内生菌与人类肠道微生物群使用体外浴发酵系统的相互作用分析

我们的协议可以广泛用于高通量和快速筛选内生生物与人类肠道微生物群之间的相互作用。成本低，避免干扰作用，从宿主的新陈代谢。此过程有可能用于诊断。

首先，将BIF EPS和淀粉单独溶解在热水中，在磁搅拌器上使两者均浓度为每升8克。在准备好的基本培养基VI中，添加100毫升的BIF EPS溶液，使培养VI BIF溶液。加入100毫升的淀粉溶液，制成培养VI淀粉溶液。

用碳源和不含碳源的介质在121摄氏度下15分钟，将两种介质进行分管。允许他们冷却到室温，并添加干草和半胱氨酸。将每个介质中五毫升的子样本转移到培养管。

并存放在厌氧培养箱中。将剩余的介质存放在摄氏四度。要制备人类粪便样本，在玻璃烧杯中将一克新鲜粪便样品转移到 10 毫升 0.1 摩尔厌氧 PBS 中。

然后用玻璃棒搅拌它，以达到泥浆。在厌氧室中，将过滤的粪便浆的500微升单独加入三个准备好的发酵介质中。然后，在37摄氏度下孵育。

24小时48小时后，在厌氧室收集两毫升发酵样品。然后在6000次G的腔室外离心，三分钟。小心地将超盐转移到新的离心管中，用于多糖降解分析和短链脂肪酸测量。

将离心颗粒存放在 80 摄氏度。将 0.2 微升发酵超酸液加载到每个预涂覆硅胶 60 TLC 铝板上，并旋转以展开。然后用热空气吹风机晾干。

将取样板的一端浸入20毫升的甲酸:n-butanol:水溶液几分钟，直到电泳几乎延伸到另一端。然后用钳子拿出盘子，然后用吹风机擦干。然后将盘子浸泡在奥西诺试剂中两分钟，进行染色。

再干一次将盘子转移到120摄氏度的烤炉中加热3分钟。然后拍摄板的照片，通过测量TLC波段来评估EPS的降解。

为了研究EPS对SCFA生产的影响，在两毫升离心管中加入1毫升发酵超钠，并在每个样品中加入0.2毫升25重量/体积百分比的元磷酸。漩涡，彻底混合溶液。将混合物在13，000倍G下离心20分钟。

同时，在管中准备120毫摩尔醋酸、丙酮、丁基、异丁、谷酸和异丙酸的溶液。然后将每份已准备好的酸的一毫升添加到含有 1.2 毫升的管中，其中 25 重量/体积百分之元磷酸。并把它们装进气色仪的样品瓶作为标准鸡尾酒。

将管子从离心机中拿出，然后将超级纳特器转移到新鲜管中。使用装有 0.22 微米过滤器的注射器将超自然液过滤到新管中，用于气相色谱分析。在这项研究中，在厌氧孵育72小时后，在PYG板上的双纤维长培养物中观察到粘液EPS的产生。

培养刮伤的离心，然后是乙醇沉淀和干燥，导致纤维素状EPS的收集。TLC分析表明，人类粪便微生物群淀粉降解速度比BIF EPS快。主要坐标分析显示培养VI BIF和培养VI淀粉组，彼此聚集，表明EPS和淀粉可用性差异形成人类粪便细菌群落。

对效果大小的线性鉴别分析表明，在培养VI BIF样品中，基子半杆菌、副杆菌和罗多普多多酮在培养物VI BIF样品中明显比在培养VI淀粉样品中丰富得多。此外，GC测量显示，从发酵培养物中测量的SCFA包括醋酸、丙酸、异丁、丁酸、异黄酸和谷酸。经过24小时48小时的发酵后，6个SCFA浓度中的5个相似，培养VI BIF、培养VI淀粉和培养VI组之间没有统计学上上的不同。

然而，经过48小时的发酵，培养VI BIF组的丙体酸浓度明显高于培养VI淀粉组。在厌氧条件下进行此实验，然后尽快将固定样品转移到厌氧培养箱中。某些 TLC 试剂是危险的。

您应该小心使用它们。