تم استخدام هذه الطرق لتطوير أول نموذج لسمك الزرد من ورم خبيث في الورم الأرومي العصبي. ولإثبات أن هذا النموذج يمكن أن يلخص بأمانة العديد من ميزات ورم خبيث شوهد في المرضى الذين يعانون من مخاطر عالية من الورم الأرومي العصبي. الميزة الرئيسية لهذا النموذج الزرد النقيلي هي التصوير في الوقت الحقيقي في الجسم الحي لنشر الورم لفهم أفضل متى ، وربما كيف يحدث ورم خبيث.
هذه التقنية ليست خاصة بالورم الأرومي العصبي. يمكن تطبيقه على نماذج الزرد لأنواع مختلفة من السرطانات طالما يمكن تحديد الخلايا السرطانية وتعقبها مما يؤدي إلى مجموعة من الاحتمالات. للبدء ، قم بتطوير خط أسماك معدل وراثيا غير متجانس الزيجوت يبالغ في التعبير عن كل من MYCN و LMO1 عن طريق التزاوج بين خطوط MYCN و LMO1 المعدلة وراثيا.
في يوم واحد بعد الإخصاب ، استخدم مجهر التألق المجسمة لفرز ذرية التقاطع الخارجي للتعبير عن EGFP ، والذي يقدم كنقاط إيجابية EGFP. بعد الفرز، اعزل الأجنة التي تم فحصها في أطباق بتري منفصلة وصنف الأطباق على أنها إيجابية MYCN أو سلبية MYCN. تصور وفرز الأجنة من كلتا المجموعتين للتعبير عن الكائنات الحية المحورة 1 بعد ثلاثة إلى أربعة أيام من الإخصاب.
ابحث عن بقع التألق الحمراء في كل من العقدة العنقية المتفوقة والخلايا العصبية الدوبامينية غير PSNS خاصة في النخاع المستطيل في الدماغ الخلفي. قم بإجراء الفحص قبل أن تصل الأجنة إلى خمسة أيام بعد الإخصاب. ثم عزل الأسماك المصنفة إلى أربع مجموعات من الأنماط الجينية المختلفة ووضع العلامات على أنها MYCN فقط ، LMO1 فقط ، MYCN و LMO1 على حد سواء والنوع البري.
رفعها في ظروف متطابقة وفقا للبروتوكولات القياسية. تصور الأورام باستخدام مجهر التألق المجسمة عن طريق تقليب الأسماك بلطف باستخدام ملعقة معدنية على كلا الجانبين الجانبي لرؤية الورم. بعد تحديد الأسماك المحتملة الحاملة للورم ، قم بعزلها في خزان منفصل مع ملصقات مناسبة تتضمن تاريخ الميلاد وتاريخ فحص الورم والنمط الوراثي.
في الأسابيع الستة التالية للإخصاب، كرر الخطوات السابقة لفحص الأسماك الحاملة للورم والأسماك غير الحاملة للورم للتأكد من وجود أورام للأسماك التي تم فحصها مسبقا أو تحديد الأسماك الجديدة المحتملة الحاملة للورم. ابحث عن الحجم المستدام أو المتزايد للكتلة الإيجابية الفلورية والأسماك الحاملة للورم المؤكدة. بعد تحديد الأسماك الحاملة للورم ، راقبها كل أسبوعين للحصول على أدلة على هجرة الخلايا السرطانية ، والتي تظهر على شكل كتل ورم إيجابية صغيرة EGFP أو mCherry بعيدة عن الموقع الأساسي لتكوين الورم.
اعزل هذه الأسماك في خزانات منفصلة حسب الحاجة وقم بتصنيفها بشكل مناسب للإشارة إلى ورم خبيث محتمل. بعد تفسير MYCN غير المتجانس في أسماك LMO1 ، وأثناء فرز ذريتها ، كان تعبير EGFP MYCN بارزا في الخلايا العصبية الدوبامينية غير PSNS في يوم واحد بعد الإخصاب. في المقابل ، كان تعبير LMO1 بارزا في كل من خلايا PSNS والخلايا العصبية الدوبامينية غير PSNS.
تم الكشف عن كتل الورم الإيجابية الفلورية في الأنسجة في الأعضاء ، بعيدا عن موقع الورم الأساسي في الأسماك المعدلة وراثيا المركبة مع الإفراط في التعبير عن كل من MYCN و LMO1 ، ولكن ليس في الأسماك المعدلة وراثيا مع التعبير عن MYCN وحده. يظهر تلطيخ H & E للأقسام الجراحية أن الورم الأولي نشأ من منطقة الغدة بين الكلى ، وهو ما يعادل الزرد للغدة الكظرية البشرية وهو الموقع الأكثر شيوعا للمرض الأولي في مريض الورم الأرومي العصبي. تم الكشف عن كتل الورم البعيدة عن الغدة بين الكلى في مناطق متعددة ، بما في ذلك الجزء البعيد من الكلى والمدار والخياشيم والطحال والجدار الداخلي للغرفة الأذينية للقلب.
تم تأكيد سلالة الخلايا العصبية PSNS للخلايا السرطانية في الورم الأساسي وجميع المواقع النقيلية. تم العثور على كميات كبيرة من الكميات المضخمة وزيادة سمك ألياف الكولاجين الملطخة ب PSR في أورام MYCN LMO1 عند مقارنتها بالأورام التي تعبر عن MYCN وحدها. بعد استخدام هذا الإجراء ، يمكن تطبيق فحص الأدوية واختبار علاجات السرطان الجديدة ، والتي يمكن أن تؤدي إلى تطوير عوامل بديلة للوقاية من السرطانات النقيلية وعلاجها.
