والهدف من هذه الطريقة هو تقييم العواقب الوظيفية لهندسة أنسجة القلب في نموذج احتشاء الحيوانات المبردة الصغيرة. وميزة هذه الطريقة هي أنها تسمح بالتحريض على احتشاء عضلة القلب القابلة للاستنساخ نسبياً مع أحجام احتشاء مستقرة. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القارص، ضع خنزير غينيا المُخَدَّد على منصة احترار 40 إلى 42 درجة مئوية في موضع الوَبَن.
تطبيق مرهم العين والحلاقة وفك الصدر. تطبيق 25 درجة مئوية بالموجات فوق الصوتية هلام محول على الجلد المكشوف ووضع محول من نظام صدى القلب على الصدر للحصول على ثنائي الأبعاد مناظير محور طويل في وضع B من الرقبة اليمنى نحو الساق اليسرى في الطائرة من الصمام الأبهري مع تصور المتزامنة من قمة البطين الأيسر للتحقيق في وظيفة البطين الأيسر قبل المنطوق. ثم تحويل محول 90 درجة للحصول على محور قصير عرض الوضع B في مستوى الحليمات المتوسطة.
بعد الحصول على الصورة الأخيرة، نقل خنزير غينيا إلى الجدول الجراحي وشريط الأطراف في موقف نسر انتشار. تطهير الجلد المعرضة مع اثنين من اليود المتتابعة القائمة على الدعك الإيثانول و 80٪ وجعل شق عمودي 1.5 سنتيمتر في منطقة القصبة الهوائية. تشريح بصراحة العضلات التي تغطي القصبة الهوائية.
عندما يمكن ملاحظة القصبة الهوائية، ثقب أنبوب الهواء مع قنية قياس 18 IV وأدخل الجزء المرن من القنيّة كقنية القصبة الهوائية. توصيل أنبوب القصبة الهوائية إلى جهاز تنفس حيواني للتهوية المستمرة أثناء الإجراء وفرز مساحات الأضلاع بدءًا من أول فراغ بيني لتحديد مكان الفضاء الوربي الخامس. إجراء شق أفقي سنتيمترين على الفضاء الوربي الخامس على الجانب الأيسر من خنزير غينيا وإزالة الأنسجة تحت الجلد قبل تشريح العضلات مع كهربائي حتى يتم التوصل إلى العضلات الوربية.
تشريح بلطف العضلات الوربي مع ملاقط ومقص صغير حتى يتم الوصول إلى الفضاء الجنبي ويمكن تصور الرئة اليسرى. إدراج الداهم بين الأضلاع وفتح الداهم بعناية حتى يتم الحصول على رؤية جيدة للقلب. فتح التأبين ما يقرب من سنتيمتر واحد في منطقة الجدار البطين الأيسر الأمامي ووضع ضغط على الرئة اليسرى لحماية الرئة من التلف عند التسبب في cryoinjury من البطين الأيسر.
بعد ذلك، يبرد طرف ختم معدني متآكل بقطر مقطعي عرضي يبلغ 0.5 سنتيمتر في النيتروجين السائل لمدة ثلاث دقائق قبل الضغط على المسبار على الجدار الأمامي الأيسر للقلب لمدة 30 ثانية. ثم ضع 200 درجة مئوية الحديد لحام الكهربائية داخل الطابع لتدفئة الطابع بحيث يمكن إزالة المعدن من الأنسجة. بعد تطبيق الطابع الثالث ، قم بإزالة الدارع من الفضاء الوربي ومقطّط أنبوب التدفق من جهاز التنفس الصناعي لمدة ثانيتين لتضخيم الرئتين بأقصى ضغط لتجنب الزهاء الرئوي للرئة.
ثم أغلق الأضلاع مع اثنين من خياطة 4-0، والعضلات على الأضلاع مع خياطة 5-0 تشغيل والجلد مع 5-0 غرز خياطة واحدة. بعد إزالة أنبوب القصبة الهوائية، استخدم واحد 8-0 خياطة لإغلاق موقع ثقب في القصبة الهوائية وإغلاق الجرح مع غرزة واحدة ثلاث 5-0 الغرز. بعد سبعة أيام من التبريد، وإزالة الغرز وجعل شق الجلد أفقي اثنين سنتيمتر في منطقة ندبة من الجانب الجانبي الأيسر واستخدام الكهربائي لتشريح بلطف التصاقات الجنبي اضافية.
فتح بعناية الفضاء الجنبي مع مقص وإدراج موزع الأضلاع لفضح القلب. بصريا تحديد منطقة احتشاء من لونها شاحب بالمقارنة مع قارعة القلب المحيطة صحية ووضع التصحيح نسيج القلب هندسيا على منطقة احتشاء. تأمين التصحيح مع اثنين 8-0 الغرز في كلا الجانبين في منطقة غير مُهدَّد من القلب وتضخيم الرئتين مع الضغط لتجنب الظفرات من الرئتين.
ثم إزالة الداهم من الفضاء الوربي وإغلاق الحيوان كما هو موضح. بعد أربعة أسابيع من زراعة أنسجة القلب المهندسة، قم بإجراء تخطيط صدى القلب عبر الصدر كما هو موضح لتقييم التغيرات في العمل الإضافي لوظيفة البطين الأيسر. ميسون trichrome تلطيخ أربعة أسابيع بعد cryoinjury يكشف عن ندبات نقلية كبيرة أكثر من 25٪ من عضلة القلب البطين الأيسر في المتوسط.
يُظهر تلطيخ الديستروفين ترقيع عضلة القلب الكبيرة التي أعادت العضلات جزئيًا إلى الندبة وتلطيخها لـ Ku80 البشري الذي يؤكد الأصل البشري لميناء القلب الذي تم تشكيله حديثًا. رصد صدى القلب عبر الصدر من أنسجة القلب المهندسة مزروعة يكشف عن تحسن في الجزء من طرد البطين الأيسر, منطقة كسور تقصير, وانخفاض في القطر الأيسر البطين والانبساطي. من الضروري أن تفتح بعناية التجويف الجنبي في هذا النوع من عملية إعادة القيام كما الالتصاقات بين جدار الصدر والبطين الأيسر يمكن أن تكون موجودة وهناك خطر معين لإصابة عضلة القلب البطين الأيسر.
بعد زرع أنسجة القلب البشرية المهندسة، يمكن استخدام عدة طرق لرصد التغيرات في الجزء الأيسر من طرد البطين. إلى جانب تخطيط صدى القلب، يمكن استخدام قياس الغازية من حلقات حجم الضغط لرصد تلك التغيرات. هذه الطريقة تسمح للتحقيق في جميع جوانب زرع الأنسجة البشرية المهندسة.
يمكن تقييم النتائج الوظيفية وكذلك المخاطر المحتملة مثل عدم انتظام ضربات القلب في هذا النموذج الحيواني الصغير.
