有许多努力使用异霉素诱导红斑病。然而，文献中并没有清楚地概述这一过程的确切程序。我们提供一个分步程序，使用异霉素诱导红斑病。
该程序的主要优点是以可靠和可重复的方式诱导人类红细胞的红斑病。首先，在酸性柠檬酸葡萄糖中加入500微升的冷全血，加入微离心管。在室温下以700倍g离心，将整个血液离心5分钟，并使用移液器去除透明血浆和薄薄的薄薄外衣，以离开红红细胞层。
准备一升含有125毫摩尔氯化钠、5毫摩尔氯化钾、1毫摩尔硫酸镁、32毫摩尔性海苯、5毫摩尔葡萄糖和1毫摩尔氯化钙的环果溶液。通过添加两滴微升水杨氢氧化钠，将 pH 调整为 7.4。要准备无葡萄糖环线溶液，请遵循相同的协议，但不包括葡萄糖在溶液中。
在林格溶液中清洗红细胞两次，将细胞颗粒悬浮在1.5毫升的林格溶液中，在室温下以700倍g离心5分钟，并去除上光。然后，在9，960微升无葡萄糖环环溶液中重新吸收40微升红细胞颗粒，使0.4%的血红素达到10毫升的最终体积。在37摄氏度下孵育细胞悬浮液7天。
在无葡萄糖缓冲液中预孵育红细胞可显著触发红斑病。在无糖缓冲液中经过七天的预孵化后，获得了高红斑病。在DMSO的630微升中溶解一毫克离子霉素钙盐，达到2毫摩尔的最终浓度。
在20毫升内，储存在零下20摄氏度。服用一毫升的0.4%造血剂，并加入0.5微升的两毫摩尔类霉素，以达到一微摩尔的最终浓度。在37摄氏度下孵育两小时。
使用一毫升的血红素，没有离子素治疗作为负对照。在室温下将经过700次处理和未经处理的造血素离心5分钟，并去除其超钠，将细胞颗粒留在管底。使用振铃溶液将细胞颗粒悬浮在 1.5 毫升的振铃溶液中，在室温下以 700 倍 g 离心 5 分钟，并丢弃超钠，用振铃溶液清洗细胞三次。
为了测量造血，将未经处理的0.4%造血剂中加入1毫升，加入微离心管，在37摄氏度下孵育两小时，作为0%血解的负对照。为了准备100%血解的阳性控制，在室温下以700倍g的微离心管和离心机中加入未经处理的0.4%血红素的一毫升，5分钟。取出上一提液，在细胞颗粒中加入一毫升蒸馏水，在37摄氏度下重新暂停和孵育两小时。
接下来，在微离心管中加入一毫升处理0.4%血红素的离子霉素。将未经处理的细胞、经过处理的细胞和蒸馏水中的细胞以700倍g离心，在室温下5分钟。将 200 微升的超糖转移到 96 井板的每个井中。
使用微板读卡器测量 541 纳米的吸光度。使用 A0、A100 和 AT 是水中林格溶液中红细胞的吸收度和离子霉素处理过的二核细胞的吸光度等公式计算血解。将 5X 附件-V 结合缓冲液中的两毫升稀释为 8 毫升 PBS，以获得 1X 结合缓冲液。
将未经处理的离子素处理和未经处理的细胞颗粒在1X结合缓冲液的一毫升中重新释放。在结合缓冲液中加入235个细胞悬浮液，并在微离心管中加入15微升附件-V Alexa Fluor 488结合。在室温下在黑暗的地方孵育细胞20分钟。
在室温下以700倍g离心5分钟。拆下上一液。将细胞颗粒悬浮在1.5毫升的结合缓冲液中，并在室温下以700倍g离心5分钟，用1X结合缓冲液清洗细胞两次。
去除上流剂，将细胞颗粒重新泵中 250 微升 1X 结合缓冲液中，用于流量细胞测量。现在，将附件-V染色红细胞的200微升转移到一毫升圆底聚苯乙烯管中，该管与流式细胞仪兼容。登录到流式细胞学软件，然后单击新的实验按钮。
单击新的管按钮。选择全局表并选择应用分析，以测量激发波长为 488 纳米、发射波长为 530 纳米的荧光强度。将要收集的细胞数设置为 20，000 个，用于荧光激活细胞分选分析。
选择所需的管子并单击加载按钮。单击记录按钮进行向前散射和侧散射测量。对所有样本重复所有示例。
右键单击试样按钮，然后单击应用批次分析生成结果文件。右键单击试样按钮，然后单击生成 FSC 文件。在该协议中，用一微摩尔离子素和林格溶液治疗红细胞两个小时足以诱发红斑病，通过FACS分析成功用附件-V氟488结合和定量标记就证明了红斑酸。
5 和 10 微摩尔的异霉素浓度较高，导致红斑病略有增加。然而，这种浓度也加强了血解。在离子霉素和林格溶液中孵育红细胞的时间只有30分钟，足以诱发红斑病。
孵育时间增加，使红斑病水平增加长达两个小时。然而，进一步孵育时间导致红斑病水平略有下降。180分钟后血解的较高值解释了在用异霉素治疗180分钟后，与存活较少的细胞相同数量的孵化后，红斑病的减少。
具有离子霉素处理的红细胞在外叶中与磷脂酰丝氨酸结合时显示出明亮的荧光信号。相比之下，没有治疗的细胞显示非常弱的荧光信号，表明非常低的红斑病。在无葡萄糖缓冲液中预孵育是诱导性红斑病的重要诱因。
由于在多种疾病中观察到性病，因此遵循此协议的实验是场特定的。在我们的实验室中，我们有兴趣研究红斑病对膜生物物理特性和膜与纳米材料相互作用的影响。Eryptosis 与大量疾病有关，包括糖尿病、刀状细胞贫血和地中海贫血。
拥有诱导红斑病的可重复方案可以帮助这些领域的研究人员进一步研究每个领域特有的科学问题。
