ويعتقد أن طريقة التسجيل البصري مع صبغة حساسة الجهد لتكون التكنولوجيا المثالية لتصور كيف يعمل الدماغ. هذه الطريقة سمحت لنا لتسجيل ديناميات العصبية النفسية بشكل مستقر وموثوق به أكثر من 12 ساعة، نظرا لنا وجهة نظر على النشاط النفسي. نحن نحاول توسيع نطاق التطبيق للكشف عن التغيرات الدائرة الناجمة عن المواد الكيميائية على جميع مراحل التنمية، مثل تطبيق حمض قيمة للأمهات.
هذه التقنية راسخة بالفعل. يرجى محاولة إعادة إنتاج الدراسات باتباع الطريقة المعروضة هنا. لبدء هذا الإجراء، غمر الرأس مقطوعة الرأس في الجليد البارد ACSF في علبة جراحية الفولاذ المقاوم للصدأ.
استخراج الدماغ في غضون دقيقة واحدة ووضعها في منقار يحتوي على ACSF المبردة لمدة خمس دقائق. بعد ذلك، قم بتقسيم قسم الدماغ في خط الوسط بمشرط ووضع كلا نصفي الكرة الأرضية على كتلة أجار بنسبة 4٪. ثم، ضع كتلة الدماغ مع كل نصفي الكرة الأرضية على كتلة أجار 4٪.
امسح ACSF الزائد من الكتلة بورقة تصفية. في وقت لاحق، وتطبيق superglue على منصة هزاز. ضع كتلة agar عليها وامسح لاصقة المفرطة مع ورقة مرشح.
تطبيق بلطف كمية صغيرة من الجليد البارد ACSF من الجزء العلوي من كتلة أجار الدماغ للمساعدة في ترسيخ superglue الزائدة ومنع الغراء من تغطية الدماغ وإزعاج تشريح. بعد ذلك، قم بإصلاح المنصة إلى صينية الاهتزاز وصب ACSF المعدلة. تعيين هزاز إلى سرعة بطيئة ويكون تردد شفرة في الإعداد الأقصى.
ثم ابدأ في التقطيع. ضع الشرائح في زاوية غرفة الشريحة بالتسلسل بحيث يمكن تمييز ترتيب الشرائح بسهولة. وعادة ما يمكن الحصول على ثلاث إلى خمس شرائح من نصف الكرة الأرضية واحد.
بعد ذلك، قطع جزء جذع الدماغ باستخدام إبرة قياس 30. باستخدام فرشاة طلاء صغيرة، ضع الشريحة على مرشح الغشاء الذي يحمله خاتم زجاج شبكي. ضع الخاتم في غرفة استرداد رطبة واضمن الغطاء للحفاظ على الضغط الداخلي مرتفعًا.
عند وضع الشريحة على مرشح الغشاء، ضبط اتجاه وموقف شريحة داخل حلقة لضمان أن يكون مركزها بشكل جيد ولها اتجاه ثابت. اترك العينة عند درجة 28 مئوية لمدة 30 دقيقة ثم في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 إلى 30 دقيقة على الأقل للتعافي. لطخة الشرائح، وتطبيق بلطف 100 ميكرولترات من حل تلطيخ على كل شريحة واحتضان في 20 دقيقة لدرجة حرارة الغرفة.
المقبل، وإعداد 50 إلى 100 ملليلتر من ACSF في حاوية. ضع الخاتم مع العينة فيه لشطف محلول التلطخ. ثم، نقل شرائح مشطف إلى غرفة حضانة أخرى.
انتظر أكثر من ساعة واحدة للتعافي قبل التجربة. لبدء هذا الإجراء، قم بتشغيل مكبر الصوت والكمبيوتر ونظام الكاميرا وافتح البرنامج. صب ACSF في أنبوب 50 ملليلتر وفقاعات مع كاربوجين.
استخدام مضخة ال peristaltic لتعميم ACSF وضبط معدل التدفق إلى ما يقرب من ملليلتر في الدقيقة الواحدة. ثم، ضبط ارتفاع ماصة الشفط بحيث مستوى السائل داخل غرفة التجربة هو ثابت دائما. ضع القطب الأرضي في الغرفة.
في وقت لاحق، تعبئة القطب الزجاجي مع كمية صغيرة من ACSF ووضعها في حامل القطب. إرفاق حامل لقضيب المتلاعب. باستخدام مكبر للصوت، تأكد من أن مقاومة القطب الكهربائي هو ما يقرب من ميجام.
في جلسة التسجيل، قم بنقل شريحة من الغرفة الرطبة إلى غرفة تجريبية. اضغط على حافة الحلبة بقوة في سيليكون س- حلقة. يجب الحرص على عدم كسر الغشاء أو الجزء السفلي من غرفة التجربة.
تحت المجهر مكان غيض من القطب المحفزة وأقطاب تسجيل حقل ممكن على شريحة. تحقق من الاستجابة التي أثارتها من خلال تقديم حافز. تأكد من أن مجال الرؤية يغطي الدائرة العصبية الصحيحة في نظام التسجيل البصري.
بعد ذلك، ضبط شدة ضوء الإثارة إلى ما يقرب من 70 إلى 80٪ من القدرة القصوى في الكاميرا. باستخدام مصدر الضوء الفلورسنت، ضبط التركيز مع نظام الامتلاك. ثم، بدء التسجيل وتحليل البيانات في برنامج الحصول على صورة بعد الاستحواذ.
هذا الرقم يظهر إشارة بصرية تمثيلية على التحفيز الكهربائي من collaterol شيفر في منطقة CA1 من شريحة فرس النهر الماوس. وتظهر هذه الصور المتتالية الإشارة البصرية قبل أن يتم تطبيق أي مرشحات سفبية وزمنية بينما تظهر هذه الصور نفس البيانات بعد تطبيق خمسة في خمسة مرشح مكعب مرتين. بسبب ارتفاع معدل الإطار ودقة المكانية العالية ، فإن تطبيق المرشح لم يغير الإشارة ، ولكن تمت تصفيتها من الضوضاء التي يمكن ملاحظتها أيضًا في الدورة الزمنية المسجلة بالبكسل في تجربة واحدة.
هنا مقارنة الاستجابات النموذجية في منطقة CA1 من شرائح فرس النهر بين الفأر والجرذ. لوحظت الاستجابة الصغيرة لفرط الأقطاب في الجانب القعد من CA1 بعد 24 مللي ثانية في شريحة فرس النهر للماوس ، ولكن استجابة أكثر ضخامة للأقطاب تجاوزت الاستجابة المزيلة في شريحة فرس النهر الفئران. مرة واحدة هي ملطخة شرائح، ينبغي أن تستمر لأكثر من 12 ساعة ويمكنك إجراء التسجيلات الكهربائية الأخرى عليها.
