Ziel der Methode ist es, die funktionellen Folgen einer technischen Herzgewebeimplantation in einem Kleintier-Kryoinfarktmodell zu bewerten. Der Vorteil dieser Methode ist, dass sie die Induktion von relativ reproduzierbaren Myokardinfarkten mit stabilen Infarktgrößen ermöglicht. Nachdem Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenstich bestätigt haben, legen Sie das anästhesierte Meerschweinchen auf eine 40 bis 42 Grad Celsius wärmende Plattform in der Rückenlage.
Tragen Sie augensalben und rasieren und depilate den Thorax. Tragen Sie 25 Grad Celsius Ultraschall-Wandlergel auf die exponierte Haut auf und legen Sie den Wandler aus einem Echokardiographie-System auf den Thorax, um zweidimensionale parasternale Langachsenansichten im B-Modus vom rechten Hals zum linken Bein auf der Ebene der Aortenklappe mit einer gleichzeitigen Visualisierung des linken Ventrikelspitzen zu erhalten, um die präoperative linksventrikuläre Funktion zu untersuchen. Drehen Sie dann den Messumformer um 90 Grad, um eine kurze Achse B-Modus-Ansicht auf der mittleren Papillarebene zu erhalten.
Nachdem das letzte Bild erhalten wurde, übertragen Sie das Meerschweinchen auf den OPERATIONStisch und band die Gliedmaßen in einer ausgebreiteten Adlerposition. Desinfizieren Sie die exponierte Haut mit zwei sequenziellen Jod-basierten und 80%Ethanol-Peelings und machen Sie einen 1,5 Zentimeter großen vertikalen Schnitt im Trachealbereich. Sezieren Sie die Muskeln, die die Luftröhre bedecken, unverblümt.
Wenn die Luftröhre beobachtet werden kann, punktieren Sie das Luftrohr mit einer 18 Gauge IV Kanüle und setzen Sie den flexiblen Teil der Kanüle als Trachealrohr ein. Verbinden Sie das Luftröhrenrohr mit einem Tierschutzgerät für eine kontinuierliche Belüftung während des Eingriffs und zählen Sie die Rippenräume ab dem ersten interkostalen Raum, um den fünften interkostalen Raum zu lokalisieren. Machen Sie einen zwei Zentimeter großen horizontalen Schnitt auf dem fünften interkostalen Raum auf der linken Seite des Meerschweinchens und entfernen Sie das subkutane Gewebe, bevor Sie die Muskeln mit einer Elektrokauterie sezieren, bis die interkostalen Muskeln erreicht sind.
Sezieren Sie die Interkostalmuskulatur vorsichtig mit einer Pinzette und einer kleinen Schere, bis der Pleuraraum erreicht ist und die linke Lunge visualisiert werden kann. Setzen Sie einen Retraktor zwischen die Rippen und öffnen Sie den Retraktor vorsichtig, bis eine gute Sicht auf das Herz erhalten ist. Öffnen Sie das Perikard etwa einen Zentimeter im Bereich der vorderen linken ventrikulären Wand und legen Sie eine Kompresse auf die linke Lunge, um die Lunge vor Schäden zu schützen, wenn sie die Kryoverletzung des linken Ventrikels induzieren.
Als nächstes kühlen Sie die Spitze eines erodierten Metallstempels mit einem Querschnittsdurchmesser von 0,5 Zentimetern in flüssigem Stickstoff für drei Minuten, bevor Sie die Sonde 30 Sekunden lang auf die linke vordere Herzwand drücken. Legen Sie dann ein 200 Grad Celsius elektrisches Lötkolben in den Stempel, um den Stempel zu erwärmen, so dass das Metall aus dem Gewebe entfernt werden kann. Nach der dritten Stempelapplikation den Retraktor aus dem interkostalen Raum entfernen und das Abflussrohr des Ventilators für zwei Sekunden klemmen, um die Lunge mit maximalem Druck aufzublasen, um eine Atelectasis der Lunge zu vermeiden.
Dann schließen Sie die Rippen mit zwei 4-0 Nähte, die Muskeln über die Rippen mit einem 5-0 Lauf Naht und die Haut mit 5-0 Naht Einzelstiche. Nach dem Entfernen des Luftröhrenrohrs verwenden Sie eine einzelne 8-0 Naht, um die Punktionsstelle an der Luftröhre zu schließen und die Wunde mit drei Einzelstichen 5-0 Nähte zu schließen. Sieben Tage nach der Kryoverletzung entfernen Sie Nähte und machen Sie einen zwei Zentimeter großen horizontalen Hautschnitt im Narbenbereich der linken Seitenseite und verwenden Sie Elektrokauterie, um die zusätzlichen Pleuraadhäsionen sanft zu sezieren.
Öffnen Sie den Pleuraraum vorsichtig mit einer Schere und legen Sie einen Rippenstreuer ein, um das Herz freizulegen. Identifizieren Sie den Bereich des Infarkts visuell durch seine blasse Farbe im Vergleich zum gesunden umgebenden Myokard und legen Sie ein technisches Herzgewebepflaster über die Infarktregion. Sichern Sie den Patch mit zwei 8-0 Nähte auf beiden Seiten im nicht-infarktierten Bereich des Herzens und aufblasen die Lunge mit Druck, um eine Atelectasis der Lunge zu vermeiden.
Entfernen Sie dann den Retraktor aus dem interkostalen Raum und schließen Sie das Tier wie gezeigt. Vier Wochen nach der technischen Herzgewebeimplantation führen Sie eine transthorakale Echokardiographie durch, wie gezeigt wurde, um Veränderungen in der linken Herzkammerfunktion überStunden zu bewerten. Mason trichrome Färbung vier Wochen nach Kryoverletzung zeigt große transmuraale Narben über 25% der linken ventrikulären Myokard im Durchschnitt.
Dystrophin Färbung zeigt große Myokardtransplantate, die teilweise auf die Narbe und Färbung für den menschlichen Ku80 re-muskuläre, die den menschlichen Ursprung des neu gebildeten Myokard bestätigt. Die transthorakale Echokardiographie-Überwachung des implantierten technischen Herzgewebes zeigt eine Verbesserung der linken Ventrikelauswurffraktion, die Verkürzung der Bruchfläche und eine Abnahme des linksventrikulären und diastolischen Durchmessers. Es ist wichtig, die Pleurahöhle bei dieser Art von Re-Do-Operation sorgfältig zu öffnen, da Adhäsionen zwischen der Brustwand und dem linken Ventrikel vorhanden sein können und es ein gewisses Risiko gibt, das linksventrikuläre Myokard zu verletzen.
Nach der Implantation des menschlichen Herzgewebes können verschiedene Methoden verwendet werden, um Veränderungen der linksventrikulären Auswurffraktion zu überwachen. Neben der Echokardiographie kann eine invasive Messung von Druckvolumenschleifen verwendet werden, um diese Veränderungen zu überwachen. Diese Methode ermöglicht es, alle Aspekte der menschlichen Gewebeimplantation zu untersuchen.
Funktionelle Folgen sowie mögliche Risiken wie Arrhythmien können in diesem Kleintiermodell bewertet werden.
