Dieses Protokoll bietet eine Lösung für den geschlossenen automatisierten Pufferaustausch und die Konzentration für die Herstellung kleiner Zellen. Wichtig ist, dass der Pufferaustausch mit einer hohen Rückgewinnung und einer Lieferung eines sehr kleinen Volumens konzentrierter Produkte durchgeführt werden kann. Neue Benutzer können Schwierigkeiten haben, alle Automatisierungsschritte zu befolgen.
Das Programmieren dieser Schritte und das Durchführen von Testläufen mit Medium sind gute Möglichkeiten, sich mit dem Gerät vertraut zu machen. Bevor Sie mit dem Pufferaustausch beginnen, verwenden Sie in einem laminaren Strömungskopf der Klasse 2 eine Spritze und eine Nadeleinheit, um 50 Milliliter Saline-Lösung aus einem 500 Milliliter-Salinebeutel zu entfernen. Ersetzen Sie dieses Volumen durch 50 Milliliter 20% menschliches Serumalbumin, und ernten Sie die Zellen von Interesse aus ihren Kulturgefäßen.
Verwenden Sie nach dem Zählen die Spritze, um die Zellen in einen Transferbeutel zu laden, und schließen Sie den Transferbeutel mit dem Luer-Schloss an ein Einweg-Verarbeitungskit an. Dann verbinden Sie den zuvor vorbereiteten Beutel mit Waschpuffer mit dem Einweg-Verarbeitungskit. Um einen automatisierten Pufferaustausch einzurichten, öffnen Sie die grafische Benutzeroberfläche des Geräts, und klicken Sie auf die Startschaltfläche.
Klicken Sie auf neu, um ein neues Protokoll zu erstellen, und klicken Sie auf Diesteuerung, um die zu öffnenden und zu schließenden Ventile, die Zentrifugal- und Pumpengeschwindigkeiten, die Pumpenrichtung und die Aktionsauslöser auszuwählen. Wenn alle Parameter festgelegt wurden, klicken Sie auf Speichern. Hängen Sie die angeschlossenen entsprechenden Beutel auf das Gerät und legen Sie das Einweg-Verarbeitungskit auf die Maschine.
Klicken Sie dann auf die Schaltfläche Verbinden und laden Sie das gespeicherte Programm herunter. Wenn die Wiedergabetaste leuchtet, kann das Protokoll gestartet werden. Um den automatisierten Pufferaustausch durchzuführen, öffnen Sie die manuellen Klemmen für den Transferbeutelschlauch, und klicken Sie auf Starten, um das Pufferaustauschprogramm zu initiieren.
Am Ende des Automatisierungsschritts sechs wird der Prozess aufgrund der Auslösung des Blasensensors durch die Luft im nun leeren Beutel angehalten. Wenn die Tasche tatsächlich leer ist, drücken Sie neben, um den Vorgang zum nächsten Schritt zu verschieben. Wenn der automatisierte Prozess abgeschlossen ist, schließen Sie alle Rohrklemmen und öffnen Sie die Tür des Geräts.
Entfernen Sie dann das Einweg-Kit aus dem Gerät und trennen Sie die Spritze, damit die Zellen für die nachfolgende Analyse gesammelt werden können. Typischerweise erscheint das wirbelierte Zellbett wie in diesem Bild dargestellt mit den Zellen, die sich in der Mitte und zur Vorderseite des Kegels ansammeln, einem kleinen Raum an der Spitze der Kammer, in dem sich die Zellen nicht ansammeln, und einer sichtbaren Öffnung innerhalb des Zelleinlasses. Das wirbelierte Zellbett kann komprimiert werden, wenn ein neuer Puffer eingeführt wird, der sich in einer anderen Viskosität oder Dichte befindet.
Eine hohe Durchflussrate kann angewendet werden, um für lebende Zellen auszuwählen, da abgestorbene Zellen kleiner und leichter sind und durch Erhöhung der Durchflussrate aus der Kammer herausgedrängt werden können. Der automatisierte Prozess der Pufferaustauschverarbeitungszeit ist kürzer als der des manuellen Pufferaustauschprozesses. In dieser Analyse waren die Wiederherstellungsraten zwischen dem manuellen und dem automatisierten Prozess für beide getesteten Zelltypen ähnlich, und die Zelllebensfähigkeit wurde von keinem der beiden Prozesse beeinflusst.
Die zurückgewonnenen Zellen zeigten ähnliche Proliferationsraten, Fähigkeiten zur Herstellung von Zytokinen und Ideo-Aktivitäten, unabhängig von der Art der Verarbeitung. Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass dieses Protokoll nur als Richtlinie dient, und daher müssen Benutzer die Durchflussrate und Zentrifugationsgeschwindigkeit entsprechend ihrem Zelltyp und Puffer programmieren. Pufferaustausch ist ein Zwischenschritt in der Zellherstellung, der der Zellkulturexpansion oder Kryokonservierung und Formulierung folgen kann.
Ziel ist es, Wege zu entwickeln, um den gesamten Prozess einzuschließen. Die Gegenflusszentrifufugation ist eine sehr vielseitige Plattform. Zukünftige Studien werden Anwendungen in der Zellauswahl untersuchen, wie z. B. die Entfernung von toten Zellen und die Mononukleuszellisolierung aus einem Chorisis-Produkt.
