 347-372 (2012).</li>
<li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+human+vitreous+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in human vitreous structure.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 225 (2), 89-93 (1987).</li>
<li>Grignolo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrous+components+of+the+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22AMA+Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Fibrous components of the vitreous body.</a> AMA Arch Ophthalmol. 47 (6), 760-774 (1952).</li>
<li>Gisladottir, S., Loftsson, T., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+characteristics+of+vitreous+humour+and+saline+solution+follow+the+Stokes+Einstein+equation%5BTitle%5D)+AND+%22G+Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Diffusion characteristics of vitreous humour and saline solution follow the Stokes Einstein equation.</a> G Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 247 (12), 1677-1684 (2009).</li>
<li>Xu, J., Heys, J. J., Barocas, V. H., Randolph, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeability+and+diffusion+in+vitreous+humor%3A+implications+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Permeability and diffusion in vitreous humor: implications for drug delivery.</a> Pharm Res. 17 (6), 664-669 (2000).</li>
<li>Watts, F., Tan, L. E., Wilson, C. G., Girkin, J. M., Tassieri, M., Wright, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+micro-rheology+of+the+vitreous+humor+using+an+optically+trapped+local+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Optics%22%5BJournal%5D)">Investigating the micro-rheology of the vitreous humor using an optically trapped local probe.</a> Journal of Optics. 16 (1), 015301(2014).</li>
<li>Skeie, J. M., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+human+vitreous+body+elements+for+proteomic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of human vitreous body elements for proteomic analysis.</a> J Vis Exp. (47), e2455(2011).</li>
<li>Abdallah, W., Ameri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreal+oxygenation+in+retinal+ischemia+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Vitreal oxygenation in retinal ischemia reperfusion.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (2), 1035-1042 (2011).</li>
<li>Goldenberg, D., Trese, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+vitreodynamics%3A+what+is+it%3F+Why+is+it+important%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic vitreodynamics: what is it? Why is it important.</a> Expert Review of Ophthalmology. 3 (3), 273-277 (2008).</li>
<li>Choonara, Y. E., Pillay, V., Danckwerts, M. P., Carmichael, T. R., du Toit, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+implantable+intravitreal+drug+delivery+technologies+for+the+treatment+of+posterior+segment+eye+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">A review of implantable intravitreal drug delivery technologies for the treatment of posterior segment eye diseases.</a> J Pharm Sci. 99 (5), 2219-2239 (2010).</li>
<li>Balachandran, R. K., Barocas, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+modeling+of+drug+delivery+to+the+posterior+eye%3A+effect+of+active+transport+and+loss+to+choroidal+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Computer modeling of drug delivery to the posterior eye: effect of active transport and loss to choroidal blood flow.</a> Pharm Res. 25 (11), 2685-2696 (2008).</li>
<li>Smith, C. a, Newson, T. a, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+modeling+ocular+drug+transport+and+flow+through+the+eye+using+micro-CT%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">A framework for modeling ocular drug transport and flow through the eye using micro-CT.</a> Phys Med Biol. 57 (19), 6295-6307 (2012).</li>
<li>Quiram, P. A., Leverenz, V. R., Baker, R. M., Dang, L., Giblin, F. J., Trese, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplasmin-induced+posterior+vitreous+detachment+affects+vitreous+oxygen+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Microplasmin-induced posterior vitreous detachment affects vitreous oxygen levels.</a> Retina. 27 (8), 1090-1096 (2007).</li>
<li>Shui, Y., Holekamp, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gel+state+of+the+vitreous+and+ascorbate-dependent+oxygen+consumption%3A+relationship+to+the+etiology+of+nuclear+cataracts%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The gel state of the vitreous and ascorbate-dependent oxygen consumption: relationship to the etiology of nuclear cataracts.</a> Arch Ophthalmol. 127 (4), 475-482 (2009).</li>
<li>Burk, S. E., Da Mata, A. P., Snyder, M. E., Schneider, S., Osher, R. H., Cionni, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+vitreous+using+kenalog+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Visualizing vitreous using kenalog suspension.</a> J Cataract Refract Surg. 29 (4), 645-651 (2003).</li>
<li>Spaide, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+the+Posterior+Vitreous+with+Dynamic+Focusing+and+Windowed+Averaging+Swept+Source+Optical+Coherence+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Visualization of the Posterior Vitreous with Dynamic Focusing and Windowed Averaging Swept Source Optical Coherence Tomography.</a> Am J Ophthalmol. S0002-9394 (14), 00537-00536 (2014).</li>
<li>Domalpally, A., Gangaputra, S., Danis, R. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDomalpally%2C+A+%22Diseases+of+the+Vitreo-Macular+Interface%22">Diseases of the Vitreo-Macular Interface</a>. 21, Springer. Berlin Heidelberg: Berlin, Heidelberg. 21-27 (2014).</li>
<li>Stocchino, R., Repetto, A., Cafferata, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+investigation+of+vitreous+humour+motion+within+a+human+eye+model%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Experimental investigation of vitreous humour motion within a human eye model.</a> Phys Med Biol. 50 (19), 4729-4743 (2005).</li>
</ol>

The authors have nothing to disclose.

Existen dos pasos críticos que se deben realizar con cuidado durante la disección vítreo. Paso 3, la creación de un colgajo escleral de grosor completo, es crucial para toda la disección. Se debe tener cuidado para no cortar en la coroides cuando se crea el colgajo escleral de grosor completo. El otro paso fundamental está diseccionando de distancia de la esclerótica de la coroides. Este paso debe hacerse con cuidado para evitar la creación de múltiples orificios de la coroides de la que el humor vítreo puede derramarse. Hay una manera de modificar el protocolo y todavía diseccionar intacta humor vítreo conjunto. Paso 6 se puede retrasar hasta el paso 8. La coroides puede ser eliminado al final después de que el tejido vítreo se coloca en la ubicación deseada. La limitación de este procedimiento es que durante la disección, sólo hay señales visuales para sugerir el éxito y la precisión de la disección vítreo intacto. Desde el núcleo vítreo y la corteza son ambos transparente y indistinguibles a simple vista, estepuede ser un reto. Por darse cuenta de la adhesión de la retina en el vítreo es posible determinar si se ha producido una disección éxito de la corteza vítreo. De lo contrario, las sustancias farmacológicas, tales como Kenalog, se pueden utilizar para mejorar la visualización 15 del vítreo pero no pueden permitir fácilmente a uno distinguir entre la corteza y el núcleo vítreo vítreo. Otra limitación de esta técnica es que es más eficaz para la disección de vítreo gel. Gel vítreo humano es un tejido no regenerativa que se somete a la licuefacción con la edad. Esta licuefacción nos impide disección completamente todo el vítreo, intacta desde el ojo. Por lo tanto, nuestra técnica se extiende sólo al vítreo de los animales, como vacas, cerdos o conejos o los ojos de los seres humanos jóvenes que no tienen cantidades significativas de licuefacción. El humor vítreo en estos animales tiende a estar completamente en estado de gel. Sin embargo, en la actualidad, no existe un método establecido, que ha sido descRibed en detalle, para la disección de toda vítreo intacto de ojos de cadáver. En la actualidad, las únicas técnicas de disección vítreas que han sido bien detallados implican la disección de regiones únicas pero separadas del vítreo 7 o la disección de sólo el núcleo vítreo 6. Las aplicaciones de diseccionado humor vítreo intacta están bajo apreciadas y subutilizadas. Experiencia quirúrgica con el vítreo, así como los estudios clínicos, histopatológicos y bioquímicos sugieren que las propiedades químicas y estructurales del vítreo pueden variar significativamente 16,17. Por lo tanto, es necesario para preservar la estructura de todo el cuerpo vítreo para estudiar la función del vítreo en la fisiología ocular y la anatomía. Vítreo intacto puede explantó a un globo transparente para una mejor visualización durante los experimentos. Ellos pueden entonces ser utilizados para una variedad de pruebas / químicas mecánicos para mejorar las mediciones de prop física / biomecánicopropie- del humor vítreo. Por ejemplo, se sugiere que el vítreo intacta toda diseccionado se puede utilizar en lugar de la solución salina, sustitutos viscosos, o núcleo vítreo en los experimentos de reología citados 6,18.

El objetivo de este método es al detalle una técnica para aislar todo un cuerpo vítreo, intacta, con el núcleo vítreo y la corteza intacta, a partir de un ojo de cadáver, para los fines de análisis vitreodynamic. A medida que el campo de la fisiología del vítreo ha crecido, investigadores multidisciplinarios, como la mecánica de fluidos investigadores, están investigando las propiedades físicas y biomecánicas del vítreo 1. Para ello, es esencial al detalle una técnica para aislar todo el cuerpo vítreo intacta para ayudar a los investigadores multidisciplinarios. Sebag et al. 2 y otros 3 elegantes realizaron disecciones vítreas enteros en los ojos de cadáveres humanos y mostraban ilustraciones de los resultados. Sin embargo, la técnica utilizada no se describió en detalle los no expertos y no sería capaz de replicarse independientemente del método. Otros estudios han cosechado vítreo de los ojos de cadáver utilizando métodos más simples como la aspiración o la disección parcial,ambos de los cuales no dan lugar a todo un cuerpo vítreo, intacto. Gisladottis et al. 4 y Xu et al. 5 investigar la permeabilidad en el humor vítreo cosechado de ojos de cadáver. Sin embargo, desde que se describe ningún método de extracción del vítreo, se asumió que aspiran el humor vítreo con una jeringa. Watts et al. 6 fue un paso más allá mediante la descripción de un método de aislamiento de conejo humor vítreo con una técnica quirúrgica. Sin embargo, este método da lugar a un aislamiento de sólo el núcleo vítreo y no la corteza vítreo. Skeie et al. 7 más tarde organizó el vítreo en 4 regiones únicas y elegantes describe un método para diseccionar cada parte para su análisis. Esta técnica sin embargo, no resulta en una vítreo intacta como un todo. La técnica actual fue desarrollado para facilitar experimentos biofísicos que se realizan en la actualidad sólo a los ojos de cadáver. Los métodos anteriores, como se ha descrito unBove, están limitados porque 1) no aislar por completo a todo el cuerpo vítreo, núcleo vítreo 2) cosechada y la corteza se homogeneizan, 3) estructura anatómica vítreo no se mantiene, o 4) técnicas de disección no se detallan de manera adecuada para la replicación por investigadores de otros campos . Además, debido a la opacidad de la esclerótica y la coroides, la visualización del cuerpo vítreo está limitado en el globo ocular intacta. Esto limita la precisión y la viabilidad de las mediciones que se pueden hacer dentro de todo el ojo. Adicionalmente, los estructuras anatómicas que rodean a la del vítreo puede confundir del estudio de propiedades bioquímicas y físicas del humor vítreo. En los últimos años, el cuerpo de la ciencia vítreo ha crecido enormemente y no hay razón para creer que todo el cuerpo vítreo tiene diferentes propiedades que sus partes individuales. Existe un creciente interés en la investigación de las propiedades físicas, biomecánicos, y químicas del vítreo para vitreodynamics research, que tiene aplicaciones en la medicina clínica, tales como la administración de fármacos, la oxigenación intravítrea 8 y vitrectomía. Vitreodynamics farmacológicos, que utiliza agentes farmacológicos para manipular el vítreo, se pueden utilizar para mejorar los resultados de vitrectomía 9. Propiedades biomecánicas se utilizan para modelar el flujo de fluido vítreo, que se puede utilizar para mejorar las tecnologías de administración de fármacos intravítrea 10-12. Propiedades físicas de los diversos segmentos del vítreo son cruciales para entender el transporte de oxígeno vítreo-retiniana 13. La técnica de disección vítreo propuesto puede ser utilizado para estudiar diversas propiedades del humor vítreo intacto. Permite sobremesa experimentos por hacer en los cuerpos vítreos enteros, intactos, con mejor visualización. En resumen, los métodos actuales para el estudio del vítreo o bien no describen adecuadamente, o dan lugar a un aislamiento incompleta el núcleo vítreo y la corteza. Por lo tanto, hay una necesidad de realizar experimentos en un modelo de ojo transparente al tiempo que conserva la anatomía del vítreo que existe en el ojo de cadáver.

<table><tbody><tr><td>0.3 forceps</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E1793</td><td></td></tr><tr><td>Westcott Tenotomy Scissors Curved Right</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E3320 R</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel Handle No. 3</td><td>VWR</td><td>25607-947</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel Blade, #11, for #3 Handle</td><td>VWR</td><td>470174-844</td><td></td></tr></tbody></table>

whole vitreous humor dissection for vitreodynamic analysis

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

Siguiendo el protocolo dará lugar a una disección vítreo éxito con el núcleo y la corteza (Figura 3) intacta. Esto es evidente a partir de las piezas residuales de retina adheridas a la corteza vítreo. Intacto humor vítreo conjunto se puede utilizar de varias maneras para experimentos vitreodynamic específicos. En nuestro caso, el índice de difusión del oxígeno en humor vítreo intacto y TI de constante de tiempo correspondiente se estudió (Figura 2). Vítreo que se disecó (núcleo y la corteza) usando nuestro método se colocó en un matraz de vidrio con un área de superficie expuesta conocido. Esto se comparó con vítreo que se cosechó utilizando un método publicado previamente que sólo aísla núcleo vítreo 6. Todos los demás factores se mantienen consistentes entre los grupos experimentales y de control. La superficie vítrea se expuso al aire, que tiene una tensión de oxígeno conocido (~ 160 mmHg). La tensión de oxígeno dentro del vítreo fue baja (&lt;10 mmHg). Basado en la tasa de vitrconsumo de oxígeno eous determine Shui et al. 14 de vítreo en el estado de gel, podemos usar la ecuación para el transporte de oxígeno 1 dimensiones (en formas de estado estable o inestable). Mediante la medición de la tensión de oxígeno una distancia conocida dentro de la superficie vítrea, podemos validar experimentalmente el coeficiente de difusión. La tensión de oxígeno se registró con una sonda de oxígeno, tal como Oxford, y la tasa de error fue de ± 10%. Una muestra se recogió cada 30 seg. La presencia de corteza vítreo afecta a la tasa de difusión de oxígeno en el vítreo media. En presencia de corteza vítreo, la difusión del oxígeno se produce durante un intervalo de tiempo más largo. Las propiedades físicas de la base del vítreo y la corteza tienen un impacto en la salud y enfermedad. Por ejemplo, localizada, la oxigenación intraocular complementaria ha sido propuesto como un tratamiento para la isquemia retiniana 8. La comprensión de los diferentes coeficientes de difusión de oxígeno a través de la corteza vítreanúcleo permitirá a los investigadores predecir la tasa real de la entrega de oxígeno a la retina. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52759/52759fig1.jpg" /> Figura 1:. Vista en sección transversal del ojo se presentan las estructuras anatómicas relevantes (modificado de Instituto Nacional del Ojo de los Institutos Nacionales de Salud) La córnea es el tejido transparente que forma la anterior más la sección del ojo y proporciona una parte significativa de la de óptica ojo poder. El limbo es la unión de la córnea, conjuntiva y la esclerótica. La esclerótica se extiende desde la limbo a la posterior más aspectos de ojo donde se une con el nervio óptico. La conjuntiva es un epitelio delgada que recubre el exterior del ojo y forma el límite entre el ambiente externo y la esclerótica. Los componentes internos del ojo consisten en la cámara anterior, cristalino, iris, cuerpo ciliar, la cámara posterior, la cavidad posterior, la retina y la coroides. El vitreous núcleo comprende la región central del cuerpo vítreo, dentro de la cavidad posterior del ojo. La corteza del vítreo se encuentra alrededor del cuerpo vítreo y se une a la retina en varios puntos, incluyendo la pars plana, vasos retinianos, disco óptico y la mácula. La base del vítreo es una zona tridimensional que se extiende desde ~ 2 mm anterior a la ora serrata a 3 mm posterior a la ora serrata. La coroides es una capa de tejido vascular que se encuentra entre la esclerótica y la retina y proporciona suministro de sangre a la retina externa. La retina es la capa neurosensorial del ojo que subordina la capacidad de enviar la luz del ojo. La esclerótica es la capa opaca blanca que ofrece mayor del soporte estructural a la pared del ojo. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52759/52759fig2.jpg" /> Figura 2:. Parcela de tensión de oxígeno del humor vítreo contra el tiempo Parcela de la tensión de oxígeno en el núcleo vítreo (línea verde) en comparación con todo intacto vitreous (línea azul). Una sonda de detección de oxígeno se coloca en el centro de la muestra y la muestra se expone al aire que tiene una tensión de oxígeno del 160 mmHg. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52759/52759fig3.jpg" /> Figura 3: Ejemplos de aislado cuerpo vítreo conjunto. Foto superior es un ejemplo de todo el cuerpo vítreo intacta todavía unido a la llanta escleral. Foto Medio es un ejemplo de todo el cuerpo vítreo intacta sin esclerótica pero con algo de tejido de la retina restante. El fondo es un ejemplo de todo el cuerpo vítreo, intacto.

Watch this Scientific Journal Video about Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis at JoVE.com

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

Todo el humor vítreo Disección de Análisis Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

whole-vitreous-humor-dissection-for-vitreodynamic-analysis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

11.4K vistas.  University of Southern California. The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

Video: Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions between vitreous substructures and the retina underlie several vitreoretinal diseases, including retinal tear and detachment, macular pucker, macular hole, age-related macular degeneration, vitreomacular traction, proliferative vitreoretinopathy, proliferative diabetic retinopathy, and inherited vitreoretinopathies. 1,2 The molecular composition of the vitreous substructures is not known. Since the vitreous body is transparent with limited surgical access, it has been difficult to study its substructures at the molecular level. We developed a method to separate and preserve these tissues for proteomic and biochemical analysis. The dissection technique in this experimental video shows how to isolate vitreous base, anterior hyaloid, vitreous core, and vitreous cortex from postmortem human eyes. One-dimensional SDS-PAGE analyses of each vitreous component showed that our dissection technique resulted in four unique protein profiles corresponding to each substructure of the human vitreous body. Identification of differentially compartmentalized proteins will reveal candidate molecules underlying various vitreoretinal diseases.

This video shows an effective technique for differentiating and dissecting the various semi-transparent structures of the human vitreous body in post mortem eyes.

La disección de los elementos humanos Cuerpo Vítreo para el análisis proteómico

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Investigación

Medicina

Diagnóstico del linfoma vitreorretiniano mediante ADN libre de células

Cell-Free DNA Extraction of Vitreous and Aqueous Humor Specimens for Diagnosis and Monitoring of Vitreoretinal Lymphoma

Vitreoretinal lymphoma (VRL) represents an aggressive lymphoma, often categorized as primary central nervous system diffuse large B-cell lymphoma. To diagnose VRL, specimens such as vitreous humor and, more recently, aqueous humor are collected. Diagnostic testing for VRL on these specimens includes cytology, flow cytometry, and molecular testing. However, both cytopathology and flow cytometry, along with molecular testing using cellular DNA, necessitate intact whole cells. The challenge lies in the fact that vitreous and aqueous humor typically have low cellularity, and many cells get destroyed during collection, storage, and processing. Moreover, these specimens pose additional difficulties for molecular testing due to the high viscosity of vitreous humor and the low volume of both vitreous and aqueous humor. This study proposes a method for extracting cell-free DNA from vitreous and aqueous specimens. This approach complements the extraction of cellular DNA or allows the cellular component of these specimens to be utilized for other diagnostic methods, including cytology and flow cytometry.

Autor destacado: Avance en el diagnóstico de VRL mediante la extracción de ADN libre de células del humor vítreo 

A procedure to extract cell-free DNA from vitreous and aqueous humor to perform molecular studies for diagnosing vitreoretinal lymphoma is established here. The method offers the ability to concurrently extract DNA from the cellular component of the sample or to reserve it for ancillary testing.

Extracción de ADN libre de células de muestras de humor vítreo y acuoso para el diagnóstico y seguimiento del linfoma vitreorretiniano

Vitreoretinal lymphoma (VRL) represents an aggressive lymphoma, often categorized as primary central nervous system diffuse large B-cell lymphoma. To ...

Investigación sobre el cáncer

Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses

While the mouse retina has emerged as an important genetic model for inherited retinal disease, the mouse vitreous remains to be explored. The vitreous is a highly aqueous extracellular matrix overlying the retina where intraocular as well as extraocular proteins accumulate during disease.1-3 Abnormal interactions between vitreous and retina underlie several diseases such as retinal detachment, proliferative diabetic retinopathy, uveitis, and proliferative vitreoretinopathy.1,4 The relative mouse vitreous volume is significantly smaller than the human vitreous (Figure 1), since the mouse lens occupies nearly 75% of its eye.5 This has made biochemical studies of mouse vitreous challenging. In this video article, we present a technique to dissect and isolate the mouse vitreous from the retina, which will allow use of transgenic mouse models to more clearly define the role of this extracellular matrix in the development of vitreoretinal diseases.

The dissection technique illustrates evisceration of the vitreous, retina, and lens from the mouse eye, separation by centrifugation, and characterization with protein assays.

Evisceración de vítreo y retina del ratón para análisis proteómico

While the mouse retina has emerged as an important genetic model for inherited retinal disease, the mouse vitreous remains to be explored. The vitreous is ...

Biología

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

Un Paso a Paso Protocolo para la cirugía subretiniana en conejos

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Microsurgical Dissection and Tissue Clearing for High Resolution Intact Whole Retina and Vitreous Imaging

Neuronal and vascular structures of the retina in physiologic and pathologic conditions can be better visualized and characterized by using intact whole retina imaging techniques compared to conventional retinal flat mount preparations and sections. However, immunofluorescent imaging of intact whole retina is hindered by the opaque coatings of the eyeball, i.e., sclera, choroid, and retinal pigment epithelium (RPE) and the light scattering properties of retinal layers that prevent full thickness high resolution optical imaging. Chemical bleaching of the pigmented layers and tissue clearing protocols have been described to address these obstacles; however, currently described methods are not suitable for imaging endogenous fluorescent molecules such as green fluorescent protein (GFP) in intact whole retina. Other approaches bypassed this limitation by surgical removal of pigmented layers and the anterior segment of the eyeball allowing intact eye imaging, though the peripheral retina and hyaloid structures were disrupted. Presented here is an intact whole retina and vitreous immunofluorescent imaging protocol that combines surgical dissection of the sclera/choroid/retina pigment epithelium (RPE) layers with a modified tissue clearing method and light sheet fluorescent microscopy (LSFM). The new approach offers an unprecedented view of&#160;unperturbed vascular and neuronal elements of the retina as well as the vitreous and hyaloid vascular system in pathologic conditions.

<meta charset="utf8"></head><body>Disección microquirúrgica y limpieza de tejido para obtener imágenes de retina y vítreo intactas de alta resolución

Presented here is a protocol for intact whole retina imaging in which the outer opaque/pigmented layers of the eyeball are surgically removed, and optical clearing is applied to render retina transparent enabling the visualization of the peripheral retina and hyaloid vasculature in intact retina using light sheet fluorescent microscopy.

Disección microquirúrgica y limpieza de tejido para obtener imágenes de retina y vítreo intactas de alta resolución

Neuronal and vascular structures of the retina in physiologic and pathologic conditions can be better visualized and characterized by using intact whole ...

Neurociencias

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic nerve and retinal ganglion cell (RGC) degeneration, resulting in visual dysfunction by interrupting the transmission of visual information from the eye to the brain. Elevated intraocular pressure is the most important risk factor; thus, several models of ocular hypertension have been developed in rodents by either genetic or experimental approaches to investigate the causes and effects of the disease. Among those, some limitations have been reported such as surgical invasiveness, inadequate functional assessment, requirement of extensive training, and highly variable extension of retinal damage. The present work characterizes a simple, low-cost, and efficient method to induce ocular hypertension in rodents, based on low-temperature, full-circle cauterization of the limbal vascular plexus, a major component of aqueous humor drainage. The new model provides a technically easy, noninvasive, and reproducible subacute ocular hypertension, associated with progressive RGC and optic nerve degeneration, and a unique post-operative clinical recovery rate that allows in vivo functional studies by both electrophysiological and behavioral methods.

The goal of this protocol is to characterize a novel model of glaucomatous neurodegeneration based on 360&#176; thermic cauterization of limbal vascular plexus, inducing subacute ocular hypertension.

Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

Trasplante de epitelio pigmentario retiniano en un modelo de primate no humano para enfermedades degenerativas de la retina

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Todo el humor vítreo Disección de Análisis Vitreodynamic

Resumen

Explorar más videos

La disección de los elementos humanos Cuerpo Vítreo para el análisis proteómico

Extracción de ADN libre de células de muestras de humor vítreo y acuoso para el diagnóstico y seguimiento del linfoma vitreorretiniano

Extracción de ADN libre de células de muestras de humor vítreo y acuoso para el diagnóstico y seguimiento del linfoma vitreorretiniano

Extracción de ADN libre de células de muestras de humor vítreo y acuoso para el diagnóstico y seguimiento del linfoma vitreorretiniano

Evisceración de vítreo y retina del ratón para análisis proteómico

Un Paso a Paso Protocolo para la cirugía subretiniana en conejos

Disección microquirúrgica y limpieza de tejido para obtener imágenes de retina y vítreo intactas de alta resolución

Disección microquirúrgica y limpieza de tejido para obtener imágenes de retina y vítreo intactas de alta resolución

Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores

Trasplante de epitelio pigmentario retiniano en un modelo de primate no humano para enfermedades degenerativas de la retina