يمكن استخدام هذا البروتوكول للتنبؤ بالآثار الضارة للمبيدات الحشرية على النحل الانفرادي والتخفيف من حدتها. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي محاكاة تغذية اليرقات على مبيدات الآفات المتبقية في الأحكام. يعد العرض البصري لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية لأن الخصائص البيولوجية لحفريات Osmia فريدة من نوعها مقارنة بالنحل الاجتماعي ، ولم يتم إجراء سوى القليل من الأبحاث على O.excavata ، وخاصة اليرقات.
لتحضير أنبوب التغذية، قم بثقب ثقب قطره 0.3 ملم في غطاء أنبوب جهاز طرد مركزي سعة مليلترين باستخدام مكواة لف كهربائية. لإعداد المبيد ، قم بإذابة مبيد الآفات من الدرجة الفنية في الأسيتون للحصول على محاليل مخزون تبلغ 10 ملليغرام لكل ملليلتر ، ثم قم بإجراء تخفيفات متدرجة للمحلول إلى أكثر من خمسة تركيزات. بعد ذلك ، احصل على أنابيب نحل بلاستيكية تحتوي على أحكام ويرقة حفريات Osmia التي تم فقسها حديثا من برنامج تربية جماعية.
باستخدام فرشاة ناعمة ، افصل اليرقة بلطف عن الأحكام ، واختر يرقات الإناث بناء على حجم التوفير وموضع الخلية داخل العش ، ثم ضع أحكام الحجم الموحد مع اليرقة الأنثوية المختارة في أطباق بتري قطرها 60 ملم ووضعها جانبا للاستخدام. قبل الشروع في معالجة مبيدات الآفات ، قم بوزن الأحكام. لمعالجة الأحكام بالمبيدات الحشرية ، أولا ، قياس حجم محلول المبيدات.
ثم نقع الأحكام المحددة بالتساوي الحجم في محاليل مبيدات الآفات المخففة لمدة 10 ثوان. بعد معالجة المخصصات بالمبيد ، قم بقياس حجم محاليل المبيدات مرة أخرى. بعد تجفيف الأحكام بالهواء على طاولة عمل معقمة ، أضفها إلى أنابيب الطرد المركزي المعدة مع ثقوب.
بعد ذلك ، يزن 60 يرقات أنثى وباستخدام فرشاة ناعمة ، انقل اليرقات إلى سطح المؤن المجففة بشكل طبيعي ، مضيفا يرقة واحدة لكل أنبوب. قم بإرجاع اليرقات في غرفة نمو في الظلام عند 25 درجة مئوية زائد أو ناقص درجتين مئويتين مع رطوبة نسبية تتراوح بين 65 و 75٪. بالنسبة لاختبار السمية القاتلة الحادة ، قم بقياس معدل وفيات اليرقة بعد وضعها على أحكام المعالجة والتحكم لمدة 48 ساعة.
بعد ذلك ، قم بوزن المخصصات المتبقية بعد 48 ساعة من تربية الحشرات لتحديد مقدار المخصصات التي تستهلكها كل يرقة ، ثم باستخدام هذه الصيغة ، قم بحساب جرعة المبيدات في كل تركيز تستهلكه كل يرقة وفقا للنسبة المئوية للتوفير الذي يتم تناوله ومحتوى المبيدات في كل حكم. بالنسبة لاختبار السمية تحت المميتة ، راقب O.excavata يوميا أثناء الشرنقة تحت مصابيح الضوء الأسود لقياس مدة تطور اليرقات. ثم وزن اليرقات بعد 14 يوما من العلاجات لتحديد زيادة وزن اليرقات.
بعد ذلك ، قم بوزن الأحكام المتبقية بعد 14 يوما من التغذية لحساب استهلاك وكفاءة تحويل الطعام المبتلع. وفحص عدد eclosion عن طريق قنص الشرانق باستخدام مقص صغير عندما يظهر النحل الضابطة إلى البالغين. أظهر اختبار السمية القاتلة الحادة أن قيمة LD50 للكلوربيريفوس ليرقات O.excavata كانت 0.001 ميكروغرام لكل نحلة.
في اختبار السمية دون المميتة ، مع زيادة الجرعة ، انخفضت قيم مؤشر زيادة وزن اليرقات واستهلاكها وكفاءة تحويل الأغذية المبتلعة للعلاجات ، مع أدنى القيم بالنسبة للتحكم الذي لوحظ في 0.013 ميكروغرام كلوربيريفوس لكل نحلة. وعلى العكس من ذلك، لوحظت المدة الأكثر امتدادا لنمو اليرقات في 0.016 ميكروغرام كلوربيريفوس لكل نحلة، مقارنة بالمعالجة الضابطة. وكشف تقييم تأثير الكلوربيريفوس على معدل الإكلوسيون عن وجود علاقة خطية سالبة كبيرة بين الجرعات المبتلعة من الكلوربيريفوس ومعدل الإكلوسيون في O.excavata.
كان معدل الإكلوزيون أقل بكثير عندما تجاوزت الجرعات المبتلعة 0.02 ميكروغرام لكل نحلة من تلك الموجودة في العلاج الضابط. وفي هذا البروتوكول، يعد فحص الأحكام ذات الحجم الموحد أمرا بالغ الأهمية لتقليل خطأ الاختبار إلى أدنى حد. هذه التقنية مفيدة في استكشاف آثار المبيدات الحشرية على هروب البالغين وخصوبة النحل الانفرادي ، وبالتالي حل مشاكل انخفاض معدل الاسترداد وانخفاض عدد السكان.
