يسعى بحثنا إلى فهم الآليات المناعية الكامنة وراء التسبب في التليف الرئوي. لا يزال أحد أكبر التحديات في هذا المجال هو ترجمة النماذج في المختبر وفي الجسم الحي إلى التليف الرئوي البشري. يوجد عدد من النماذج الحيوانية لدراسة التليف الرئوي.
نسعى إلى توحيد أحد النماذج الأكثر استخداما ، وهو نموذج الفئران البليومايسين ، بحيث يكون قابلا للتكيف بسهولة مع استخدام المختبرات الأخرى. نقدم طريقة طفيفة التوغل وقابلة للتكرار بدرجة كبيرة وآمنة لإدارة البليومايسين في نموذج الفئران للتليف الرئوي. يكمل هذا النموذج الحيواني في المختبر في الدراسات البشرية.
إنه ينطوي على تشغيل أنواع الخلايا الحاسمة للتسبب في المرض ويكرر من الناحية الفسيولوجية التغييرات في التهوية والتروية وتبادل الغازات التي تحدث أثناء الإصابة. نتوقع أن التدخلات التي تقلل بشدة من شدة الأنسجة المرضية في الجسم الحي قد تشير إلى نتائج سريرية أفضل. استمر في تحضير محاليل البيوميسين في غطاء كيميائي مع اتباع احتياطات العلاج الكيميائي المناسبة.
قم أولا بإذابة مسحوق البيوميسين في PBS معقم لتحضير تركيز مخزون يبلغ 10 وحدات لكل مليلتر. اعتمادا على البيوميسين المحدد المستخدم والهدف التجريبي ، قم بإعداد تركيز العمل النهائي حسب الجرعة المطلوبة بناء على وزن الجسم. لضبط الحجم النهائي للإعطاء ، قم بتخفيف البليومايسين إلى 0.375 وحدة لكل مليلتر ، مما يضمن حجما إجماليا يبلغ 50 مليلترا لماوس 25 جراما.
قم بتعليق الماوس المخدر بشكل صحيح على المنصة الإجرائية بزاوية 60 إلى 80 درجة عن طريق تعليقه من القواطع الأمامية لفتح البلعوم الفموي بشكل فعال. سد الممر الأنفي باستخدام مشبك الأوعية الدموية الدقيقة الناعم لإجبار التنفس عبر البلعوم الفموي. باستخدام الملقط ، اسحب اللسان من البلعوم الفموي.
باستخدام ماصة متدرجة ذات طرف كعب إغراء، ضع الحجم المطلوب من البلومايسين أو التحكم في المحلول الملحي برفق في الجزء الخلفي من البلعوم الفموي. تأكد من ظهور فقاعة سائلة مرئية بشكل صارخ. استمر في تثبيت اللسان في مكانه حتى يستنشق الفأر المحلول ، والذي يكون واضحا بشكل واضح ومسموع في كثير من الأحيان.
بمجرد تأكيد الشفط ، قم بإزالة مشبك الأنف بعناية. راقب الماوس في وضع التعليق لمدة 15 ثانية لضمان عدم ارتجاع محلول البيوميسين قبل إعادته إلى قفصه. ثم ضع على جانبه في قفصه مع وسادة تدفئة تحته للحفاظ على الحياد الحراري.
اضغط برفق على أصابع القدم وتأكد من بقاء شديدة الحرارة لتسهيل الاستيقاظ. راقب الفئران حتى تستعيد وعيها الكامل، الأمر الذي يستغرق عادة من ساعة إلى ساعتين اعتمادا على جرعة الكيتامين وحجم والتمثيل الغذائي. راقب الفئران سريريا يوميا بحثا عن التغيرات في وزن الجسم والاستمالة ومستوى النشاط وحالة الجهاز التنفسي.
تتبع الوزن كعلامة رئيسية على فعالية النموذج. في الوقت المناسب ، احصد الرئتين من الفئران التي تم القتل رحيما بها بشكل صحيح. بالنسبة لعلم الأنسجة ، قم بتشريح الرئتين على كتلة وقم بإصلاحها في 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 24 ساعة.
استمر في تضمين البارافين وتقسيمها وتلوينها باستخدام الهيماتوكسيلين والأيوزين أو ثلاثي الألوان من ماسون. لقياس الكولاجين القابل للذوبان ، قم بتجانس الرئة اليمنى. لقياس التدفق الخلوي ، هضم الرئة اليمنى باستخدام مفكك الأنسجة ومحلول إنزيمي للحصول على تعليق خلية واحدة.
قم بإجراء تلطيخ وتحليل قياس التدفق الخلوي باتباع البروتوكولات القياسية. بالمقارنة مع التحكم في PBS ، لوحظت تغيرات ليفية في الحاجز السنخي والمناطق الالتهابية أو الليفية الصغيرة في عينات الرئة المعالجة بالبليومايسين بحلول اليوم السابع. بحلول اليوم 14 ، ظهرت مناطق ليفية أكبر وأكثر تماسكا مع تدمير كبير للبنية السنخية الطبيعية.
بحلول اليوم الحادي والعشرين ، استمرت التغيرات الليفية دون زيادة أكبر. أكد نظام تسجيل أشكروفت المعدل أن مستويات التليف كانت متشابهة بين اليومين 14 و 21. أظهرت فحوصات هيدروكسي برولين التي أجريت في اليوم 14 زيادة في محتوى الكولاجين الكلي القابل للذوبان في الرئتين المعالجة بالبليومايسين مقارنة بالسيطرة.
أظهر تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي تنظيما للجينات الليفية Col1A1 و TGFB استجابة للبليومايسين. كشف تحليل قياس التدفق الخلوي عن تسلل قوي للخلايا النخاعية بما في ذلك البلاعم الخلالية ، والضامة السنخية المشتقة من الخلايا الأحادية ، والعدلات في الرئتين.
