以血管内炎组织调节为重点, 利用肠系膜孤立动脉评价血管张力

需要非常严格的协议，以便我们可以有效比较来自同一动物或不同动物或动脉的制剂，在它们周围的脂肪存在或存在或内皮存在或不存在。这种实验技术的主要优点是，我们可以比较等轴测条件下同一动脉的环，从而对所研究的实验因素的影响作出有效的结论。该协议提供了不同转基因动物的血管脂肪组织对血管反应的调制的见解。

脂肪组织功能障碍是高血压及其相关心血管并发症的独立危险因素。我们的 myograph 涉及多个复杂的步骤，每个步骤都需要格外小心，以避免损坏容器，尤其是在安装过程中，并确保容器对各种刺激做出适当反应。从文本协议中描述的中肠动脉环的准备和解剖开始这个程序。

打开计算机并打开数据记录软件。将实验另存为实验室图表数据文件，并设置新名称，以避免覆盖原始设置文件。打开规范化设置窗口，将 K 因子设置为 1。

接受 IP 校准、目标压力、联机平均时间和延迟时间的默认值。单击"确定"以保存设置。选择感兴趣的通道，并在规范化窗口中输入导线直径、组织端点和初始千分尺读数。

要开始规范化程序，请逆时针转动千分尺螺钉，将第一个无源拉伸施加到血管上。等待三分钟后，容器稳定下来，在规范化窗口中输入新的千分尺读数。墙张张自动计算，并在图表上显示为点。

每次无源拉伸后，用含有150毫摩尔氯化钾的等同渗透高钾克赖布替换控制克雷布斯缓冲液。当收缩在大约三分钟时达到高原时，通过从钾激活力中减去每段伸展的被动力来记录主动力。计算墙张力以及内部周长值。

用新鲜的克赖斯缓冲液替换高钾缓冲液，从而去除高钾状况。重复洗涤五分钟三次。重复规范化步骤，诱导被动拉伸，然后交替主动收缩，直到主动张力开始减小。

彻底洗掉高钾克赖布缓冲液，将准备再平衡30至45分钟。将基底张力重置为零，以便在随后的实验中只记录主动收缩响应。准备并安装配对动脉环，如每个动脉相邻部分的文本协议中所述。

准备一个动脉环，PVET完好无损，另一个动脉环与PVAT去除。正常化后，通过向含有氯克的腔室添加115毫摩尔氯化钾溶液，预签约动脉段与高钾克赖布缓冲液。收缩到高原期后，洗掉高钾，用新鲜的高盐缓冲液代替缓冲液。

在五分钟内重复洗涤三次。重复氯化钾刺激和洗涤三次，通过从氯化钾刺激造成的张力中减去基线张力，记录对氯化钾的最大收缩反应。在最后的收缩和洗涤后，用温暖、加注的克赖布缓冲液重新填充腔室，让动脉恢复约30分钟，然后再执行下一个任务。

在每个腔室中，加入累积量的苯肾上腺素，以诱导静态制剂的浓度依赖性增加和等轴测张力。加入最后一剂激动剂后，彻底洗净药物，用新鲜的克勒布斯缓冲液重新填充腔室。将浓度依赖反应绘制为氯化钾诱导最大收缩百分比的增加。

为了评估一氧化氮的贡献，在添加苯甲肾上腺素之前，用一氧化氮合成酶抑制剂L-NAME孵育制剂30分钟。要按顺序执行第二个浓度响应曲线，请完全反复清洗腔室，以去除所有先前的激动剂，直到观察到音调的进一步变化。对于从用标准周或高脂肪饮食喂养的小鼠模型中分离出的肠动脉，对长度-张力关系进行规范化。

通过动脉段的增量拉伸建立被动长度-张力关系，直到获得与100毫米汞横膜压力或IC100相对应的内部周长。每次伸展后，应用115毫摩尔氯化钾刺激收缩。主动长度张力曲线是根据 Y 轴上的主动力数据和 X 轴上的微米数据计算的 IC 值绘制的。

位于山顶高原内的 IC 值为 IC1。规范化因子K计算为IC1和IC100的比率，然后可应用于后续实验中同一容器类型的样品。此处显示的是血管收缩器对肠动脉中苯丙胺反应的输出记录，带或不带周围PVAT。

使用苯甲酸酯的累积浓度来刺激从16周大的阿迪波塞特一只小鼠收集的肠动脉收缩。以150毫摩尔氯化钾引起的最大收缩百分比记录和计算收缩反应。绘制收缩曲线下的区域进行比较。

请注意，来自阿迪波集的PVAT对苯甲肾上腺素的反应产生了抗收缩作用。当获得KCL引起的收缩时，反应必须稳定和稳定。如果 KCL 的三次增量管理后响应仍在增加，则可能需要 KCL 刺激。

要达到最优条件的张力，正常化步骤是非常重要的，因为这决定了打开血管的力量。如果做得不好，就会影响整个实验。除了苯肾上腺素引起的收缩或松弛外，此协议可应用于其他设置。

例如，在存在或不存在近血管脂肪组织、自主神经或内皮的情况下。通过这个协议，研究人员可以在不同的病理生理条件下检查来自患病动物模型的小血管，如肥胖、糖尿病和心血管疾病。