此协议意义重大，因为它提供了从脂质薄膜到脂质溶液到微泡，然后创建液滴的完整程序。该技术的主要优点是将微泡凝结成液滴的简单性。只需冷却和旋转，即可无需加压即可制造液滴。
视觉演示至关重要，因为通过视觉检查半透明的变化，可以进行简单的测试，以查看微泡是否成功凝结。演示这个程序的将是江正实验室的硕士生KimoonYoo。使用除尘器，取下血清瓶上的铝密封件，将一毫升脂质溶液转移到 1.85 毫升的波罗西酸盐玻璃样品瓶中，并盖上苯酚螺丝帽，让脂质溶液顺着内壁流下来，而不会产生气泡。
随着1.85毫升样品小瓶准备流入样品小瓶使用气体交换器进入样品小瓶头空间。确保换气器上的所有阀门都正确关闭，泵关闭。打开歧管阀门，小心地从歧管上解开相应的针头。
打开压力阀 A 和压力阀 B，将气缸阀逆时针旋转约 1/16 至 1/8，以部分打开气瓶阀。打开 T 手柄阀，用脂质溶液解开封样品瓶。将多管针置于小瓶液态空气接口上方，顺时针缓慢地将空气调节阀转动，直到空气调节器仪表针从其休息位置稍稍移动，让全氟碳气体轻轻流入小瓶头部空间 30 秒，注意不要产生气泡。
如有必要，调整空气调节器阀。30 秒后，小心而快速地保持样品小瓶，而不会移动小瓶太多。气瓶阀、T手柄阀、空气调节阀、压力阀A、压力阀B和歧管阀。
小心地套住针头，然后给样品瓶贴上标签，用顺时针封住颈部。将样品小瓶存放在黑暗中，在摄氏四度下至少保存 10 分钟或长达 24 小时。将大约 100 克干冰放到绝缘容器中，将普通冰放在另一个绝缘容器中。
将先前制备的脱氟丁烷血清小瓶取回 1.5 英寸 20 量尺针、一毫升塑料注射器、200 毫升容器、金属钳和温度计。将样品小瓶与脂质溶液放在机械搅拌器中，搅拌45秒。颜色和半透明应该有变化。
机械搅拌后，将样品小瓶右侧向上站立，遮挡光线，开始 15 分钟的倒计时，冷却小瓶，大小选择微泡。当倒计时达到10分钟时，用大约200毫升的同丙酚填充一个容器，然后用金属钳用干冰将其冷却到零下20摄氏度。微泡被选中 15 分钟后，查找样品瓶内选定的分区大小。
保持样品小瓶右侧向上，小心地解开样品瓶的封盖，并提取约0.7毫升的底部隔板，用1.5英寸20仪表针连接到一毫升塑料注射器。确保顶部隔板不会被撤回，并且不要轻弹注射器以去除气囊。瞄准橡胶塞上的中心圆，将不同的 20 量针插入脱氟丁烷血清小瓶中，同时将针头靠近血清小瓶顶部以通风，然后插入具有所选微泡大小的针头。
慢慢转移所选微泡的大小。让液体轻轻滑下十氟丁烷血清小瓶的内壁。一旦所有大小选择的微泡溶液已经转移，用注射器取出针头，但保持发泄针，以减轻负压。
在异丙醇浴池中加入少量干冰或室温异丙酚，确保浴池温度在零下15至零下17摄氏度之间。将20个量表排出针插入血清小瓶顶部附近，放置血清小瓶和异丙醇浴池，使微气泡水平保持在异丙酚水平以下，但上面的小瓶颈，间歇性地旋转血清小瓶两分钟，以凝结微泡。不要在等丙醇中连续旋转血清小瓶，也不要让溶液冻结。
旋转约五秒钟，将血清小瓶从等丙醇中取出。检查冰核，然后恢复在等丙醇中旋转。如果有冰的形成，在空中旋转血清小瓶，直到它消散。
两分钟后，凝结从等丙醇浴池中取出血清小瓶，并取出排泄针。微泡应该凝结成半透明变化所表明的水滴。擦拭血清小瓶，贴上标签，并将其放在一个深色绝缘容器中的普通冰上，直到准备好使用。
只要融化的冰根据需要更换，带有完整铝密封件的未开封液滴应稳定长达六小时。准备使用时，用除尘器取下铝密封件。使用此协议后，在具有 10 微米孔径的库尔特计数器上对预浓缩、大小选择的微泡和后浓缩液滴进行了尺寸处理。
显示了 30% 热脂配方的大小数据。此处显示了基于大小数据的统计数据。结果表明，随着热脂含量的增加，浓度降低，平均直径增加。
显示了对 30% 热脂液滴样品的代表性吸水剂测量结果。这表明，与单个未组装的脂质组件相比，完整组件具有不同的峰值反射的光学特性。这里显示了对预浓缩微泡、后凝结液滴样品的代表性荧光测量，其中 30% 的热脂，显示了不同荧光峰值，以破坏形式完整样品。
显示了在不同压力下拍摄的 30% 热脂液滴样本的代表性超声波图像。在低压下，只观察到从合成中卡住的气泡的背景信号。在稍高的功率下，产生了一些微泡，明亮的斑点的外观证明了这一点。
随着压力的增加，会产生更多的微泡。请务必记住，这里的冷凝温度是针对此特定的滴壳配方优化的。不同的外壳配方可能需要不同的温度。
