一种基于管尖的液滴微流化平台种子细胞的方法

将这种方法与基于液滴的微流体相结合，有助于回答与系统免疫学领域相关的关键问题，以编码细胞异质性和单细胞或病原体之间的通信。我们开发的这项技术的主要优点是，这种尖端加载过程允许将稀有细胞封装在液滴中，与预测的百分比分布紧密匹配。此方法的视觉演示对于理解如何使用移液器尖端将细胞加载到性别液滴和从液滴中检索细胞至关重要。

对于水滴生成的提示加载，首先在两毫升面粉油中加入三毫升表面活性剂，然后将油相混合物抽入 2.5 毫升注射器中。清除注射器上的任何气泡，将注射器连接到长度适当的特氟龙管。用适当的双相矿物油装载两个样品注射器，然后将注射器连接到第二块长度合适的特氟龙管。

接下来，从固化的 EDMS 板中打一个直径为 5 毫米直径的聚二甲基硅氧烷或 PDMS 插头，然后打孔穿过插头的中心一毫米孔。将插头紧密插入 200 微升移液器尖端的顶端，并将连接到双兼容矿物油注射器的管材插入插头。缓慢地压下注射器柱塞，用矿物油将所有残留空气注入移液器尖端。

小心地将样品注射器和粉油注射器放在注射器泵上。当所有空气被移除后，将每个移液器尖端降低到样品溶液中，并在吸点中吸入约 100 微升的细胞样本。接下来，将两个含样品的移液器尖端插入 PDMS 芯片的两个内入口，并将含有油相混合物的管插入到外部入口中。

设置注射器泵上的流量，然后输入并设置每个注射器的尺寸。启动泵，通过设备的内部通道冲洗样品溶液，并通过设备的外部通道冲洗油相。然后将一根适当长度的管子插入出口，在液滴形成稳定时开始收集液滴，在锁管中收集液滴。

收集所有液滴后，在液滴顶部加入 200 微升的 RPMI 介质，无需血清，并在锁管盖上的孔中孵育样品，以完成适当的实验时间。为了乳化破裂，首先在八毫升的褶增油中加入两毫升的 PFO，然后使用注射器从液滴收集管底部去除多余的油。然后将100微升20%PFO溶液加入乳液中，将封装的细胞释放到水相中，然后短暂敲击管子进行混合。

不要忘记，双佛对细胞有害。因此，将与 PFO 的接触降至最低。1 到 2 分钟后，以尽可能低的相对离心力旋转溶液 30 秒，并立即将 550 微升水分转移到含有 500 微升冷 PBS 的新的锁定管中，并辅以 2%的胎儿血清或 FCS。

让任何残余油沉入新锁管的底部，并小心地将含有水相的电池的 950 微升转移到新的锁管上。确保机油不会随水相一起转移到新的锁管中。然后通过离心收集细胞，并在300微升新鲜冷PBS中重新悬浮颗粒，并辅以2%FCS。

使用刚刚演示的尖端加载方法，可以获得与统计预测值重合的 Jurkat T 细胞封装速率。值得注意的是，即使与粘附细胞（如肿瘤细胞）或稀有细胞（如血浆细胞状树突状细胞）一样，也观察到封装效率的提高。在此代表性封装期间，使用超低凝胶温度气糖再生液滴，并在生产后凝胶形成气糖水凝胶珠，通过显微镜和流式细胞学进行后续下游分析。

微观分析表明，不同组合的细胞配对表明高通量细胞配对，通过流式细胞学分析同一群体水凝胶珠，发现没有细胞的珠子可以根据其独特的向前和侧向散射模式，与细胞分离。事实上，在没有细胞的珠子上加注证实了缺乏细胞封装，因为荧光信号的缺失，而用细胞对珠子群进行浇注则表明存在多个子群，表明不同标记的Jurkat T细胞的封装。在使用此方法时，重要的是要记住，细胞浓度是一个限制因素，必须进行优化，以确保有效的细胞封装和细胞配对。

按照此过程，不仅一个或两个细胞可以高效封装在液滴中，而且可以封装多个细胞或细胞类型，以更准确地复制细胞微环境。这项技术将为免疫学及相关学科领域的研究人员铺平道路，以最佳利用疤痕细胞群及其在液滴中的有效封装，在无噪音环境中研究细胞行为。