الهدف العام لهذا البروتوكول هو وصف الإجراءات التي ينطوي عليها إجراء سحق العصب الوركي غير القابل للتدمير ، وتوفير بروتوكول لتقييم السلوك الحركي بعد الصدمة الطرفية. اختيار بطارية اختبار سلوكية قوية وموثوق بها أمر ضروري لتغطية مجموعة واسعة من الجوانب السلوكية، ويعتمد على النموذج الحيواني المستخدم والسؤال البحثي العلمي. يصف هذا البروتوكول بالتفصيل كيفية إجراء إصابة سحق العصب الوركي ويوفر بطارية اختبار سلوكية لتقييم العجز الحركي في الفئران ، والتي تشمل اختبار الحقل المفتوح ، وتحليل مشية CatWalk ، ومهمة المشي شعاع ، ومهمة المشي درجة السلم.
وأجريت التجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية الوطنية والمؤسسية المعمول بها لرعاية الحيوانات واستخدامها. الحفاظ على بيئة معقمة أثناء العملية الجراحية بأكملها. إعداد طاولة الجراحة مع المعدات اللازمة.
تخدير عميق الجرذ في خزانة مغلقة مع isoflurane وحلق منطقة واسعة من الطرف الخلفي الأيمن. بعد ذلك ، ضع الجرذ في قناع التخدير ومواصلة التخدير العميق مع isoflurane. إصلاح الجذع والأطراف الخلفية على حد سواء من الفئران مع الشريط.
ضع كلا الطرفين الخلفيين في وضع متناظر وممدود وحول كل مخلب مسطح إلى طاولة الجراحة. تطهير الجلد من منطقة حلق مع مطهر المناسبة. البحث عن الشق الوركي من الايليوم.
إجراء شق الجلد من الشق الوركي في اتجاه مخلب مع مشرط. إذا تم إصلاح الأطراف الخلفية ويتم إجراء شق الجلد بشكل صحيح ، يمكن رؤية تجويف في المستوى اللفافة بين عضلة الغلوتيوس مكسيموس وعضلات العضلة ذات الرأسين femoris التي تشبه الخط الأبيض. إدراج ملقط الهيموستاتيكية فائقة الغرامة مغلقة في تجويف ونشر ملقط.
يجب أن تفتح الطائرة اللفافة دون إصابة أي أنسجة عضلية. ضع مسحبات الشريط المطاطي تحت العضلات للحفاظ على شق الجلد مفتوحا. قم بإزالة أي أنسجة وأوعية دموية محيطة بلطف من العصب الوركي حتى يتعرض العصب تماما.
من المهم عدم التمدد أو سحب العصب أثناء العملية بأكملها. سحق العصب الوركي مع المشبك غير مسننة مع ضغط مستمر وسريع للاستخدام. لهذا، افتح المشبك، وضع العصب على الفك السفلي للمشبك، وإغلاق المشبك عن طريق قفله في المركز الأول لمدة 3 × 10 ثوان.
بعد إصابة سحق، إعادة فتح المشبك بعناية. يبدو موقع سحق العصب الوركي شفافا. إزالة المطاط الشريط الواجهات.
أغلق شق الطائرة اللفافة بخياطة قابلة للتكلس. أغلق شق الجلد مع تدبيسات جلد الجسم. يمكن تحليل النشاط الحركي ، وكذلك النشاط السلوكي للفئران من خلال اختبار ميداني مفتوح.
يتكون إعداد الحقل المفتوح ، الذي يجب أن يكون موجودا في بيئة مظلمة وهادئة ، من نظام تتبع الفيديو الآلي ، EthoVision XT ، وساحة ذات سطح أسود مقاوم للخدش وقابل للتنظيف. ضع الحلبة والكاميرا في الموضع الصحيح و قم بإعداد برنامج EthoVision XT. ضع الجرذ برفق في منتصف ساحة الاختبار.
أثناء التسجيل ، يجب على المجرب الابتعاد عن الحقل المفتوح الذي تم إعداده ، من أجل تجنب تشتيت انتباه الجرذ. لتحليل البيانات لاختبار الحقل المفتوح، انتقل إلى قسم التحليل في الشريط الجانبي الأيمن واختر تتبع المرئيات "ضمن علامة التبويب النتائج". بعد ذلك، تصدير المعلمات اللازمة إلى XL.Within البرنامج، واختيار عدد من المتغيرات من فئات مختلفة لتحليل البيانات.
يمكن أن يساعد تحليل المشية من قبل نظام CatWalk XT في تقييم العديد من المعلمات المختلفة المتعلقة بآثار أقدام النماذج الحيوانية وموقفها ومشيتها. ممشى زجاجي مضاء بالضوء الأخضر ويتم التقاط الضوء المتناثر ببصمات أقدام الحيوانات بكاميرا فيديو عالية السرعة ، والتي تقع تحت الممشى. يمكن تحليل الإشارات باستخدام برنامج CatWalk XT.
يجب أن تتم التجربة في ظل ظروف مظلمة. ابدأ بإعداد نظام CatWalk XT. اختر الإعدادات التجريبية.
ضع الكاميرا في موضعها وضبط التركيز. إعداد إعدادات الكشف. قم بإعداد جدران الممر لنظام CatWalk وتأكد من أن الجدران لا تزال موازية للممشى.
تحديد طول الممشى ومعايرة الممشى. بعد ذلك، التقط صورة خلفية. هناك حاجة إلى ممشى نظيف وفارغ لصورة الخلفية.
يجب على الجرذ عبور الممشى دون أي انقطاع. وفقا لمعايير التشغيل المحددة، هناك حاجة إلى ثلاثة أشواط متوافقة لكل فأر لتحليل البيانات. تدريب الحيوانات لمدة ثمانية أيام على الأقل قبل أن تبدأ مع التجربة الفعلية.
يجب إجراء CatWalk مرة واحدة على الأقل في الأسبوع ، مع 6 إلى 10 أشواط لضمان أداء المهام المستمر. لتحليل البيانات، فقط تقييم تشغيل متوافقة. تصنيف مطبوعات مخلب تلقائيا مع برنامج XT CatWalk.
راجع بطاقات العنونة المطبوعة يدويا. تصحيح تسميات الطباعة مخلب خاطئ، إضافة تسميات من بصمات مخلب غير المكتشفة، وحذف أي ضجيج والتسميات خاطئ. النتائج الرقمية المعروضة في ورقة XL، والتي تعرض عددا من المعلمات الأساسية.
للحصول على معلومات أكثر تفصيلا حول كل بصمة، قم بتصنيف أصابع القدم من الكفوف الخلفية. يتطلب هذا التحليل وحدة قياس البصمة التفاعلية. قم بتعيين علامات تحليل البصمة يدويا.
تحليل كل بصمة مخلب الخلفي في جميع أشواط متوافقة الثلاثة. رسم خط من وسط إصبع القدم الأول إلى مركز إصبع القدم الخامس لقياس انتشار إصبع القدم. رسم خط من وسط إصبع القدم الثاني إلى مركز إصبع القدم الرابع لقياس انتشار إصبع القدم المتوسط.
رسم خط من وسط إصبع القدم الثالث إلى كعب مخلب الخلفي لقياس طول الطباعة اليدوية. راجع النتائج العددية لقياسات البصمة التفاعلية المعروضة في ورقة منفصلة. يمكن تحديد العجز مشية من قبل مهمة المشي شعاع.
سيكون تركيز مهمة المشي الحزمة في هذا الموضوع البحثي المحدد هو تحليل التنسيق الحركي وليس تقييم التوازن الحركي. لمهمة المشي شعاع، وهناك حاجة إلى شعاع، فاصل، الجدول، خلفية موحدة، وكاميرا فيديو. استخدم شعاع خشبي بطول 90 سنتيمترا وعرض 1.7 سنتيمتر وارتفاع سنتيمترين.
تدريب الحيوانات لمدة سبعة أيام. ضع الجرذ على منصة بدء الشعاع. يجب على الجرذ عبور الشعاع ثلاث مرات دون أي انقطاع.
حتى لو وصل الجرذ إلى ثلاثة أشواط متوافقة خلال الأشواط الثلاثة الأولى ، فيجب تنفيذ ما لا يقل عن 6 إلى 10 أشواط لأداء المهمة المستمر. حدد تسلسلات الفيديو لثلاثة أشواط متوافقة من التسجيل. حدد نقطة وقت البدء ونقطة وقت النهاية لأشواط الثلاثة المتوافقة المحددة.
هنا، يتم تسمية نقطة وقت البدء بواسطة خط أسود على الحزمة، ويتم تعريف موضع الطرف الخلفي الأول خلف الخط الأسود كنقطة وقت البدء للتشغيل. يحدد وضع الطرف الخلفي الأول على المنصة في نهاية الشعاع نقطة وقت النهاية. بعد ذلك، حساب الوقت اللازم للفأر لعبور شعاع.
تسجيل عدد الخطوات والأخطاء من ثلاثة أشواط متوافقة لكلا الطرفين الخلفيين بشكل منفصل، وذلك باستخدام وظيفة التكبير والحركة البطيئة للبرنامج. تتضمن الأخطاء إجمالي زلات القدم وزلات نصف القدم. يتم تعريف زلة القدم الإجمالية على أنها موضع القدم الذي يتبعه زلة عميقة ، مما يسبب فقدان الاتصال بالمخلب المصاب مع الحزمة.
يتم تعريف نصف زلة كما مخلب الانزلاق من الجدار الجانبي للشعاع دون أن تفقد الاتصال الكامل. حساب النسبة المئوية لزلات القدم فيما يتعلق بعدد الخطوات لعبور الحزمة. يمكن لمهمة المشي الدرجة سلم تقييم وظيفة المحرك، ووضع كل من الأطراف الأمامية والأطراف الخلفية، والتنسيق بين الأطراف.
وهناك حاجة إلى جهاز درجة سلم، فاصل، الجدول، خلفية موحدة، وكاميرا فيديو لهذا الاختبار السلوكي. يتكون جهاز الدرجات الأفقي من الدرجات المعدنية والجدران الجانبية الواضحة للبولي كربونات. تدريب الحيوانات لمدة ثمانية أيام.
ضع الجرذ على منطقة بداية مشغلي الدرجة سلم. يجب على الجرذ عبور الممشى الذي يبلغ طوله 100 سنتيمتر لجهاز الدرجة السلم ثلاث مرات دون انقطاع ، من أجل أن يتأهل كركض متوافق. حدد تسلسلات الفيديو لثلاثة أشواط متوافقة من التسجيل.
حدد نقطة وقت البدء ونقطة وقت النهاية لأشواط الثلاثة المتوافقة المحددة. وضع الطرف الخلفي وراء الخط الأسود الأول على الجدار الجانبي للجهاز يحدد نقطة وقت البدء من المدى. وضع الطرف الأمامي الأول خلف الخط الأسود الثاني على الجدار الجانبي للجهاز يحدد نقطة وقت النهاية من المدى.
بعد ذلك، حساب مدة تشغيل عبر الممشى. تسجيل ثلاثة أشواط متوافقة مع مقياس الفئة 7 من ميتس والزملاء باستخدام الحركة البطيئة أو وظيفة الإطار تلو الإطار للبرنامج. تحديد عدد الخطوات وعدد الأخطاء وفقا لفئات المقياس لكل طرف على حدة.
ويميز المقياس بين الفئات التالية. مجموع ملكة جمال. زلة عميقة.
زلة طفيفة. الاستبدال.تصحيح. الموضع الجزئي. وتصحيح الموضع.
بعد ذلك، حساب الأخطاء في الخطوة. تظهر النتائج التمثيلية للاختبار الميداني المفتوح لمدة خمس دقائق أن إصابة سحق العصب ، بعد خمسة أسابيع من الجراحة ، ليس لها أي تأثير على النشاط الحركي. تحليل المشي مع نظام CatWalk XT يولد العديد من المعلمات المختلفة.
يمكن الكشف عن تعديلات كبيرة لمتوسط سرعة التشغيل وطول الخطوة ومنطقة الطباعة في مخلب الخلفي الأيمن المصاب بالأعصاب. وأظهرت الفئران البرية المصابة بالأعصاب زيادة كبيرة في وقت الكمون لعبور الشعاع ، مقارنة بالجرذان الساذجة البرية بعد خمسة أسابيع من الإصابة. وكقراءة إضافية لمهمة المشي بالشعاع، تم احتساب زلات كاملة ونصف زلات من الطرف الخلفي المصاب بالأعصاب واعتبرت خطأ في التحليل الإحصائي.
وارتفعت النسبة المئوية للأخطاء في كل خطوة من الطرف الخلفي الأيمن المصاب بالأعصاب بشكل كبير في فئران النوع البري المصابة بالأعصاب، مقارنة بالجرذان الساذجة البرية. لا تظهر البيانات التمثيلية لمهمة المشي الدرجة سلم تغييرات كبيرة في وقت الكمون لعبور ممشى جهاز درجة السلم، أو في النسبة المئوية للأخطاء في كل خطوة من الطرف الخلفي الأيمن المصاب بالأعصاب. تحليل نسبة الخطأ في كل خطوة من الطرف الخلفي المصاب بالأعصاب النظر فقط في النتيجة من 0 إلى 2 من مقياس الفئة 7 من ميتس والزملاء.
بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تنفيذ إصابة سحق العصب الوركي، وكيفية تنفيذ تقييم متعدد العوامل للسلوك الحركي في الفئران بعد سحق العصب الوركي من جانب واحد. لتحقيق نتائج متسقة وقابلة للاستنساخ وقابلة للمقارنة بعد إصابة سحق العصب الوركي ، من الضروري استخدام طريقة موحدة لتحفيز سحق العصب ، بالإضافة إلى توصيف قياسي بشكل حيوي. التدريب المناسب لاختبار سلوك محدد يوفر مزايا توفير الوقت أثناء تقييم التجربة والحصول على نتائج أفضل.
