يقدم هذا الفيديو طريقة سريعة وفعالة لتركيب الجسيمات النانوية المغناطيسية واستخدام القياس المغناطيسي لتصوير التحول في البيئة البيولوجية. وقد اجتذبت الجسيمات النانوية المغناطيسية المزيد من الاهتمام للتطبيقات الطبية الحيوية، ومن المهم أن نفهم أن مصير مرة واحدة في الداخل في الخلايا. ويتحقق هذا هنا من خلال قياس المغناطيسية الخلوية.
وبالنسبة لكل من توليف الجسيمات النانوية المغناطيسية والقياسات، يمكن أن تتأثر النتيجة بالتلوث. استخدام قنينات كيميائية نظيفة جيدا وتأكد من أن معدات قياس المغنطيسية خالية من التلوث. وعادة ما يستخدم حامل عينات قياس المغنطيسية لعينات المسحوق.
نُظهر كيفية تكييف استخدام الحامل مع العينات السائلة أو البيولوجية. في 30 ملليلتر مانا موجة الزجاج قارورة تذوب 400 ملليغرام من الحديد ثلاثة أسيتيlacetonate في 10 ملليلتر من الكحول البنزيل. وباستخدام مفاعل الموجات الدقيقة، سخني التعليق من 25 درجة مئوية إلى 250 درجة مئوية بمعدل 11.25 درجة مئوية في الدقيقة، وحافظ عليه عند 250 درجة مئوية.
لفصل الجسيمات النانوية، ضع مغناطيس النيودميوم لمدة 30 دقيقة. ل بيليه الجسيمات النانوية، تنفيذ سلسلة من يغسل باستخدام 10 ملليلتر من سائل الغسيل المعينة وتطبيق مغناطيس النيودميوم لمدة خمس دقائق. إزالة الترشيح وإضافة 12 ملليلتر من 10 إلى حمض الهيدروكلوريك المولر ناقص اثنين.
الطرد المركزي تعليق ومرشح 100 كيلودالون في 2، 200 مرة G لمدة 10 دقيقة. ثم إعادة تعليق الجسيمات النانوية في 10 ملليلتر من 10 إلى حمض الهيدروكلوريك المولر ناقص اثنين. إعداد حل جزيء الطلاء كما هو موضح في المخطوطة.
إضافة 10 ملليلتر تشتت مائي مائي إلى حل جزيء الطلاء في نسبة كتلة من خمسة إلى واحد بين جزيئات الطلاء والجسيمات النانوية. ثم يهيج الخليط لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة باستخدام مُحرك مغناطيسي. بعد اكتمال التفاعل ، قم بضبط درجة PH للخليط إلى سبعة باستخدام هيدروكسيد الصوديوم الضرس.
عندما تكون ثقافة الخلايا الجذعية السيسنيمال البشرية عند مرور خمسة و 90٪ التقاء، وإزالة المتوسطة وشطف الخلايا مع الدم خالية من الدم دون الجلوتامين. إلى كل 150 قارورة ثقافة سنتيمتر مربع، إضافة 10 ملليلتر من تعليق الجسيمات النانوية. احتضان القارورة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 30 دقيقة.
ثم تجاهل المتوسطة التي تحتوي على تعليق الجسيمات النانوية وغسل الخلايا مرة واحدة مع الدم خالية من الدم 1640. إضافة DMEM تكملها مع 10٪ FBS و 1٪ البنسيلين ستريبتوميسين. احتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون للسماح استيعاب كامل من الجسيمات النانوية.
إضافة 10 ملليلتر من 0.05٪ التربسين EDTA مسبقاً لمدة 37 درجة مئوية لكل قارورة من MSCs المسمى مغناطيسيا. بعد دقيقتين إلى ثلاث دقائق، عندما يتم فصل الخلايا، فوراً تعطيل التربسين بإضافة ثلث حجم DMEM المُحذر مسبقاً. أجهزة الطرد المركزي الخلايا المنفصلة في 260 مرة G لمدة خمس دقائق.
استلهم الوسط و يعيد تركيز الخلايا في حجم صغير من الخلايا-spheroid ثقافة المتوسطة بتركيز حوالي 200,000 خلية لكل 50 ميكرولترات. إضافة ملليلتر واحد من إعداد حديث خلية- كروية ثقافة المتوسطة إلى 15 ملليلتر أنبوب الطرد المركزي المخروطي معقم. ثم إضافة حجم من تعليق الخلية المقابلة ل200، 000 خلية.
أجهزة الطرد المركزي هذه الخلايا التي تحمل علامة مغناطيسية في 180 مرة G لمدة ثلاث دقائق من أجل تشكيل بيليه خلية في الجزء السفلي من الأنبوب. ثم ضع الأنبوب في الحاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون ، مع الحفاظ على الغطاء مفتوح قليلاً لتبادل الغاز. ضع إما حجمًا معينًا من الجسيمات النانوية المغناطيسية أو تعليق ثابت أحادي الخلية في مقياس المغنطيسية العينة المتذبذب أو حامل العينة VSM.
إذا لزم الأمر، يمكن استخدام الشريط PTFE لمنع أي تسرب. أدخل حامل العينة في VSM ثم قم بالمسح الضوئي بحثاً عن إزاحة العينة. ضع العينة في الموضع المقابل لأقصى مغنطة.
إجراء القياس الأول في حقل مغناطيسي منخفض بين سالب 1, 500 Oersteds و 1,500 Oersteds موجبة بمعدل 20 Oersteds في الثانية. إجراء قياس ثاني في حقل مغناطيسي عال بين صفر Oersteds و 30،000 Oersteds إيجابية بمعدل 200 أورستيد في الثانية الواحدة. تم قياس 10 ميكرولترات من الجسيمات النانوية المنتشرة في محلول مائي في مقياس مغناطيسي العينة المتذبذب.
إن انحدار الجزء الثاني من المنحنى هو الثابت المغنطيسي، الذي يمثل الإشارة المغنطيسية من الماء وحامل العينة. تم طرح هذا الثابت الغشاء المغناطيسي من اللحظة المغناطيسية للمحلول للحصول على اللحظة المغناطيسية للجسيمات النانوية فقط. ثم تم تحديد لحظة المغناطيسي في التشبع.
تم استيعاب الجسيمات النانوية المغلفة في الخلايا الجذعية. تُظهر صور المجهر الإلكتروني الجسيمات النانوية المغلفة بالسيترات والمغلفة PAA المحصورة في إندوسومات. بعد أن تم بيلية الخلايا عن طريق الطرد المركزي ، شكلت خلية spheroid التي يمكن الاحتفاظ بها في الثقافة لفترات زمنية طويلة.
كما تم قياس الخلايا الفردية spheroids باستخدام VSM واستخدمت لحظة التشبع المغناطيسي لحساب كمية الجسيمات النانوية في عينة الخلوية. تم العثور على امتصاص الجسيمات النانوية يعتمد على تركيزها على الحضانة. وقد أشار انخفاض في المغناطيسية من الخلايا spheroids مع مرور الوقت التحلل الحيوي للجسيمات النانوية، والتي تم تأكيدها عن طريق المجهر الإلكتروني.
وكان التحلل أكثر جوهرية في الجسيمات النانوية المغلفة بالسيترات مما كان عليه في الجسيمات النانوية المغلفة بـ PAA. باستخدام علم المغنطة، يمكن تحديد كمية تحلل الجسيمات النانوية المغناطيسية داخل الخلايا بدقة، ويمكن تقييم تأثير العقود الآجلة للجسيمات النانوية على المهتمين بالسلوك الخام. في هذا البروتوكول، تم إجراء قياسات قياس المغنطيسية على الخلايا- spheroids، ولكن يمكن تمديدها إلى الخلايا في التعليق أو الأجهزة.
مع الطريقة الموصوفة، كنت قادرا على استكشاف التفاعلات من الجسيمات النانوية المغناطيسية المصممة حديثا في نظام الخلايا المختلفة من الفائدة، ولكن أيضا يمكنك متابعة في الحية في توزيع الحيوية ومصير.
