استخدام مجرد نموذج لتطوير نموذج كتلة سرطان الخلايا الكبدية يمكن أن تساعد الناس على توضيح المناعة الناجمة عن الورم والعلاج محددة الناجمة عن, أي العلاج المناعي الورم. الورم العظمي الذي يتطور مع تقنية تليف الكبد يحاكي السمات السريرية لسرطان الكبد البشري. يمكن أن توفر هذه الطريقة أداة مفيدة في دراسة مناعية للسرطان الكبدي.
يمكن أن يوضح العرض التوضيحي المرئي لهذه الطريقة الخطوات الصعبة من الناحية الفنية، مثل الحقن داخل البلين، التي تعتبر ضرورية لتنفيذ ناجح لهذا البروتوكول. المقبل ، يدويا تقييد ذكر ، من العمر ستة إلى ثمانية أسابيع C57 الأسود 6 الماوس الجانب الظهر. استخدام بديل 70٪ الإيثانول والدعك بيتادين لتنظيف موقع الحقن ثلاث مرات.
ثم تسليم 160 ميكرولتردات من رابع كلوريد الكربون إلى الماوس عن طريق الحقن داخل الصفتون وإعادة الحيوان إلى قفص منزله. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع و إصبع، في فيروس سيميان عمرها خمسة أشهر 40 T مستضد الماوس المعدلة وراثيا، ووضع الماوس في موقف سوبين وتأمين الأطراف مع الشريط. جعل شق استئصال البطن في منتصف المدة على طول ألبا linea, كبيرة بما يكفي لتوفير التعرض الكافي للكبد, وتشريد الأمعاء إلى اليسار.
تشريح فوق الكبد للتعرض الوريدي السفلي الكافا. حث المشبك الشريان ل ligate السفينة. استخدم إبرة الفراشة للوصول إلى الوريد الوريدي للوريد الشبكي، واضمن القسطرة يدويًا.
تبديل بعناية المحاقن لكل حل، وتقديم بنجاح 15 ملليلتر من الحل واحد، 15 ملليلتر من 0.75٪ الحل الكولاجين اثنين، و 15 ملليلتر من الحل اثنين دون الكولاجين عبر القسطرة، في حوالي 8.9 ملليلتر من الحل لكل معدل تدفق دقيقة. في نهاية الضخ ، حصاد كتلة الورم في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر تحتوي على 10 إلى 15 ملليلتر من برنامج تلفزيوني. استئصال الورم من الفأرة MTD2 التالية كما هو موضح للتو.
استخدام مقص لقطع الكبد إلى قطع أصغر. نقل الأنسجة إلى حاوية جديدة من برنامج تلفزيوني جديد لإزالة بقية الدم من الأنسجة قبل نقل قطع الأنسجة إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر تحتوي على خمسة ملليلترات من متوسطة كاملة لـ RPMI. المفروم عينات الكبد غسلها حتى القطع يمكن أن تناسب بسهولة من خلال غيض من ماصة خمسة ملليلتر.
إضافة ما يكفي من المتوسطة إلى أنبوب للوصول إلى حجم النهائي من 30 ملليلتر. استخدم ماصة من خمسة ملليلتر لتتريك أجزاء الأنسجة، قبل تصفية المحلول من خلال مصفّة 70 ميكرومتر في أنبوب جديد سعة 50 ملليلتر. غسل مصفاة عدة مرات مع متوسطة كاملة.
اضبط مستوى الصوت النهائي إلى 50 ملليلتر مع متوسطة كاملة إضافية. سرعان ما تدور التعليق عن طريق الطرد المركزي إلى حد أقصى من 50 مرة ز قبل وقف الطرد المركزي وdeanting supernatant. ثم إعادة تعليق بيليه في 20 ملليلتر من برنامج تلفزيوني للعد.
بالنسبة للحقن داخل البلينوسيني للبيبات الكبدية MTD2، قم بتحميل حقنة ذات ملليلتر واحدة مجهزة بإبرة 27 قياس لكل متلقي مع 220 ميكرولترات من خلايا الكبد لكل فأرة. تأكيد عدم الاستجابة لقرصة إصبع في مُجَدَّد بالجث كلوريد الكربون. بداية فقط تحت عضلة العمود الفقري، المقبل، وجعل شق سنتيمتر واحد على الجناح الأيسر بالتوازي مع الضلع الثالث عشر من أقصى الظهر واستخدام ملقط حادة مدببة لإضفاء مظهر الطحال.
قص الطحال مع اثنين من مقاطع التيتانيوم المتوسطة الحجم بين الشريان الزبال والوريد، وتقديم 200 ميكرولتر من الخلايا في القطب السفلي من الطحال. قص الفرع السفلي من pedicle مع مقطع واحد متوسطة الحجم وقطع الطحال بين اثنين من لقطات وضعت في البداية. إزالة القطب السفلي من الطحال الذي تم حقنه مباشرة مع الخلايا السرطانية واستخدام 3-0 polyglactin 910 توقف خياطة لإغلاق طبقة العضلات الداخلية.
ثم استخدام مقاطع الجروح الصلب تعقيم لإغلاق طبقة الجلد الخارجي وإدارة تحت الجلد خمسة ملليغرام لكل كيلوغرام من carprofen. بعد العزلة عن الفئران المُستبدِة المُعدَّرة وراثياً T كما هو مُظهر، يمكن ملاحظة خلايا الكبد والورم المخترقة. تظهر الخلايا عادةً قابلية البقاء بنسبة 100٪ تقريبًا بعد المعالجة.
بعد التلقيح داخل الخلايا الخبيثة في الحيوانات المعالجة رباعي كلوريد الكربون من النوع البري ، تنمو خلايا الكبد المزروعة بنجاح وبشكل موثوق أورام سرطان الكبد العظمي التي تعبر عن فيروس سيميان الخاص بالورم 40 T. إعداد لدينا السكان قابلة للحياة ونقية من خلايا الكبد من كتلة MTD2 والإدارة الدقيقة للحقن داخل البلينوسين مهمة لنجاح هذا الإجراء. على الرغم من أن فريقنا قد اختبر التلقيح الكبدي في الفئران المتلقية عن طريق الحقن داخل الأوعية وداخل الصفاق، لم تكن هذه الطرق الأخرى قادرة على الحث على سرطان الكبد.
يوفر هذا النموذج منصة فريدة من نوعها تمكن من التحقيق للمراقبة المناعية والتسامح في المراحل المبكرة والمراحل اللاحقة من تطور الورم. يرجى توخي الحذر عند استخدام رابع كلوريد الكربون، كما هو سام.
