Name: assessing urinary tract junction obstruction defects by methylene blue dye injection
Uploaded: 2017-10-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection at JoVE.com

أود أن أشكر الدكتور ألن سين بيرانتونى (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) لدعم تقديم هذه المخطوطة. أود أيضا أن أشكر الدكتور مايكل هول (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) و Nirmala شارما (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) لتحرير هذه المخطوطة. أنا ممتن لأي ثانغ (سايك) لتربية ماوس ممتازة له. وأيد هذا العمل المعاهد الوطنية للصحة، المعهد الوطني للسرطان، ومركز "أبحاث السرطان".

الفئران (فلكس Wnt5a/فلكس الفئران (Wnt5a tm1.1Tpy) وخط Dll1Cre، ونموذج الماوس أوفجو) 7 تدار وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ودراسة في إطار بروتوكول أقرته لجنة الاستخدام ورعاية الحيوان NCI-فريدريك.
 1-"إعداد حل صبغة أزرق الميثيلين" <ol><li>قياس مسحوق أزرق الميثيلين 0.1 غ.</li>
	<li>حل أزرق الميثيلين في المحلول الملحي العادي 10 مل أو 1 × الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) تماما بواسطة فورتيكسينج.</li>
	<li>تصفية الحل الميثيلين الأزرق 10 ملغ/مل مع عامل تصفية المحاقن (حجم المسام غشاء 0.45µm) للقضاء على انسداد أثناء حقن.</li>
	<li>تجميع فروة الرأس عقيمة الوريد مجموعة (27GX3/4 &#8243;) مع 3 مل حقنه المتاح وملء المحاقن مع 3 مل تصفية حل أزرق الميثيلين. 
	ملاحظة: لمنع الضغط الهيدروليكي وتدفق صبغ اللاحقة، ضع طرف إبرة أعلاه حقنه مليئة الأزرق الميثيلين الحل.</li>
</ol> 2. تشريح الأجنة "قبل الولادة" <ol><li>نظيفة تشريح المقص والملقط مع الإيثانول 70%-</li>
	<li>لجمع الأجنة قبل الولادة في E18.5 أو E19.5، euthanize الفئران الحوامل استخدام استنشاق أول أكسيد الكربون 2 أولاً ثم قم بإجراء خلع عنق الرحم وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة- 
	ملاحظة: الماوس الإناث الحوامل وعادة ما تلد البدء في E18.5، إلا أن الكليتين أكبر أسهل للتعامل معها. ولذلك، الكلي في E19.5 أقرب للولادة أسهل لإجراء هذا التحليل على. ومع ذلك، من الجراء مع المسالك البولية ثنائية العراقيل يموت بعد الولادة. وينبغي تبعاً لخصائص الفئران التجريبية، تحديد يوم أو وقت جمع مناسب تجريبيا.</li>
	<li>رذاذ الإيثانول 70% على سطح البطن البطني ثم قم بفتح التجويف البطني بطنيا باستخدام مقص وملقط تشريح.</li>
	<li>رفع الرحم كامل وفصل من الجسم بالقطع مع تشريح مقص على نصائح قرون الرحم.</li>
	<li>شطف الرحم كامل مع برنامج تلفزيوني 1 x في طبق بيتري.</li>
	<li>الرحم سيجمينتالي مع تشريح مقص قطع وإزالة المشيمة أوروبية مع تشريح الملقط للكشف عن الأجنة في الأكياس صفار.</li>
	<li>إزالة كيس الصفار أولاً ومن ثم إزالة الغشاء السلوى بتشريح الملقط لتحرير الأجنة قبل الولادة-</li>
	<li>قطع رأس جنين بتشريح المقص. تمحو الدم الزائد مع منصات شاش معقم. دبوس الجنين إلى أسفل مع سطحه البطني حتى على مجهر تشريح مجهزة بكاميرا رقمية للتصوير. جمع ذيله للتنميط إذا لزم الأمر- 
	ملاحظة: إجراء حقن الأجنة واحد في وقت واحد.</li>
	<li>بعناية فتح التجويف البطني للجنين بالملقط بتمزق الجلد. ثم، بعناية إزالة الزائدة والأنسجة مثل الكبد والمعدة والأمعاء بالملقط بقصها أو الانسحاب منها لفضح الكليتين والحالب والمثانة التي تقع في دورسالي ( الشكل 1A). امتصاص الدم الزائد من تشريح الجنين مع منصات شاش معقم إذا لزم الأمر- 
	ملاحظة: الدم الزائد يتداخل مع تحديد الحوض الكلوي لحقن صبغة.</li>
</ol> 3. حقن صبغة "أزرق الميثيلين" إلى الحوض الكلوي ورصد تدفق صبغ <ol><li>إزالة الفقاعات في الإبر والأنابيب بطرد أزرق الميثيلين الحل من طرف الإبرة بالضغط الهيدروليكي. رفع المحاقن التي تحتوي على الحل صبغ فوق مستوى الحافة إبرة لبدء تدفق، وثم انخفاض المحاقن لوقف التدفق.</li>
	<li>أدخل الإبرة في الحوض الكلوي قرب الحالب الدانية، مع الحرص على عدم الإخلال بأنها وضعت مرة واحدة. إجراء حقن صبغة في الكلي لتحديد به انسداد المسالك البولية. 
	ملاحظة: إجراء صبغ حقن في أي الكلي غير طبيعي 7 الأولى باتباع نفس الطريقة لتحديد به انسداد المسالك البولية.</li>
	<li>رفع المحاقن يصل حوالي 20 سم لتوفير الضغط الهيدروليكي واسمحوا ميليلتر 15-60 ميليلتر من تدفق الحل الصبغ. معدل التدفق ستكون حوالي 3 ميليلتر/s إذا أثير المحاقن لهذا الارتفاع فوق الجنين.</li>
	رصد <li>اللون الأزرق لصبغ ابتداء من أول في الحوض الكلوي، ثم في طول الحالب، وأخيراً في التجويف المثانة. 
	ملاحظة: يستغرق حوالي 5 s لمشاهدة لون صبغة ضعيفة تنشأ داخل التجويف المثانة إذا كان يتم بشكل صحيح إدراج الحالب في المثانة. تسمح الصبغة تتراكم في موقع المحظورة حوالي 15 ثانية إذا ظهر أي لون الصبغة في تجويف المثانة.</li>
	<li>مكان المحاقن وصولاً إلى وقف تدفق صبغ وإزالة الإبرة من الكلي.</li>
	<li>تأخذ الصور الكلي والحالب والمثانة تتبع مع الحل صبغ استخدام الكاميرا والتصوير البرنامج متصلاً ستيريوميكروسكوبي.</li>
	<li>جعل سجل hydronephrosis الكلي، هيدروريتير، والموقف النهائي للحل صبغ في دفتر ملاحظات معمل.</li>
	حقن <li>أداء الكلي كونترالاتيرال كما هو موضح في المقاطع 3.1) إلى 3.5) والسماح بتدفق صبغ حوالي 20 s في المجموع- 
	ملاحظة: سيتم ملء التجويف المثانة مع الحل الصبغ، المبين بلون أزرق قوي، إذا كان الحالب يتم إدراجها بشكل صحيح في تجويف المثانة. بعد تقييم لعرقلة مفرق المسالك البولية، يمكن أن تكون ثابتة الحالب والمثانة من أجل تمزيقها.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Rasouly, H. M., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lower+urinary+tract+development+and+disease.">Lower urinary tract development and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).</li><li>Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-Box+Genes+in+the+Kidney+and+Urinary+Tract.">T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract.</a> Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).</li><li>Bohnenpoll, T., Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ureter+growth+and+differentiation.">Ureter growth and differentiation.</a> Semin Cell Dev Biol. 36, 21-30 (2014).</li><li>Nicolaou, N., Renkema, K. Y., Bongers, E. M., Giles, R. H., Knoers, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic,+environmental,+and+epigenetic+factors+involved+in+CAKUT.">Genetic, environmental, and epigenetic factors involved in CAKUT.</a> Nat Rev Nephrol. 11, 720-731 (2015).</li><li>Tripathi, P., Wang, Y., Casey, A. M., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+canonical+Smad+signaling+in+ureteral+and+bladder+mesenchyme+causes+ureteropelvic+junction+obstruction.">Absence of canonical Smad signaling in ureteral and bladder mesenchyme causes ureteropelvic junction obstruction.</a> J Am Soc Nephrol. 23, 618-628 (2012).</li><li>Aoki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Id2+haploinsufficiency+in+mice+leads+to+congenital+hydronephrosis+resembling+that+in+humans.">Id2 haploinsufficiency in mice leads to congenital hydronephrosis resembling that in humans.</a> Genes Cells. 9, 1287-1296 (2004).</li><li>Yun, K., Perantoni, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydronephrosis+in+the+Wnt5a-ablated+kidney+is+caused+by+an+abnormal+ureter-bladder+connection.">Hydronephrosis in the Wnt5a-ablated kidney is caused by an abnormal ureter-bladder connection.</a> Differentiation. 94, 1-7 (2017).</li><li>Uetani, N., Bouchard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plumbing+in+the+embryo:+developmental+defects+of+the+urinary+tracts.">Plumbing in the embryo: developmental defects of the urinary tracts.</a> Clin Genet. 75, 307-317 (2009).</li><li>Murawski, I. J., Watt, C. L., Gupta, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+urinary+tract+defects+in+mice:+methods+to+detect+the+presence+of+vesicoureteric+reflux+and+urinary+tract+obstruction.">Assessing urinary tract defects in mice: methods to detect the presence of vesicoureteric reflux and urinary tract obstruction.</a> Methods Mol Biol. 886, 351-362 (2012).</li><li>Weiss, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephric+duct+insertion+requires+EphA4/EphA7+signaling+from+the+pericloacal+mesenchyme.">Nephric duct insertion requires EphA4/EphA7 signaling from the pericloacal mesenchyme.</a> Development. 141, 3420-3430 (2014).</li></ol>

ليس له علاقة بالكشف عن صاحب البلاغ.

الماوس الكلي الوظيفية بدءاً E16.5 واختبار حقن صبغة من الممكن نظرياً من هذه النقطة الزمنية. ومع ذلك، الكلي صغير جداً بالحقن مع الحل صبغ وتعمل مثل هيدرونيفروسيس وهيدروريتير لا تراعي وضوح حيث تعمل هذه تأثير ثانوية من البول التي تراكمت بسبب النقل البول غير طبيعي. وتتضح هذه تعمل، من العراقيل مثل آبجو أو أوفجو، في E18.5 منتفخة الكليتين والحالب. الكلي أكبر من الأجنة في E19.5 أو المواليد الجراء أسهل للتعامل مع تلك الأجنة في E18.5 أو الأصغر سنا. ومع ذلك، من الجراء مع المسالك البولية ثنائية العراقيل يموت بعد الولادة. لذلك، إجراء تجارب للتحقق من صحة كاكوت تعمل بشكل مناسب اختيار الأجنة قبل الولادة أو الجراء اعتماداً على خصائص الماوس التجريبية.
تشريح بعناية الحفاظ على نظام المسالك البولية سليمة قبل إجراء حقن الصبغة لفحص العيوب المحتملة. هذا أساسا مهما للكليتين هيدرونيفروتيك غير طبيعي والحالب، ومنتفخة جداً والتالفة بسهولة أثناء إزالة أنسجة إضافية للكشف الكلي والمسالك البولية. إتلاف هذه الأجهزة أثناء تشريح سيحول دون تحديد العيوب الحقيقية كاملة. على سبيل المثال، يبين الشكل 2 تمدد متميزة الحالب، ولكن فشل تسرب الصبغة لإظهار النقطة الطرفية من hydroureter القاصي.
دائماً يجب التأكد من إزالة فقاعات الهواء من الأنبوب والإبرة قبل الحقن، كما أن هذه الفقاعات سوف عرقلة التدفق السليم صبغ. بعد تشريح ناجحة، الخطوة الحاسمة لفحص المسالك البولية العرقلة إدخال تلميح إبرة في الحوض الكلوي. إدخال الإبرة في النصف العلوي من الكلي، قرب الحالب الدانية، من المفيد توجيه نصيحة إبرة في الحوض الكلوي. وينبغي أن النقطة طرف الإبرة نحو الحالب الدانية. حيث توجد الأوعية الدموية الكلوية القريبة الدانية الحالب، قد تدفق الصبغة على طول الأوعية الدموية الكلوية إلا غيض إبرة تشير نحو الحالب الدانية. وفي هذه الحالة، ينبغي أن تعدل نصيحة إبرة في الحوض الكلوي نحو الحالب الدانية. علاوة على ذلك، قد تمر الإبرة من خلال الكلي إذا كان إدراج عميقة جداً، مما تسبب في الصبغ تسرب من الكلي وإلى تجويف الجسم. الحرص على إدخال تلميح إبرة في الحوض الكلوي ورصد طرف الإبرة داخل الحوض الكلوي يمكن أن يساعد في تجنب هذا الفشل. في بعض الأحيان، الإبرة سوف تصبح سدت أنسجة الكلي أثناء الحقن إذا لم يتم إدراجها في الحوض الكلوي. وفي هذه الحالة، إزالة الأنسجة من الإبرة وإعادة تدفق صبغ قبل إعادة تشغيل الضغط الهيدروليكي وإعادة توجيه نصيحة إبرة تجاه الحوض الكلوي. وبالإضافة إلى ذلك، قد تكون تعمل المرتبطة كاكوت أحادية أو ثنائية. ولذلك، ضمان أن يتم الحقن بشكل منفصل لنظم اليسار واليمين البولي. على النحو الأمثل، إجراء الحقن أولاً مع الكلي غير طبيعي ومن الواضح أن للتحقق من ما إذا كان أوفجو جانب واحد.
الصورة مباشرة بعد الاختبار حقن نظراً للصبغة يمر من الحوض الكلوي عبر الحالب بسرعة. من الصعب أن ترى اللون أثناء التصوير من الحالب عادي لأنه الحالب عادي أنبوب رفيع، على الرغم من أن يمكن رصد تدفق صبغ تحت مجهر تشريح. كبديل للأزرق الميثيلين، يمكن أيضا أن تستخدم الأخضر سريع في برنامج تلفزيوني 1 x 1% وسوف تظهر لون أخضر داكن9. بالإضافة إلى حقن صبغة، أقسام نسيجية من الكلي والحالب عقب ح &#38; ه تلطيخ سيؤكد العيوب في الكلي والحالب. أيضا، تصوير المقاطع مع مراسل محددة الحالب طريقة إضافية للتأكد من أوفجو7. ومع ذلك، ينبغي أن تكون هذه الفروع سليمة وتقطيع المسلسل ضروري لتجنب المغلوطة. بالمقارنة مع التحليلات التقليدية المستندة إلى قسم نظم البولية، هذا البروتوكول حقن صبغة بطريقة فورية لمراقبة سلامة الكلي والحالب البراءات وتصور العوائق مثل أوبجو أو أوفجو.
يوفر هذا البروتوكول بسيطة وواضحة الأسلوب توكويكلي تصور هيكل المسالك البولية في أواخر المرحلة الماوس التنمية، مما يسمح تحليل التنمية المسالك البولية. يمكن استخدام الأسلوب الموصوفة هنا لتقييم الطفرات التي تسبب عيوب المسالك البولية الإنمائية، كوسيلة لتحديد التغيرات في تنمية النضج أو الحالب المسالك البولية.

الجهاز البولي يتكون من زوج من الكلي والحالب والمثانة ومجرى البول مشتركة. والوظيفة الرئيسية للجهاز البولي المحافظة على التوازن الجسم بإدارة توازن الماء والكهرباء للدم. الكلي تصفية الدم لتركيزات اﻻلكتروﻻيت التحكم وحمض قاعدة التوازن، وإنتاج البول تفرز فائض المياه والنفايات بما في ذلك الذوائب ونواتج الأيض. ثم يتم نقل البول من خلال الحالب من الحوض الكلوي الكلي إلى بلاديرين بطريقة أحادية الاتجاه حيث يتم تخزينها والقضاء عليها في نهاية المطاف عن طريق الاحليل1.
الحالب أنابيب مستقيمة مصدرها القناة ونمائية. بعد الناشئين من لاصق ونمائية يوم الجنينية 10.5 (E10.5) في الماوس، ساق الحالب الغضروفي ويفرق في بنية متعددة الطبقات تسمى أوروثيليوم وكتيمه بين الماوس E12.5 و E16.5. كما تختلف الخلايا الوسيطة التي تحيط بساق الحالب إلى ثلاث طبقات مكونة من الخلايا اللحمية الداخلية وخلايا العضلات الملساء سميكة الوسيطة الليفية أدفينتيتيال الخارجي. موجات تمعجية الحالب الشروع في الحوض الكلوي تنتشر من خلال طبقة العضلات الملساء لجدار الحالب إلى المثانة لنقل البول2،3، الذي يتم إنتاجه في بداية E16.5 في الماوس1.
التشوهات الخلقية في الكلي والمسالك البولية (كاكوت) من بين الأمراض الوراثية الأكثر شيوعاً، في حوالي 1 في المائة من الأجنة البشرية1،4، وتتألف من مجموعة متنوعة من تعمل بما في ذلك هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. ويؤدي التراكم غير طبيعي للبول في الكلي والحالب تشكيل هيدرونيفروتيك hydroureter والكلى. أحد الأسباب لتشكيل هيدرونيفروسيس و/أو هيدروريتير من انسداد المسالك البولية. انسداد مفرق أوريتيروبيلفيك (أوبجو) بسبب تدفق البول الشاذة بسبب انسداد الحالب الدانية بين الحوض الكلوي، مما أدى إلى هيدرونيفروسيس وتضييق hydroureter الدانية مع أنجولاتيون أو المستمرة للطي5، 6. وباﻹضافة إلى ذلك، إدراج الحالب القاصي حمل خارج الرحم في جدار المثانة أو المسالك التناسلية يسمى عرقلة مفرق أوريتيروفيسيكال (أوفجو). يمكن أيضا لحمل أوفجو هيدرونيفروسيس وهيدروميجوريتير7،تشكيل8. هو عيب مفرق (أوفج) أوريتيروفيسيكال إضافية الجزر فيسيكوريتيريك (فور). فور يتسم بالتدفق إلى الوراء البول من المثانة نحو الكلي في أوفج. بالمقارنة مع أوفجو، الأجنة قبل الولادة مع فور لا واضح إظهار الكلي منتفخة هيدرونيفروتيك أو هيدروريتير الشديد النمط الظاهري9.
في مختبر الماوس، يمكن دراسة تدفق البول بحقن صبغة، مثل الميثيلين الأزرق، في الحوض الكلوي9. الحل إينجيكتيدميثيليني الأزرق وسوف تتبع مسار البول من الحوض الكلوي عن طريق الحالب والمثانة. Hydronephrosis يمكن أن تعترف بزيادة الصبغة في الكلي. ويمكن الكشف عن آبجو كانسداد تدفق الصبغة في الحالب الدانية مع الحوض الكلوي منتفخة5. أي تمدد الحالب المؤشرة قطرها اتسعت يوضح مثال على هيدروريتير. أخيرا، يشير إلى أوفجو مع هيدرونيفروتيك منتفخة الكلي تراكم صبغ في جدار المثانة أو في موقع المسالك التناسلية والمتوسعة7،هيدروميجوريتير10. للكشف عن فور، يتم حقن الحل صبغ في المثانة ورصد تدفق تراجعية لاحقة في الكلي9.
ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين إلى الحوض الكلوي الجنين قبل الولادة. هذا البروتوكول يسمح لتعقب تدفق البول من الحوض الكلوي من خلال الحالب والمثانة والتحقق من المسالك البولية مفرق العراقيل المحتملة مثل آبجو أو أوفجو.

<table><tbody><tr><td>Methylene blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140</td><td></td></tr><tr><td>Quality Biological Inc. NORMAL SALINE - 500ML</td><td>Fisherscientific</td><td>50-983-204</td><td></td></tr><tr><td>3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane</td><td>Pall corporation</td><td>4614</td><td></td></tr><tr><td>Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4&quot; 12&quot;&amp;nbsp;</td><td>EXELINT</td><td>26709</td><td></td></tr><tr><td>Delicate Operating Scissors</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-6702</td><td></td></tr><tr><td>Micro Dissecting Forceps</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Tweezers; Pattern #5</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2&quot;</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

assessing urinary tract junction obstruction defects by methylene blue dye injection

المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب هي التشوهات الخلقية حمل هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. يمكن تقييم المسالك البولية موريني مفرق عرقلة العيوب من خلال تتبع تدفق صبغة أزرق الميثيلين داخل الجهاز البولي. يتم حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي للكلى الجنينية قبل الولادة، ورصد تدفق صبغ من الحوض الكلوي الكلي عن طريق الحالب وفي التجويف المثانة بعد الضغط الهيدروستاتي. تراكم صبغ سيكون واضحا في التجويف المثانة المسالك البولية الفترة المحيطة بالولادة الطبيعية، ولكن ستكون مقيدة بين الحوض الكلوي ونقطة نهاية الحالب غير طبيعي، في حالة حدوث عوائق المسالك البولية. ويسهل هذا الأسلوب تأكيدا للمسالك البولية مفرق العراقيل والتصور هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. ويصف هذه المخطوطة بروتوكول لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي لتأكيد العراقيل مفرق المسالك البولية.

تقع الظهرية لمعظم الأعضاء الداخلية مثل الكبد والأمعاء والكلى والجهاز البولي السفلي. بعد إزالة هذه الأجهزة الداخلية الأخرى، هي زوج من الكلي والحالب ومثانة مفردة مرئية (الشكل 1A). عند تشريح ناجحة، سوف يتدفق صبغ حقن الحوض الكلوي من الكلي إلى المثانة عن طريق الحالب. الحوض الكلوي هو الجزء الشبيهة بالقمع الدانية متسعة من الحالب في الكلي. ولذلك، نقطة حقن صبغة بالقرب من الحالب الدانية مرئية متصلة مع الكلي كما هو مبين بالأسهم السوداء (الشكل 1B-ج 1). بعد الحقن بمحلول صبغة أزرق الميثيلين إلى الكلي واحد، تنبثق الصبغ الحوض الكلوي عن طريق الحالب وإلى المثانة الناتج بلون أزرق مرئية في التجويف الحالب والمثانة، إذا لا توجد عوائق المسالك البولية (1B الشكل ). الحل صبغ عادة ما يختفي في الحالب عادي بسرعة حتى قبل التصوير، ولون الصبغة في الحالب لأنه ضعف الحالب العادي أنبوب رفيع. ومع ذلك، يمكن ملاحظة تدفق الصبغة في الحالب مع مجهر تشريح. يظهر لون أزرق قوي في التجويف المثانة نتيجة لتدفق أطول من حوالي 20 ثانية في المجموع بعد الحقن من كلا الكليتين مع الحل صبغ (الشكل 1). تراكم صبغ في المثانة بعد حقن كونترالاتيرال يشير إلى أن الجهاز البولي الثاني ليس لديه أي عرقلة مفرق المسالك البولية.
ومن المعقول لحقن الكلي غير طبيعي من الواضح أولاً للتأكد من أي عوائق مفرق المسالك البولية. يمكن التعرف على الكليتين هيدرونيفروتيك غير طبيعي بحجم أكبر أو سطح شفافة رقيقة مع توسيع الحوض الكلوي. ويرد الكلي هيدرونيفروتيك منتفخة مثال وهيدروريتير طبيعي متوسعة في الشكل 2 ألف. عادة ما ينتج hydroureter متوسعة تصور أقوى لأنه يحتفظ بحجمه الموسع حل صبغ أكثر بكثير مما الحالب العادي، رقيقة. في حالة تلف الكليتين أو الحالب أثناء التشريح، فحص المسالك البولية مفرق العراقيل من المستحيل للصبغ سوف تسرب أبيرانتلي في الموقع معطوب. على سبيل المثال، هيدروريتير غير طبيعي في الشكل 2 أ أصيبت بأضرار في منتصفه، و، ولذلك الموقف النهائي للحل صبغ غير واضح ولا يمكن التحقق من أوفجو على الرغم من عدم وجود الصبغة في تجويف المثانة (الشكل 2A). ومع ذلك، قد هذا الجهاز البولي الفترة المحيطة بالولادة مع hydroureter المتوسعة والكلى هيدرونيفروتيك منتفخة أوفجو كما هو توسيع الحالب على طوله وهو واضح منتفخة في الكلي. البولي كونترالاتيرال يظهر العادي كما أنه الحالب رقيقة والصبغة بعد ذلك يدخل التجويف المثانة (الشكل 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56247/56247fig1.jpg"> 
رقم 1. أمثلة لحقن صبغة أزرق الميثيلين إلى نظام المسالك البولية عادية. (أ) صورة نموذجية للبولي من جنينا الفترة المحيطة بالولادة (E19.5) بعد إزالة الأنسجة الزائدة. وتعتبر هاتين الكليتين والحالب اثنين من مثانة مع الأعضاء التناسلية، الخصيتين هنا (ب) مثال لحقن صبغة في الكلي طبيعي. ويمكن رؤية نقطة حقن في الحوض الكلوي الكلي (السهم الأسود). لون صبغة ضعيفة مرئياً في الحالب والمثانة التجويف بعد السماح بالصبغة بالتدفق لتراكم صبغ (ج) س. 5 في التجويف المثانة بعد الحقن من كلا الكليتين العادي. اللون يصبح قويا من تراكم صبغ الحل في التجويف المثانة بعد السماح لصبغ تدفق ل 20 ثانية. الحوض الكلوي مرئياً أيضا مع لون صبغ ضعف في الكلي. باء: المثانة، ك: الكلي، الخصية t:، الحالب u:. <a href="//ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56247/56247fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56247/56247fig2.jpg"> 
رقم 2. أمثلة من الميثيلين الأزرق صبغ حقن في البولي مع hydroureter الانفرادية. (أ) مثال لحقن صبغة في البولي مع هيدروريتير وكلي هيدرونيفروتيك من ألجرو الإناث المواليد مع تدفق صبغة من 15 ثانية. هيدرونيفروتيك الكلي أكبر بوضوح من الكلي كونترالاتيرال. المتوسعة الحالب المقابلة ولون الصبغة يمكن التعرف عليها بشدة ولكن معطوب هيدروريتير وضوح كما لاحظت تسرب صبغة الحل في تجويف الجسم. (ب) حقن صبغة في الكلي كونترالاتيرال من البولي مع hydroureter الانفرادية مع صبغ تدفق 20 س. Injected صبغ الحل إلى الكلي العادي يتراكم في التجويف المثانة لتأكيد أن الشذوذ الانفرادية. باء: المثانة، هونج كونج: الكلي هيدرونيفروتيك، وهو: هيدروريتير ك: الكلي، يو: الحالب، Ut: القرن الرحم. <a href="//ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56247/56247fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection at JoVE.com

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي يسهل تقييم المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب أثناء تطوير المسالك البولية الجنينية الماوس. ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي.

تقييم العيوب عرقلة مفرق المسالك البولية عن طريق حقن صبغة أزرق الميثيلين

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

assessing-urinary-tract-junction-obstruction-defects-methylene-blue

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

15.6K Views.  National Institutes of Health. حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي يسهل تقييم المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب أثناء تطوير المسالك البولية الجنينية الماوس. ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي.

Video: Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

حقن المثانة الماوس الجدار

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Medicine

The Application of 1% Methylene Blue Dye As a Single Technique in Breast Cancer Sentinel Node Biopsy

In this study, we injected 1% methylene blue dye (MBD) into the subareolar or peritumoral space of the breast. In the case of breast conserving surgery (BCS), a separate incision in the lower axilla hairline was made to find the sentinel nodes (SNs). In mastectomy, the SNs were identified through the same mastectomy incision. The SNs were described as blue nodes or nodes with lymphatic blue channels. An anatomical landmark in the axilla was used to facilitate SNs identification. The SNs metastases were evaluated by intraoperative frozen section analysis and histopathology examination as it is a gold standard. Here, we described the MBD as the lone technique in breast cancer sentinel node biopsy (SNB) which could be useful when radioisotope tracer or patent or isosulfan blue dye (PBD) cannot be provided.

In Indonesia, sentinel node biopsy (SNB) is not routinely performed for breast cancer surgery because of the limitation to provide radioisotope tracer and isosulfan or patent blue dye (PBD). To overcome this obstacle, we applied 1% methylene blue dye (MBD) as a single agent to map the sentinel nodes (SNs).

تطبيق 1٪ الميثيلين الأزرق صبغ كتقنية واحدة في سرطان الثدي العينة الحارس خزعة

In this study, we injected 1% methylene blue dye (MBD) into the subareolar or peritumoral space of the breast. In the case of breast conserving surgery ...

Cancer Research

Evaluation of Biomaterials for Bladder Augmentation using Cystometric Analyses in Various Rodent Models

Renal function and continence of urine are critically dependent on the proper function of the urinary bladder, which stores urine at low pressure and expels it with a precisely orchestrated contraction. A number of congenital and acquired urological anomalies including posterior urethral valves, benign prostatic hyperplasia, and neurogenic bladder secondary to spina bifida/spinal cord injury can result in pathologic tissue remodeling leading to impaired compliance and reduced capacity1. Functional or anatomical obstruction of the urinary tract is frequently associated with these conditions, and can lead to urinary incontinence and kidney damage from increased storage and voiding pressures2. Surgical implantation of gastrointestinal segments to expand organ capacity and reduce intravesical pressures represents the primary surgical treatment option for these disorders when medical management fails3. However, this approach is hampered by the limitation of available donor tissue, and is associated with significant complications including chronic urinary tract infection, metabolic perturbation, urinary stone formation, and secondary malignancy4,5.
Current research in bladder tissue engineering is heavily focused on identifying biomaterial configurations which can support regeneration of tissues at defect sites. Conventional 3-D scaffolds derived from natural and synthetic polymers such as small intestinal submucosa and poly-glycolic acid have shown some short-term success in supporting urothelial and smooth muscle regeneration as well as facilitating increased organ storage capacity in both animal models and in the clinic6,7. However, deficiencies in scaffold mechanical integrity and biocompatibility often result in deleterious fibrosis8, graft contracture9, and calcification10, thus increasing the risk of implant failure and need for secondary surgical procedures. In addition, restoration of normal voiding characteristics utilizing standard biomaterial constructs for augmentation cystoplasty has yet to be achieved, and therefore research and development of novel matrices which can fulfill this role is needed.
In order to successfully develop and evaluate optimal biomaterials for clinical bladder augmentation, efficacy research must first be performed in standardized animal models using detailed surgical methods and functional outcome assessments. We have previously reported the use of a bladder augmentation model in mice to determine the potential of silk fibroin-based scaffolds to mediate tissue regeneration and functional voiding characteristics.11,12 Cystometric analyses of this model have shown that variations in structural and mechanical implant properties can influence the resulting urodynamic features of the tissue engineered bladders11,12. Positive correlations between the degree of matrix-mediated tissue regeneration determined histologically and functional compliance and capacity evaluated by cystometry were demonstrated in this model11,12. These results therefore suggest that functional evaluations of biomaterial configurations in rodent bladder augmentation systems may be a useful format for assessing scaffold properties and establishing in vivo feasibility prior to large animal studies and clinical deployment. In the current study, we will present various surgical stages of bladder augmentation in both mice and rats using silk scaffolds and demonstrate techniques for awake and anesthetized cystometry.

Surgical stages of bladder augmentation are described using 3-D scaffolds in murine and rat models. To test the efficacy of biomaterial configurations for use in bladder augmentation, techniques for both awake and anesthetized cystometry are presented.

تقييم المواد الحيوية لتكبير المثانة باستخدام تحليلات Cystometric في نماذج القوارض مختلفة

Renal function and continence of urine are critically dependent on the proper function of the urinary bladder, which stores urine at low pressure and ...

Bioengineering

Photoacoustic Cystography

Conventional pediatric cystography, which is based on diagnostic X-ray using a radio-opaque dye, suffers from the use of harmful ionizing radiation. The risk of bladder cancers in children due to radiation exposure is more significant than many other cancers. Here we demonstrate the feasibility of nonionizing and noninvasive photoacoustic (PA) imaging of urinary bladders, referred to as photoacoustic cystography (PAC), using near-infrared (NIR) optical absorbents (i.e. methylene blue, plasmonic gold nanostructures, or single walled carbon nanotubes) as an optical-turbid tracer. We have successfully imaged a rat bladder filled with the optical absorbing agents using a dark-field confocal PAC system. After transurethral injection of the contrast agents, the rat's bladders were photoacoustically visualized by achieving significant PA signal enhancement. The accumulation was validated by spectroscopic PA imaging. Further, by using only a laser pulse energy of less than 1 mJ/cm2 (1/20 of the safety limit), our current imaging system could map the methylene-blue-filled-rat-bladder at the depth of beyond 1 cm in biological tissues in vivo. Both in vivo and ex vivo PA imaging results validate that the contrast agents were naturally excreted via urination. Thus, there is no concern regarding long-term toxic agent accumulation, which will facilitate clinical translation.

Photoacoustic cystography (PAC) has a great potential to map urinary bladders, a radiation sensitive internal organ in pediatric patients, without using any ionizing radiation or toxic contrast agent. Here we demonstrate the use of PAC for mapping urinary bladders with an injection of optical-opaque tracers in rats in vivo.

تصوير المثانة الضوئي

Conventional pediatric cystography, which is based on diagnostic X-ray using a radio-opaque dye, suffers from the use of harmful ionizing radiation. The ...

Intraoperative Detection of Subtle Endometriosis: A Novel Paradigm for Detection and Treatment of Pelvic Pain Associated with the Loss of Peritoneal Integrity

Endometriosis is a common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this study was to demonstrate the use of a blue dye (methylene blue) to stain peritoneal surfaces during laparoscopy (L/S) to detect the loss of peritoneal integrity in patients with pelvic pain and suspected endometriosis. Forty women with CPP and 5 women without pain were evaluated in this pilot study. During L/S, concentrated dye was sprayed onto peritoneal surfaces, then aspirated and rinsed with Lactated Ringers solution. Areas of localized dye uptake were evaluated for the presence of visible endometriotic lesions. Areas of intense peritoneal staining were resected and some fixed in 2.5% buffered gluteraldehyde and examined by scanning (SEM) electron microscopy. Blue dye uptake was more common in women with endometriosis and chronic pelvic pain than controls (85% vs. 40%). Resection of the blue stained areas revealed endometriosis by SEM and loss of peritoneal cell-cell contact compared to normal, non-staining peritoneum. Affected peritoneum was associated with visible endometriotic implants in most but not all patients. Subjective pain relief was reported in 80% of subjects. Based on scanning electron microscopy, we conclude that endometrial cells extend well beyond visible implants of endometriosis and appear to disrupt the underlying mesothelium. Subtle lesions of endometriosis could therefore cause pelvic pain by disruption of peritoneal integrity, allowing menstrual or ovulatory blood and associated pain factors access to underlying sensory nerves. Complete resection of affected peritoneum may provide a better long-term treatment for endometriosis and CPP. This simple technique appears to improve detection of subtle or near invisible endometriosis in women with CPP and minimal visual findings at L/S and may serve to elevate diagnostic accuracy for endometriosis at laparoscopy.

Loss of peritoneal integrity provides a new paradigm to understand and treat chronic pelvic pain in women with mild forms of endometriosis and can be easily detected using intraoperative instillation of dye at the time of laparoscopy.

جراحة داخلية الكشف عن بطانة الرحم خفية: نموذج رواية لاكتشاف وعلاج آلام الحوض المصاحبة لفقدان النزاهة البريتوني

Endometriosis is a  common disease affecting 40 to 70% of reproductive-aged women with chronic  pelvic pain (CPP) and/or infertility. The purpose of this ...

Probe-based Confocal Laser Endomicroscopy of the Urinary Tract: The Technique

Probe-based confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces during standard endoscopy. With applications currently in the respiratory1 and gastrointestinal tracts,2-6 CLE has also been explored in the urinary tract for bladder cancer diagnosis.7-10 Cellular morphology and tissue microarchitecture can be resolved with micron scale resolution in real time, in addition to dynamic imaging of the normal and pathological vasculature.7
The probe-based CLE system (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, France) consists of a reusable fiberoptic imaging probe coupled to a 488 nm laser scanning unit. The imaging probe is inserted in the working channels of standard flexible and rigid endoscopes. An endoscope-based CLE system (Optiscan, Australia), in which the confocal endomicroscopy functionality is integrated onto the endoscope, is also used in the gastrointestinal tract. Given the larger scope diameter, however, application in the urinary tract is currently limited to ex vivo use.11 Confocal image acquisition is done through direct contact of the imaging probe with the target tissue and recorded as video sequences. As in the gastrointestinal tract, endomicroscopy of the urinary tract requires an exogenenous contrast agent&mdash;most commonly fluorescein, which can be administered intravenously or intravesically. Intravesical administration is a well-established method to introduce pharmacological agents locally with minimal systemic toxicity that is unique to the urinary tract. Fluorescein rapidly stains the extracellular matrix and has an established safety profile.12 Imaging probes of various diameters enable compatibility with different caliber endoscopes. To date, 1.4 and 2.6 mm probes have been evaluated with flexible and rigid cystoscopy.10 Recent availability of a &lt; 1 mm imaging probe13 opens up the possibility of CLE in the upper urinary tract during ureteroscopy. Fluorescence cystoscopy (i.e. photodynamic diagnosis) and narrow band imaging are additional endoscope-based optical imaging modalities14 that can be combined with CLE to achieve multimodal imaging of the urinary tract. In the future, CLE may be coupled with molecular contrast agents such as fluorescently labeled peptides15 and antibodies for endoscopic imaging of disease processes with molecular specificity.

Probe-based confocal laser endomicroscopy enables real-time microscopy of the human urinary tract during cystoscopy, providing dynamic, intravital imaging of pathological states such as bladder cancer with cellular resolution. Endomicroscopy may augment the diagnostic accuracy of standard white light endoscopy and provide intraoperative image guidance to improve surgical resection.

التحقيق المستندة إلى Endomicroscopy الليزر متحد البؤر في المسالك البولية: تقنية

Probe-based  confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology  that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces ...

Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into the urinary bladder to either induce animal models of bladder pathologies or evaluate the effectiveness of intravesical treatments. Most rodent models of lower urinary tract (LUT) pathologies are induced in female mice due to ease of intravesical instillation of the substances via the female urethra. However, due to anatomical differences between the female and male LUT, transurethral instillation in a male mouse has been deemed a very challenging procedure, and it has not been previously described. In this manuscript, we provide a detailed description of how to prepare polyethylene (PE) tubing for subsequent insertion into the urethra of a male mouse. In addition, we discuss the ideal types of PE tubing to be used depending on the desired site of inoculation. Furthermore, we describe point by point how to prepare an animal for a successful transurethral instillation to avoid injury to the urethra and ensure the delivery of the solution to the desired location. The procedure is started by retracting the prepuce and the glans to expose the opening of the urethral meatus. Next, the glans are grasped by blunt non-crushing forceps to stabilize the penis and the PE tubing. The PE tubing is first inserted into the urethral meatus parallel to the animal body, then its angle is adjusted by tilting the catheter to maneuver it to follow the natural curvature of the urethra. This technique can be used to induced murine models of bladder pathologies and/or evaluate the effectiveness of intravesical treatments in male mice.

Transurethral instillation is a challenging procedure and has not been well described in the literature. The aim of this manuscript is to describe a technique for transurethral insertion of a catheter for intravesical delivery of liquids with active substances into the urinary bladder and/or prostate in adult male mice.

تقطير ترانسوريثرال الداخلي في الماوس الذكور البالغين

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

Immunology and Infection

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

التصوير بالموجات فوق الصوتية للمسالك البولية الذكور الكبار للاختبار الوظيفي البولي

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes

Applying novel microscopy methods to suitable animal disease models to explore the dynamic physiology of the kidney remains a challenge. Rats with surface glomeruli provide a unique opportunity to investigate physiological and pathophysiological processes using intravital 2-photon microscopy. Quantification of glomerular capillary blood flow and vasoconstriction and dilatation in response to drugs, permeability, and inflammation are just some of the processes that can be studied. In addition, transgenic rats, i.e., podocytes labeled with fluorescent dyes and other molecular biomarker approaches, provide increased resolution to directly monitor and quantify protein-protein interactions and the effects of specific molecular alterations.
In mice, which lack surface glomeruli after four weeks of age, unilateral ureteral obstruction (UUO) for several weeks has been used to induce surface glomeruli. As this induction model does not allow for baseline studies, we quantified the effects of UUO on glomerular processes in the UUO model in Munich Wistar Fr&#246;mter (MWF) rats, which have surface glomeruli under physiologic conditions. The UUO model for five weeks or more induced significant alterations to gross renal morphology, the peritubular and glomerular microvasculature, as well as the structure and function of tubular epithelia. Glomerular and peritubular red blood cell (RBC) flow decreased significantly (p &#60; 0.01), probably due to the significant increase in the adherence of white blood cells (WBCs) within glomerular and peritubular capillaries. The glomerular sieving coefficient of albumin increased from 0.015 &#177; 0.002 in untreated MWFs to 0.045 &#177; 0.05 in 5-week-old UUO MWF rats. Twelve weeks of UUO resulted in further increases in surface glomerular density and glomerular sieving coefficient (GSC) for albumin. Fluorescent albumin filtered across the glomeruli was not reabsorbed by the proximal tubules. These data suggest that using UUO to induce surface glomeruli limits the ability to study and interpret normal glomerular processes and disease alterations.

Here, we present a protocol using 2-photon microscopy in Munich Wistar Fromter rats with surface glomeruli to quantifythe effects of prolonged ureteral obstruction on glomerular dynamics and function.

استخدام الفحص المجهري 2-فوتون لتحديد آثار انسداد الحالب المزمن من جانب واحد على العمليات الكبيبية

Applying novel microscopy methods to suitable animal disease models to explore the dynamic physiology of the kidney remains a challenge. Rats with surface ...

An Immature Murine Model of Reversible Unilateral Ureteral Obstruction

Unilateral ureteral obstruction (UUO) is a common cause of chronic kidney disease (CKD), leading to the progression of renal interstitial fibrosis and ultimately resulting in irreversible kidney damage. The alleviation of UUO is crucial. Several animal models of reversible unilateral ureteral obstruction (RUUO) have been established in the literature, enabling the observation of structural changes and functional damage while also simulating physiological and pathophysiological changes following the relief of ureteral obstruction. In this study, a reversible obstruction model was established in the unilateral murine ureter using a silicone tube. Significant renal damage was observed prior to obstruction relief, with partial recovery noted afterward. Unlike UUO, this model prevents progressive hydronephrosis, leading to distinct pathological outcomes. This simple surgical procedure demonstrates a high success rate and holds promise as a classical model for investigating reversible obstructive nephropathy and potential treatments for renal interstitial fibrosis. Furthermore, it provides a practical platform for studying the mechanisms of recovery from obstructive nephropathy, renal cell regeneration, and tissue remodeling.

The present protocol describes a step-by-step, reproducible model of unilateral ureteral obstruction.

نموذج الفئران غير الناضج لانسداد الحالب أحادي الجانب القابل للانعكاس

Unilateral ureteral obstruction (UUO) is a common cause of chronic kidney disease (CKD), leading to the progression of renal interstitial fibrosis and ...