Name: construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility
Uploaded: 2014-11-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر مكتب البحوث من مدرسة المشيخية كلية الصيدلة للحصول على الدعم المالي لهذا المشروع خلال حفل توزيع جوائز الصيدلة الصغيرة للبحوث والتعاون (SPARC) جائزة. الكتاب أشكر السيد جون Smink، مدير مختبر أبحاث الحيوانات المائية، جامعة كليمسون، كليمسون، SC لبلده الفني مراجعة مخطوطة المساعدة.

ملاحظة: هذه البروتوكولات اتباع المبادئ التوجيهية للIACUC من المشيخية كلية. 1. المواد اكتساب المدرج في الجدول 1. 2. تجميع 5 الجرف كروم وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. وسوف تستخدم هذه لإيواء مرفق. 3. بناء خزان للمياه ونظام الترشيح (أرقام 1A و 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الشكل 1A كدليل، تخطيط ال 18 غالون دلو، ومضخة والفلاتر ومصباح الأشعة فوق البنفسجية لتحديد موقع التثبيت النهائي والحجم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وضعت أجزاء من وقياس وقطع ¾ &quot;الأنابيب البلاستيكية لطول اللازمة للتجميع. تختلف أطوال جميع الأنابيب وفقا لاحتياجات مساحة محددة والقيود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع الأنابيب والتجهيزات على النحو المنصوص عليه في السابق باستخدام التمهيدي والاسمنت PVC، انظر أدناه (3.3.2 و3.3.3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرمال قطع حواف الأنابيب مع الصنفرة حتى أنهم سلس إلى لمسةد لا يوجد الحطام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رئيس وخارج الأنابيب وداخل المناسب مع التمهيدي PVC شراؤها مع مسحة المضمنة من التمهيدي PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدعيم الأنابيب وتركيب معا من خلال تطبيق الأسمنت PVC إلى خارج الأنبوب باستخدام مسحة المدرجة. أكرر لجميع الخطوات التي تحتاج إلى التدعيم PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع دلو 18 غالون إلى جانب واحد من البناء الرف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تثبيت موصل الحاجز في جانب خزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق ¾ &quot;أنابيب PVC إلى الحاجز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق الطرف الآخر من ¾ &quot;الأنابيب إلى مدخل المضخة باستخدام ¾&quot; الخيوط جعل المناسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط مرشحات إلى المضخة باستخدام اثنين من 90 درجة المرفقين و¾ &quot;الأنابيب PVC. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مرشح واحد ورقة تليها واحدة تنشيط مرشحات الكربون من أجل تصفية الحطام وخفض مستويات الكلور والمواد الكيميائية في الماء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قم بتوصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية إلى accordi المرشحاتنانوغرام لتعليمات الشركة الصانعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق مضخة ونظام التصفية إلى الجانب العلوي من الرف الأول من رف باستخدام العلاقات السلك. تختلف ترتيب التجمع والمرفق وفقا لحجم وتخطيط الرف / الرف الذي تم اختياره. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 bioball لكل جالون من الماء إلى خزان المياه مرة واحدة يتم تجميع المضخة ونظام التصفية وتعلق على الرف. </li></ol> 4. بناء الخط الرئيسي العرض (أرقام 1B و 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس وقطع قطعة من ¾ &quot;الأنابيب البلاستيكية لتوصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية إلى العرض الرئيسي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ¾ &quot;نقطة الإنطلاق PVC لبدء خط الإمداد الرئيسي من خلال ربط نقطة الإنطلاق إلى ¾&quot; العادم PVC القادمة من فلتر الأشعة فوق البنفسجية. . <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة صمام على الخروج إلى أسفل نقطة الإنطلاق PVC لتكون بمثابة استنزاف لاحمرار صيانة النظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تشغيل خط الإمداد الرئيسي من الجزء العلوي من ¾ &quot;نقطة الإنطلاق PVC عن طريق قياس وقطع ¾&quot; PVCالأنابيب إلى الطول المطلوب لتوفير أنابيب تغذية لكل من الرفوف على الرف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تثبيت ¾ &quot;المحملات PVC للخطوط الأفقية التي ستدخل كل رف من رفوف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياريا (والمقترح)، إضافة ¾ &quot;على الخروج صمام لكل الرف خط إمداد للسماح لعزل كل رف وتصميم وحدات من هذا النظام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ¾ &quot;أنابيب PVC كورقة ضغط الحد من خط على الرف العلوي. في حالة تشغيل هذا الخط في الجزء الخلفي من الرف، واستخدام هذا الجرف للتخزين. إنهاء تخفيض الضغط سطر في خط العادم الرئيسي (الشكل 1B) مع ¾ &quot;صمام على الخروج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد تم الانتهاء من الخطوات المذكورة أعلاه، رئيس وتدعيم الأنابيب البلاستيكية معا كما فعلت سابقا عند بناء نظام خزان والترشيح. </li></ol> 5. بناء الخط الرئيسي العادم (أرقام 1C و 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل طول العمودي للخط العادم الرئيسي إلى الجانب الآخر من و رفROM خط الإمداد الرئيسي. استخدام أنابيب 2 &quot;PVC لهذا الخط الرأسي لاستقبال خط الإمداد الرئيسي في أعلى واستنزاف خطوط من الدبابات الأسماك من كل رف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قطعة من 2 &quot;الأنابيب البلاستيكية لالرأسي خط العادم الرئيسي واستخدام 2&quot; المحملات PVC لاستقبال حوض للأسماك خطوط هجرة من كل الرف. إنهاء خط العادم الرئيسي في خزان الأسهم لطرد المياه المعاد تدويرها أكثر من فلتر الاسفنج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع بوصة واحدة فتح كامل طول 2 &quot;PVC القطع الأنابيب ونعلق على رأسي خط العادم الرئيسي مع PVC المحملات لخطوط الصرف الأفقية من الدبابات الأسماك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتويج 2 &quot;خطوط هجرة أفقية مع 2&quot; غطاء PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رئيس وتدعيم القطع باستخدام التجهيزات الضرورية (وصلات، الحلمات أو المرفقين). </li></ol> 6. بناء خزانات الأسماك (الشكل 3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع الحفر، وقطع 1 1/8 &quot;ثقب في الجزء الخلفي من حوض للأسماك 1&quot; تحت الحافة العليا مع رأى حفرة. </li><lط&gt; حرك ¾ &quot;محول PVC الذكور الخيوط (مع # 18 يا خاتم المرفقة) من خلال ثقب (من داخل الخزان إلى الخارج). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق وتشديد 90 درجة 3/4 &quot;الخيوط PVC الكوع إلى محول الذكور لإنشاء أنبوب العادم حوض للأسماك. إضافة قطعة من شبكة غرامة قبل الشد الجوز عقد لمنع الزرد يمر نظام العادم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع خزان الأسماك مع نهاية أنبوب العادم في فضاء مفتوح من خط تصريف وراء الدبابات </li></ol> 7. بدء نظام المياه <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في عدة حاويات، مثل تلك المستخدمة للخزان، وقياس ثلاثة أضعاف كمية المياه الواردة في هذا النظام. اسمحوا الوقوف هذا الماء في درجة حرارة الغرفة لتكييف لمدة 48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الماء إلى النظام والسماح لها تعمم مدة لا تقل عن 3 أيام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير الماء في النظام بقوة طوال 3 أيام الأولى من الدورة الدموية من أجل تخليص النظام من الملوثات ثار يقيمون داخل الأنابيب. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الزرد المبتدئين والسماح للدورة النيتروجين إلى الحصول على المنشأة. تطبيع الرقم الهيدروجيني إلى ثابت 7. حافظ على سبعة الزرد في 1.8 L، وإطعامهم مرتين يوميا خلال أيام الأسبوع، ومرة واحدة يوميا خلال عطلة نهاية الأسبوع على النحو الذي اقترحه ينبو 4 و 6 مكناب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة نترات (&lt;75 ملغ / L) تم الحفاظ عليها، النتريت (&lt;10 ملغ / لتر)، والأمونيوم (0 ملغم / لتر) يوميا خلال الأسبوع الأول بعد إضافة الأسماك، ومستويات مرتين أسبوعيا مرة واحدة المطلوب مع التغييرات المياه العادية . </li></ol>

<ol>
	<li>Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , (2010).</li><li>Grim, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogen+(hemgn),+a+transcription+factor+that+regulates+erythropoiesis+and+skeletogenesis+in+zebrafish.">Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish.</a> , (2013).</li><li>Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+easy-to-assemble,+low-cost+facility.">Modular, easy-to-assemble, low-cost facility.</a> Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).</li><li>Linbo, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+(Danio+rerio)+husbandry+and+colony+maintenance+at+the+Northwest+Fisheries+Science+Center.">Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center.</a> U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. 69, 4196 (2012).</li><li>McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Don't+be+afraid+to+set+up+your+fish+facility.">Don't be afraid to set up your fish facility.</a> Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).</li><li>Garcia, R. L., Sanders, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+cleaning+and+disinfection+procedures+in+a+zebrafish+rerio)+facility.">Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).</li><li>Rivas-Boyero, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+a+nociceptin+receptor+from+zebrafish+(Danio+rerio).">Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio).</a> J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).</li><li>Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+regulates+dopaminergic+neuron+differentiation+via+miR-133b.">Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b.</a> Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).</li><li>Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodr&#237;guez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mu+opioid+from+the+zebrafish+exhibits+functional+characteristics+as+those+of+mammalian+mu+opioid+receptor.">Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor.</a> Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).</li></ol>

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح لهذه الورقة.

والغرض الرئيسي من هذه المقالة هو لإثبات أن بناء منشأة الزرد وظيفية ليست معقدة ويمكن أن يبنى من قبل الباحثين المبتدئين الأسماك مع الحد الأدنى من المعرفة البناء. وعلاوة على ذلك، تعرض هذه المقالة أن المواد اللازمة لهذا المرفق الزرد وظيفية يمكن الحصول عليها بسهولة وكلفة معقولة من متاجر الحيوانات الاليفة العرض المحلية أو المتاجر. مرة واحدة وقد تم الحصول على جميع المواد والأدوات بناء النظام والدبابات الأسماك يستغرق حوالي يوم عمل واحد. الجولة الأولى لل72 ساعة يسمح لأي فشل في النظام، مثل تسرب أو انخفاض ضغط المياه، يتم تحديدها. يسمح هذا المدى الأول أيضا للملوثات داخل النظام ليتم إزالتها من التداول. على سبيل المثال، قد يحتوي على الغراء PVC المواد العضوية الخطرة التي سيتم إزالتها خلال أول عدة ساعات من التداول. النظام لديه صمام استنزاف الرئيسي الذي يسمح ويسهل تعديل حجم والماء بديلا عن العدسات اللاص<html> تعصب. بالإضافة إلى ذلك، فإن النظام لديه خط المخلص الضغط الذي يسهل أيضا تعديل ضغط المياه. هذا الخط هو مفيد عندما سيتم استخدام واحد فقط أو اثنين من مقصورات (رفوف) لأنه يسمح للتنظيم ضغط المياه. هذا المرفق هو نمطي في تصميم السماح لاستخدام 1 أو 2 أو 3 حجرات (36 الدبابات الأسماك من 1.8 L) لتلبية احتياجات قدرات الباحثين الأفراد. الصمامات على الخروج وضعت في كل حجرة تسهيل عزل أجزاء مختلفة من النظام. هذا النظام صمام مفيد أيضا لتجنب نشر العدوى المحتملة، وتسهيل تنظيف النظام من خلال المقصورات. وبالإضافة إلى ذلك، كل الأسماك إمدادات المياه دبابات واثنين من الصمامات، واحدة في الري 9 ميناء واحد في أنابيب مرنة عند مدخل حوض للأسماك. هذا النظام صمام مزدوج يسمح ضبط ضغط المياه، وكذلك تسهيل إجراءات التنظيف أو استخراج الأسماك أو التلاعب. ر &quot;&gt; وثائق صحيحة من الأمونيا والنتريت والنترات ضروري لوظيفة المناسبة للمرفق. ولهذا، فإن bioballs مهمة لأنها توفر سطح كافية لالبكتريا الآزوتية النمو. وبمجرد أن مستعمرة الأسماك مستقرة، يمكن للمنشأة يمكن تعديلها بسهولة لاستخدام الدبابات الأسماك أكبر أو أصغر، كما أن منشأة يمكن تعديلها لتربية الزرد التالية البروتوكولات المتاحة في أدبيات 5. وعلاوة على ذلك، ومرفق يمكن تعديلها لإضافة وحدات أو رفوف أخرى لتوسيع قدرات النظام . تدفق المياه العذبة في خزان توفر ما يكفي من الاوكسجين النقي بحيث ليست هناك حاجة لإضافة مكساج إضافية. تبادل الهواء الذي يحدث في خزان المياه هو مصدر كاف من الأكسجين. إذا تم استخدام خزانات أكبر ثم يمكن إضافة مصدر الأكسجين الإضافي. كما تجدر الإشارة إلى أنه بدون تدفق المياه العذبة في خزان الأسماك سوف يختنق، لذلك فمن الأهمية بمكان أن تدفق المياه بالبريد رصده عن كثب لضمان أي شيء يتم حظر خطوط المياه. ومن الضروري أن درجة حرارة الماء الإبقاء على 28.5 درجة مئوية. ويمكن تحقيق درجة حرارة ثابتة من خلال الحفاظ على درجة حرارة الغرفة التي يقع النظام في 28.5 درجة مئوية. بدلا من ذلك، مصدر حرارة الحوض يمكن شراؤها من أجل الحفاظ على درجة حرارة ثابتة. الحفاظ على نوعية المياه لا بد من النتائج التجريبية متسقة. هناك العديد من المصادر المتاحة للمساعدة في تحديد المعلمات بالضبط نوعية المياه على أساس الظروف التجريبية. يتم تنظيف خزانات الأسماك كل 7 - 10 أيام وبعد ذلك رش مع 70٪ كحول قبل إعادة استخدامها. واقترح أيضا أن الرف الكروم تنظيفها وتجفيفها في هذه المرحلة لمنع الصدأ وبناء. إذا لاحظت علامات التلوث، وتطهير خزانات فردية مع محلول التبييض 2٪ 8. يتم مراقبة الصحة العامة مع إيلاء اهتمام خاص لعلامات العدوى (تورم، وتقرحات الجلد، exolpthalmia، قبالة اللون، الخ.)، مرض فقاعة غاز (بسبب تركيز فوق إشباع الغاز، والتغيرات السريعة في درجات حرارة المياه، ومشاكل في نظام السباكة)، وتضخم الخيشومية (مستويات عالية من الأمونيا والنحاس والزنك أو فتاة الكورس نشط في الماء) ، الجنف (بسبب نقص فيتامين C) أو البيض المرتبطة التهاب وfibroplasias (بسبب احتباس الإناث البيض الذي يدفع خارج جدار البطن). بناء هذا المرفق هو مرن ويسمح لنظام أصغر أو الموسعة. من خلال اتخاذ الأفكار البناء الأساسية، ويمكن ترتيب هذه التسهيلات لتناسب الاحتياجات البحثية الأساسية من مختلف الأحجام. لأن البناء قد تختلف من مؤسسة، الخطوة الأكثر أهمية في البروتوكول هي الجولة الأولى 72 ساعة، والرصد اليومي لالأمونيوم والنترات والنتريت ومستويات خلال الأسبوع الأول من البناء. نوعية المياه ممتازة سوف تساعد في الحفاظ على صحة الأسماك. العديد من البروتوكولات الحالية المتاحة للحصول على التنفسي الأسماك بأسعار معقولةم يحتاج الى الهواء الطلق تدفق المياه 3. وجود المياه محمية من الهواء الطلق يقلل من فرصة للتلوث المياه والتبخر. الصيانة على نظام مغلق هو الحد الأدنى بالمقارنة مع أنظمة الهواء الطلق المشتركة. إذا تنشأ مشاكل في بناء منشأة (التسريبات، انخفاض ضغط المياه، الخ.) واحد يمكن أن تحل محل أنبوب مدعومين ببساطة قطع بعيدا مجال الاهتمام في المرفق واستبدال الأجزاء في نفس تدريجي الطريقة كما المذكورة أعلاه . قد يكون هذا النظام عرضة لفقدان المياه كبيرة بسبب التسربات الصغيرة التي قد تصبح خطرا على الأسماك إذا ما تركت دون أن يلاحظها أحد. الحد الأدنى للاستثمار تعويم جهاز للإيقاف سيتم الكشف عن عندما انخفض مستوى الماء دون عتبة آمنة وإيقاف تشغيل النظام. قد يكون هذا ضروريا إذا الرصد الدقيق لنظام غير متوفر. مع التعديلات الصحيحة، وهناك عدد قليل جدا من القيود التي يواجهها هذا النظام إلى جانب عدم وجود حراك. مرة واحدة وهذا النظام هو بناءإد أنه من الصعب جدا على التحرك بدون تقطيع بعض أجزاء وrecementing لهم في الموقع الجديد. هذا القيد التنقل يعني أن النظام سوف تحتاج من الناحية المثالية أن تستمر في مساحة عمل واحدة. إذا كان المطلوب التنقل هناك تعديلات صغيرة قد تكون المبذولة لزيادة المرونة. إضافة النقابة في بداية كل العرض الجانبي، خط تخفيف الضغط، وتصريف المضخة، وفوق صمام استنزاف. خطوط هجرة يمكن تركيبها الجافة بدلا من تثبيته في المكان. وإضافة اقتران مرنة لقسم مضخة مساعدة أيضا في التنقل. وهذا هو مبلغ إضافي بناء بسيط وصيانة هذا النظام يعني أن البروتوكولات الحالية وجدت في الأدب متاحة لمؤسسات البحوث صغيرة 1،2،10-12. صيانة بسيطة مما يجعل هذا النظام المثالي للبحث الطالب الجامعي. هذا النظام هو ممتاز للبحث والتدريس مختبرات مستقلة، أيضا. في الختام، هذا النوع منالمرفق هو بأسعار معقولة، وسهلة لبناء وظيفية لفي الجسم الحي التجريب. هذا المرفق هو المثالي للمؤسسات ذات الموارد المحدودة ومحدود المساحة تربية الحيوانات. البحث الزرد هو المنطقة التي يتم استخدامها لأنواع متعددة من الدراسات، بما في ذلك الأدوية، علم وظائف الأعضاء، والتنمية، أو حتى الدراسات الجينية. في الواقع، وعدد كبير من متحولة متوفرة أو الزرد المعدلة وراثيا يدعم خطوط مبتكرة للبحث في تقريبا جميع مجالات الطب الحيوي. وبالإضافة إلى ذلك، فإن هذا النظام يمكن استخدامها لتعزيز فرص البحوث والتجارب الفصول الدراسية للتخصصات العلمية في المؤسسات الجامعية في الغالب الصغيرة وإلهام الجيل القادم من العلماء الطبية الحيوية.

في الجسم الحي نماذج ضرورية في إجراء البحوث الطبية الحيوية شامل لأنها تسمح للفي مجال البحوث المختبر إلى أن تترجم على مستوى النظام والعضوي. على سبيل المثال، قد أثبتت الأبحاث مع الثدييات الصغيرة، وهما القوارض، الضروري في تطوير عقاقير وتحسين العقاقير المتاحة. ومع ذلك، فإن التعقيد (ماليا ولوجستيا) قد يجعل من المستحيل تقريبا لبناء وصيانة مرافق القوارض ليقترح التجريب في المؤسسات البحثية الصغيرة الأكاديمية. ومع ذلك، في الجسم الحي البحوث يمكن أن يؤديها باستخدام الأنواع الحيوانية الأخرى التي تتطلب اللوجستية أقل تفصيلا. الزرد (دانيو rerio) وقد استخدمت بنجاح لتكون نموذجا في الجسم الحي لدراسة علم الوراثة والتنمية والفيزيولوجيا المرضية، والصيدلة 1،2،10،11،12. التسهيلات اللازمة لإيواء الزرد لإجراء التجارب هي بسيطة نسبيا وأقل تكلفة بالمقارنة مع صمرافق odent. كيم وآخرون. 3 وقد وصفت مؤخرا بالتفصيل نظام السكن الزرد 80 دبابة التي يمكن أن يبنى على ما يقرب من 1،500 دولار، والذي يشمل كلا من قطع الغيار وتكاليف العمالة. هذا يقف في تناقض صارخ مع ما يقرب من 8500 $ التي من شأنها أن تكون هناك حاجة لشراء نظام 80 دبابة جاهزة من أي عدد من الموردين التجاريين. ومع ذلك، فإن الوصف الذي قدمه كيم وآخرون. قد تكون معقدة وصعبة لمتابعة بالنسبة للمستخدمين المبتدئين للبحوث الأسماك. ونحن نعتقد أن منشأة الزرد يمكن بناؤها بطريقة مبسطة للاستثمار من 1500 $. إنشاء منشأة في الجسم الحي في المؤسسات الأكاديمية صغيرة يوفر كلياتهم أداة إضافية التي لإنتاج الأبحاث أكثر قوة وشامل. في المختبر البيانات التي تدعمها في الجسم الحي النتائج إنتاج عام البحوث الطبية الحيوية أكثر شمولا من البيانات التي تم الحصول عليها باستخدام فقط في النهج المختبر. ولذلك، فإنسوف تنفيذ منشأة الأبحاث في الجسم الحي يعزز إلى حد كبير نجاح مؤسسة في المساعي البحثية الشاملة (التعرض الطالب الأبحاث والمنشورات، والاتصالات، والسعي من التمويل الخارجي، الخ.). بناء منشأة الزرد مثل واحد الموصوفة في هذه الدراسة هو المثالي للمؤسسات الأكاديمية البحثية مع مرافق محدودة (أو المؤسسات في الجسم الحي دون مرافق البحوث) خلال تشنجا الأوقات المالية.

<table><tbody><tr><td>Item</td><td>Brand</td><td>Quantity</td><td></td></tr><tr><td>74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit</td><td>Style Selections</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>18-Gallon General Bucket/Tote</td><td>Centrex Plastics: LLC&amp;nbsp;Rugged Tote</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord</td><td>Master Electrician</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp</td><td>Smartpond&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Whole House Water Replacement Filter</td><td>Whirlpool</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing</td><td>Whirlpool</td><td>2</td><td></td></tr><tr><td>Thread Seal Tape</td><td>William H Harvey</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>8-fl oz LO-VOC PVC Cement</td><td>Oatey&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>8-fl oz LO-VOC Primer</td><td>Oatey&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing</td><td>Mister Landscaper&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve</td><td>Mister Landscaper</td><td>33</td><td></td></tr><tr><td>9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter</td><td>&amp;nbsp;Mister Landscaper</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>Drop-In Filter with House&amp;nbsp;</td><td>Whirlpool</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia 90-Degree PVC Elbow</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia 90-Degree Tee</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow</td><td>LASCO</td><td>15</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>LASCO</td><td>7</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Tee</td><td>LASCO</td><td>12</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia PVC Cap</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>LASCO</td><td>2</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve</td><td>American Valve</td><td>5</td><td></td></tr><tr><td>1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>Lasco</td><td>8</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Cap</td><td>Lasco</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>2-In x 5-Ft Pvc Pipe</td><td>Charlotte Pipe</td><td>4</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;-In x 10-Ft Pvc pipe</td><td>Charlotte Pipe</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>11/16x1-7/80 PVC ring</td><td>SXT</td><td>10</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12;&amp;rdquo; PVC male adapter</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;&amp;rdquo; PVC coupling&amp;nbsp;</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12;&amp;rdquo; PVC female adapter&amp;nbsp;</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>link</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.8 L Dual Beta Keeper</td><td>Top Fin</td><td>27</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;&amp;rdquo; PVC male adapter (w/ #18 O-ring)</td><td>SXT</td><td>28</td><td></td></tr><tr><td>90-degree &amp;frac34;&amp;rdquo; threaded PVC elbow</td><td>SXT</td><td>27</td><td></td></tr><tr><td>Fine Mesh</td><td>N/A</td><td>1 yard</td><td></td></tr><tr><td>Bulkhead Connector</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Hacksaw</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Drill</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Hole saw</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Adjustable Wrench</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Pliers&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Tape Measure</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Safety Glasses</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Work Gloves</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr></tbody></table>

construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility

في الجسم الحي البحوث الطبية الحيوية أمرا حيويا لترجمة في نتائج المختبر إلى التطورات السريرية. المؤسسات الأكاديمية صغيرة ذات موارد محدودة تجد من المستحيل تقريبا لبناء وصيانة مرافق القوارض النموذجية للأبحاث. وقد أثبتت الأبحاث الزرد ليكون بديلا قيما لفي الجسم الحي البحوث في علم الصيدلة، علم وظائف الأعضاء، وتنمية والدراسات الوراثية. توضح هذه المقالة أن منشأة الزرد وظيفي يمكن أن يبنى بطريقة سهلة وميسرة. علينا أن نبرهن على مثل هذا المرفق يمكن أن يبنى في حوالي يوم عمل واحد مع الحد الأدنى من الأدوات والخبرات. وبلغت تكلفة حوض للأسماك الزرد 27 منشأة 1.8 L شيدت في هذه الدراسة حوالي 1500 $. ونحن نقدر أن المحافظة على عمل 150 مستعمرة الأسماك الأولية لمدة 3 أشهر هو 1،000 دولار. هذا الطلاب المعنيين في المشروع، تم تقديمها للaquaculturing من الزرد ليقترح البحث.

بناء نظام مضخة وFlters مرة واحدة يتم تجميعها الرف واقامة الخطوة الأولى هي لبناء مضخة وفلتر النظام. وترتبط عوامل التصفية لمضخة نظام وتقع فوق مستوى السفلي من الرف الأول، والذي يسمح لسهولة الصيانة واستبدال فلتر. وبالمثل، يتم توصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية مع الأنابيب البلاستيكية للتصفية والذي عقد في مكان مع العلاقات الأسلاك البلاستيكية للسماح السهل استبدال مصباح الأشعة فوق البنفسجية حسب الحاجة (الشكل 4A). مباشرة بعد المضخة يتم تثبيت مرشح ورقة، فلتر الكربون المنشط، ومصباح الأشعة فوق البنفسجية عبر الأنابيب PVC. تضاف Bioballs إلى خزان لتوفير سطح لنمو البكتيريا، والذي يحول النفايات السامة الأمونيا إلى نترات. واحد bioball لكل غالون من المياه في هذا النظام هو منطقة كافية للسماح نمو البكتيريا. غطاء الخزان البلاستيك يمكن تركيبها بحيث أنه في حالة تجاوز سوف bioballs تبقى في الخزان وفرص كونتامينايتم الحد من نشوئها. على الرغم من حدث تجاوز من غير المحتمل جدا، وهو نظام تجفيف (إضافة استنزاف الأنابيب في الجزء العلوي من الخزان) هو إضافة السهلة التي يمكن إدخالها على النظام. بناء لإمدادات الخط الرئيسي والخطوة الثانية هي لتجميع خط إمداد المياه الرئيسي الذي سوف تغذي كل مقصورة التي سوف تحتوي على الدبابات الزرد (الشكل 4B). يتم توصيل هذا الخط إلى مصباح الأشعة فوق البنفسجية مع قطعة من الأنابيب البلاستيكية. هذا الخط يمتد عموديا وأفقيا إلى رف من خلال نقطة الإنطلاق PVC. يتم استخدام نهاية الجزء السفلي من نقطة الإنطلاق لربط قطعة من الأنابيب البلاستيكية التي من شأنها أن تكون بمثابة صمام استنزاف للنظام بأكمله. الخطوط الرئيسية التي تغذي الدبابات تشغيل أفقيا إلى أربعة أقسام: الجزء العلوي من الرف الثاني، أعلى الرف الثالث، أعلى الرف الثالث، وأسفل الرف الخامس. منذ الجزء العلوي من الثانية والثالثة والرابعة خطوط الرف توفير المياه إلى خزانات الأسماك تشغيلها في midlin(ه) من الرفوف. كل من هذه الخطوط يكون الفردية على الخروج والصمامات، والذي يسمح للسيطرة المقصورات الفردية. ومرفق متعددة الري 9 الميناء إلى نهاية الخطوط الأفقية، وهذه الري توريد المياه إلى خزانات الأسماك من خلال مرونة ¼ &quot;أنابيب (الشكل 4B). كل ميناء مشعب الري لديه صمام بني في على الخروج. وبالإضافة إلى ذلك، يتم وضع صمام على الخروج في نهاية الأنبوب تعلق على كل منفذ، بالقرب من مدخل حوض للأسماك، ليسهل الوصول إليها والتحكم في تدفق المياه. سيتم إدراج الأنابيب إلى خزان من حفر حفرة في غطاء. وهذا سيساعد في الحفاظ على أنابيب إدراجها بقوة في الخزان. ويستخدم الخط الذي يمتد على الجزء العلوي من الرف الخامس باعتباره المخلص الضغط، ويتم التحكم مع صمام الفردية على الخروج. فمن المستحسن أن يكون هذا الخط تشغيل في الجزء الخلفي من الرف الخامس حتى أن هذه المنطقة يمكن أن تستخدم للتخزين. منذ ماييعمل ن الخط في خط الوسط من جانب من الرف، وانها جلبت إلى الخلف باستخدام الكوع PVC وقطعة من الأنابيب البلاستيكية، ومن ثم تشغيله طوليا (أفقي) كخط الضغط المخلص باستخدام الكوع آخر PVC وقطعة من الأنابيب البلاستيكية. خط الضغط المخلص ينتهي في خط العادم الرئيسي الذي يمتد عموديا على الجانب الآخر من الرفوف وينتهي في خزان للمياه (يتم هذا الخط العادم من 2 &quot;الأنابيب البلاستيكية، انظر أدناه). بناء العادم الخط الرئيسي والخطوة الثالثة هي لتجميع نظام العادم، والذي يمتد أفقيا إلى الرف، في الجانب حيث يتم وضع خزان المياه (الشكل 4C). هذا النظام تم إنشاؤها باستخدام 2 &quot;الأنابيب البلاستيكية ويجمع الماء الذي يأتي من خط المخلص الضغط، ومن خزان الأسماك يستنزف (انظر بناء حوض للأسماك أدناه). خط العادم الرئيسي يمتد عموديا، وربط خط الضغط المخلص على أعلى رف وتنتهي في إعادة المياهservoir. أيضا، خط العادم الرئيسي يتلقى هجرة من الدبابات الأسماك من خلال أنابيب أفقية 2 &quot;PVC التي تتصل خط العادم الرئيسي عبر المحملات PVC. هذه مواسير الصرف الأفقية لديها 1 &quot;قطع طولية لاستقبال مياه الصرف من خزانات الأسماك (انظر أدناه). هذه خطوط هجرة أفقية تعمل في الخلف وعلى الأجزاء السفلى من الرفوف ولها المنحدر البسيط الذي يسمح الماء ينضب لتشغيل إلى خط العادم الرئيسي عن طريق الجاذبية. تضاف منصات فلتر الاسفنج الى خطوط هجرة أفقية بحيث يقع حوض للأسماك مياه الصرف على الإسفنج ومرشحات من أصل الحطام. وهناك صورة لنظام تجميعها كلها في الشكل 5. بناء خزانات الأسماك ويرد حوض للأسماك تمثيلي في الشكل (6). يتم وضع نهاية للأسماك خط خزان استنزاف في خط هجرة الأفقي (انظر أعلاه القسم على خط العادم). يتم إدراج شبكة سلكية في خط التصريف في حوض للأسماك لمنعالزرد من السباحة للخروج من الخزان. هذه الدبابات معينة لها الأغطية التي تمنع الأسماك من الهروب، وكذلك تقليل فرص التلوث. إذا حدث تجاوز الأغطية دبابات سيمنع الأسماك من السقوط على الأرض. الدبابات مع الأغطية مثالية ولكن إذا تم بناء النظام الذي يحتوي على الدبابات دون أغطية ثم قد يتم حفر حفرة صغيرة بالقرب من أعلى الخزان. وهذا سوف يسمح للمياه للهروب في حين منع الأسماك من الهرب. تعمل يمكن الحفاظ على مستعمرة الزرد التي كتبها البروتوكولات المتوفرة، وأنشأ موضح في مكان آخر 3- 6. لفترة وجيزة، منشأتنا يسمح للمضخة نظام أن تعمم وحدة تخزين النظام ما يقرب من 75 مرات في الموارد البشرية، عن طريق ضبط معدل التدفق لكل الكبار (أو حوض للأسماك اليرقات) في حوالي 85 مل / دقيقة (أو 45 مل / دقيقة لحوض للأسماك اليرقات) . ويحتفظ نوعية المياه عن طريق الترشيح البيولوجي النشط والتغييرات المياه على نطاق صغير (~ 5٪ من حجم النظام) حسب الحاجة. الرصد اليوميمن درجة الحموضة، والموصلية، الأوكسجين المذاب (DO) المستويات، ودرجة الحرارة ضرورية للحفاظ على شروط متسقة. المجموعات هي تجاريا المتاحة لقياس درجة الحموضة والقيام المستويات. الموصلية متر متاحة للشراء أيضا. من أجل اختبار هذه المتغيرات يوميا، وإزالة 250 مل من الماء من الخزان وإجراء التحليل. ينبغي الحفاظ على مستوى الرقم الهيدروجيني في 7.2، يجب أن يكون DO أقل من 6 ملغ، والتوصيل بين 500 ميكرو ثانية و 1،300 ميكرو ثانية. (SOURCE HERE) يجب الحفاظ على درجة الحرارة في 28.5 درجة مئوية. صيانة النظام العادي (3-4 أسابيع) تتضمن تغيير تقريبي 30٪ من المياه وتنظيف واستبدال منصات تصفية والفحم. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig1highres.jpg" width="700" /> الشكل 1: ثلاثة مكونات رئيسية مرفق الزرد. A. وتقع نظام مضخة والمرشحات في الجزء السفلي من الرف (أولاالجرف) وربط خزان مخزون المياه مع خط إمداد رئيسي. B. خط العرض الرئيسي مستمد من مصباح الأشعة فوق البنفسجية وامدادات المياه الى الرفوف العلوية ثلاثة التي تحتوي على خزانات الأسماك. لاحظ أنه يتم تزويد كل حجرة الرف بشكل مستقل، ويمكن التحكم بها بشكل فردي (أو إيقاف تشغيله) عن طريق صمام. يحتوي هذا الخط الرئيسي أيضا صمام استنزاف الرئيسي في نهاية الجزء السفلي، وعند نهاية العليا يستمر كخط المخلص الضغط الذي ينتهي في خط العادم الرئيسي. C. خط العادم الرئيسي يتلقى المياه من خط الضغط المخلص ومن مختلف الأسماك حجرات الخزان وتنتهي إلى الخزانات مخزون المياه. لاحظ أن كل رف لديه خزان الأسماك خط العادم التي هي الأنابيب البلاستيكية وهي طوليا مفتوحة لاستقبال المياه لخزانات الأسماك الفردية. هذه الخطوط ويميل قليلا للسماح للمياه لتشغيل عن طريق الجاذبية إلى خط العادم الرئيسي.الرجاء الضغط هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig2highres.jpg" width="600" /> الشكل 2: ثلاثة مكونات رئيسية مرفق الزرد تجميعها وظيفية بسهولة ملاحظة أن دبابة مخزون المياه لديها بالفعل bioballs. فإن الماء من خط العادم الرئيسي تقع على فلتر الاسفنج وضعت على شبكة فوق مستوى الماء (لوضوح هذا ليس هو مبين في الشكل). لاحظ أن لوضوح الرف الثاني له فقط بعض الدبابات الأسماك يصور، والري يظهر له أنابيب إمدادات 4 فقط، والخط الأسماك خزان العادم شفافة. كل رف من رفوف يمكن ان تحمل تسعة 1 الدبابات L الأسماك ويكون الري 9 الميناء. <img alt="الشكل (3)" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig3highres.jpg" width="600" /><br/&gt; الشكل 3: وحدة حوض للأسماك يتم الحصول على حوض للأسماك في متجر للحيوانات الاليفة العادية ولها قدرة 2 L هي التي شيدت A. نظام تجفيف خزان الأسماك من خلال حفر 1 1/8 &quot;ثقب في الجانب الخلفي لل. الدبابة، ثم &quot;وضعت القطع الأنابيب PVC في المقلوب&quot; 3/4 L &quot;شكل باستخدام 3/4&quot; الكوع PVC. وهذا النظام استنزاف تقع في الجانب المفتوح من حوض للأسماك خطوط العادم الموجود في الجزء الخلفي من الدبابات الأسماك. B. صورة تصور تركيب شبكة في النظام استنزاف حوض للأسماك. شبكة يمنع الزرد من أن ينضب لخطوط العادم. <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig4highres.jpg" /> الشكل 4: بناء الأجزاء الفردية. A. مرشح ومضخة نظام الثلاث هو على الرف السفلي من النظام. يتم توصيل مضخة لثلاثة ميكان<html> مرشحات كال يليه فلتر الأشعة فوق البنفسجية للقضاء على الملوثات من المياه النظام. B. خط العرض الأفقي ينتهي في مشعب الري 9 الميناء، والتي من شأنها توفير المياه العذبة والأكسجين إلى كل دبابة. خط العرض إلى كل رف لديه صمام على الخروج التي يمكن استخدامها لوقف المياه إلى كل رف لأغراض التنظيف والحجر الصحي. C. الأسماك خط خزان العادم يصب في خط العادم الرئيسي لإعادة إدخال الدورة الدموية. يصب خط تخفيف الضغط أيضا في خط العادم الرئيسي. <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig5highres.jpg" /> الشكل 5: الانتهاء من النظام يحتوي نظام الانتهاء مضخة والمرشحات نظام، خط العرض الرأسي الرئيسي، وهو خط العرض الأفقي لكل الرف، خط خزان العادم، وهو خط تخفيف الضغط، وخط العادم الرئيسي لنظام الدورة الدموية الواردة . ithin صفحة = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الرقم 6" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig6highres.jpg" /> الشكل 6: حوض للأسماك الممثل يحتوي حوض للأسماك خط تصريف الذي سيربط مع خطوط تصريف الأفقية في النظام.

Watch this Scientific Journal Video about Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility at JoVE.com

Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

بناء على بناء سهلة لمرفق الزرد بأسعار معقولة و

In vivo biomedical research is pivotal to translate in vitro findings into clinical advances. Small academic institutions with limited resources find it ...

construction-of-an-affordable-and-easy-to-build-zebrafish-facility

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

16.3K Views.  Presbyterian College School of Pharmacy. A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

Video: Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related research fields. Thanks to its unique features, including large fecundity, embryo translucency, rapid and simultaneous development, etc., zebrafish embryos are often used for large scale toxicity assessment of chemicals and drug/compound screening. A typical screening procedure involves adult zebrafish spawning, embryos selection, and arraying the embryos into multi-well plates. From there, embryos are subjected to exposure and the toxicity of chemical, or the effectiveness of the drugs/compounds can be evaluated relatively quickly based on phenotypic observations. Among these processes, embryos arraying is one of the most time-consuming and labor-intensive steps that limits the throughput level. In this protocol, we present an innovative approach that makes use of a 3D-printed arraying template coupled with vacuum manipulation to speed up this laborious step. The protocol herein describes the overall design of the arraying template, a detailed experimental setup and step-by-step procedure, followed by representative results. When implemented, this approach should prove beneficial in a variety of research applications using zebrafish embryos as testing subjects.

A 3-dimensional 3D-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

Here, we present a protocol to design and fabricate a zebrafish embryo arraying template, followed by a detailed procedure on the use of such template for high throughput zebrafish embryo arraying into a 96-well plate.

3-الأبعاد (3D)--طباعة قالب للجنين الزرد الإنتاجية العالية أرايينج

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related ...

Environment

Microstructured Devices for Optimized Microinjection and Imaging of Zebrafish Larvae

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning fundamental developmental biology through to large-scale genetic and chemical screens. However, many experiments, especially those related to infection and xenograft models, rely on microinjection and imaging of embryos and larvae, which are laborious techniques that require skill and expertise. To improve the precision and throughput of current microinjection techniques, we developed a series of microstructured devices to orient and stabilize zebrafish embryos at 2 days post fertilization (dpf) in ventral, dorsal, or lateral orientation prior to the procedure. To aid in the imaging of embryos, we also designed a simple device with channels that orient 4 zebrafish laterally in parallel against a glass cover slip. Together, the tools that we present here demonstrate the effectiveness of photolithographic approaches to generate useful devices for the optimization of zebrafish techniques.

Microinjection of zebrafish embryos and larvae is a crucial but challenging technique used in many zebrafish models. Here, we present a range of microscale tools to aid in the stabilization and orientation of zebrafish for both microinjection and imaging.

أجهزة ميكروستروكتوريد Microinjection الأمثل وتصوير يرقات الزرد

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning ...

Developmental Biology

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system measures spontaneous behaviors and the response to an aversive stimulus, which is shown to the larvae via a PowerPoint presentation. The recorded images are analyzed with an ImageJ macro, which automatically splits the color channels, subtracts the background, and applies a threshold to identify individual larvae placement in the lanes. We can then import the coordinates into an Excel sheet to quantify swim speed, preference for edge or side of the lane, resting behavior, thigmotaxis, distance between larvae, and avoidance behavior. Subtle changes in behavior are easily detected using our system, making it useful for behavioral analyses after exposure to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Our laboratory developed a novel high-throughput automated imaging system that is useful for the detection of several different behaviors in 7-day-old zebrafish larvae. The system can be used for detecting subtle changes in behavior after the larvae have been exposed to environmental toxicants or pharmaceuticals.

الآلي التحليلات السلوكية عالية الإنتاجية في يرقات اسماك الزرد

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

Neuroscience

The Zebrafish Tol2 System: A Modular and Flexible Gateway-Based Transgenesis Approach

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) are characterized by a highly variable set of structural defects and cognitive impairments that arise due to prenatal ethanol exposure. Due to the complex pathology of FASD, animal models have proven critical to our current understanding of ethanol-induced developmental defects. Zebrafish have proven to be a powerful model to examine ethanol-induced developmental defects due to the high degree of conservation of both genetics and development between zebrafish and humans. As a model system, zebrafish possess many attributes that make them ideal for developmental studies, including large numbers of externally fertilized embryos that are genetically tractable and translucent. This allows researchers to precisely control the timing and dosage of ethanol exposure in multiple genetic contexts. One important genetic tool available in zebrafish is transgenesis. However, generating transgenic constructs and establishing transgenic lines can be complex and difficult. To address this issue, zebrafish researchers have established the transposon-based Tol2 transgenesis system. This modular system uses a multisite Gateway cloning approach for the quick assembly of complete Tol2 transposon-based transgenic constructs. Here, we describe the flexible Tol2 system toolbox and a protocol for generating transgenic constructs ready for zebrafish transgenesis and their use in ethanol studies.

This work describes a protocol for the modular Tol2 transgenesis system, a gateway-based cloning method to create and inject transgenic constructs into zebrafish embryos.

نظام الزرد Tol2: نهج وراثي معياري ومرن قائم على البوابة

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) are characterized by a highly variable set of structural defects and cognitive impairments that arise due to ...

التحقيق في التطور مع التلاعب بالإشارات البصرية الجينية في الزرد

Optogenetic Signaling Activation in Zebrafish Embryos

Signaling pathways orchestrate fundamental biological processes, including development, regeneration, homeostasis, and disease. Methods to experimentally manipulate signaling are required to understand how signaling is interpreted in these wide-ranging contexts. Molecular optogenetic&#160;tools can provide reversible, tunable manipulations of signaling pathway activity with a high degree of spatiotemporal control and have been applied in vitro, ex vivo, and in vivo. These tools couple light-responsive protein domains, such as the blue light homodimerizing light-oxygen-voltage sensing (LOV) domain, with signaling effectors to confer light-dependent experimental control over signaling. This protocol provides practical guidelines for using the LOV-based bone morphogenetic protein (BMP) and Nodal signaling activators bOpto-BMP and bOpto-Nodal in the optically accessible early zebrafish embryo. It describes two control experiments: A quick phenotype assay to determine appropriate experimental conditions, and an immunofluorescence assay to directly assess signaling. Together, these control experiments can help establish a pipeline for using optogenetic tools in early zebrafish embryos. These strategies provide a powerful platform to investigate the roles of signaling in development, health, and physiology.

تسليط الضوء على المؤلف: التلاعب بالإشارات في أجنة الزرد لفك تشفير قرارات مصير الخلية 

Optogenetic manipulation of signaling pathways can be a powerful strategy to investigate how signaling is decoded in development, regeneration, homeostasis, and disease. This protocol provides practical guidelines for using light-oxygen-voltage sensing domain-based Nodal and bone morphogenic protein (BMP) signaling activators in the early zebrafish embryo.

تنشيط الإشارات البصرية الوراثية في أجنة الزرد

Signaling pathways orchestrate fundamental biological processes, including development, regeneration, homeostasis, and disease. Methods to experimentally ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and behavioural research. As a vertebrate, zebrafish share considerable genetic sequence similarity with humans and are being used as an animal model for various human disease conditions. The advantages of zebrafish in comparison to other common vertebrate models include high fecundity, low maintenance cost, transparent embryos, and rapid development. Due to the spur of interest in zebrafish research, the need to establish and maintain a productive zebrafish housing facility is also increasing. Although literature is available for the maintenance of a zebrafish laboratory, a concise video protocol is lacking. This video illustrates the protocol for regular housing, feeding, breeding and raising of zebrafish larvae. This process will help researchers to understand the natural behaviour and optimal conditions of zebrafish husbandry and hence troubleshoot experimental issues that originate from the fish husbandry conditions. This protocol will be of immense help to researchers planning to establish a zebrafish laboratory, and also to graduate students who are intending to use zebrafish as an animal model.

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

This protocol outlines regular maintenance and care to maintain optimal conditions for zebrafish husbandry. The video illustrates the protocol for system maintenance, regular housing, feeding, breeding, and raising of zebrafish larvae.

العناية والصيانة العادية من اسماك الزرد (<em&gt; دانيو rerio</em&gt;) المختبر: مقدمة

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model congenital abnormalities. During the first day of life, the zebrafish embryo progresses through many developmental stages including fertilization, cleavage, gastrulation, segmentation, and the organogenesis of structures such as the kidney, heart, and central nervous system. The anatomy of a young zebrafish embryo presents several challenges for the visualization and analysis of the tissues involved in many of these events because the embryo develops in association with a round yolk mass. Thus, for accurate analysis and imaging of experimental phenotypes in fixed embryonic specimens between the tailbud and 20 somite stage (10 and 19 hours post fertilization (hpf), respectively), such as those stained using whole mount in situ hybridization (WISH), it is often desirable to remove the embryo from the yolk ball and to position it flat on a glass slide. However, performing a flat mount procedure can be tedious. Therefore, successful and efficient flat mount preparation is greatly facilitated through the visual demonstration of the dissection technique, and also helped by using reagents that assist in optimal tissue handling. Here, we provide our WISH protocol for one or two-color detection of gene expression in the zebrafish embryo, and demonstrate how the flat mounting procedure can be performed on this example of a stained fixed specimen. This flat mounting protocol is broadly applicable to the study of many embryonic structures that emerge during early zebrafish development, and can be implemented in conjunction with other staining methods performed on fixed embryo samples.

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

The zebrafish embryo is an excellent model for developmental biology research. During embryogenesis, zebrafish develop with a yolk mass, which presents three-dimensional challenges for sample observation and analysis. This protocol describes how to create two-dimensional flat mount preparations of whole mount in situ (WISH) stained zebrafish embryo specimens.

إعداد جبل مسطح لمراقبة وتحليل الأجنة الزرد عينات الملون بواسطة جبل الجامعة<em&gt; في الوضع الطبيعي</em&gt; التهجين

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model ...

A Manual Small Molecule Screen Approaching High-throughput Using Zebrafish Embryos

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology due to their considerable degree of genetic conservation with humans. Chemical genetics entails testing the effect that small molecules have on a biological process and is becoming a popular translational research method to identify therapeutic compounds. Zebrafish are specifically appealing to use for chemical genetics because of their ability to produce large clutches of transparent embryos, which are externally fertilized. Furthermore, zebrafish embryos can be easily drug treated by the simple addition of a compound to the embryo media. Using whole-mount in situ hybridization (WISH), mRNA expression can be clearly visualized within zebrafish embryos. Together, using chemical genetics and WISH, the zebrafish becomes a potent whole organism context in which to determine the cellular and physiological effects of small molecules. Innovative advances have been made in technologies that utilize machine-based screening procedures, however for many labs such options are not accessible or remain cost-prohibitive. The protocol described here explains how to execute a manual high-throughput chemical genetic screen that requires basic resources and can be accomplished by a single individual or small team in an efficient period of time. Thus, this protocol provides a feasible strategy that can be implemented by research groups to perform chemical genetics in zebrafish, which can be useful for gaining fundamental insights into developmental processes, disease mechanisms, and to identify novel compounds and signaling pathways that have medically relevant applications.

The zebrafish is an excellent experimental organism to study vertebrate developmental processes and model human disease. Here, we describe a protocol on how to perform a manual high-throughput chemical screen in zebrafish embryos with a whole-mount in situ hybridization (WISH) read-out.

دليل جزيء صغير شاشة تقترب عالية الإنتاجية عن طريق الزرد الأجنة

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology ...

بناء على بناء سهلة لمرفق الزرد بأسعار معقولة و

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

3-الأبعاد (3D)--طباعة قالب للجنين الزرد الإنتاجية العالية أرايينج

أجهزة ميكروستروكتوريد Microinjection الأمثل وتصوير يرقات الزرد

الآلي التحليلات السلوكية عالية الإنتاجية في يرقات اسماك الزرد

نظام الزرد Tol2: نهج وراثي معياري ومرن قائم على البوابة

تنشيط الإشارات البصرية الوراثية في أجنة الزرد

تنشيط الإشارات البصرية الوراثية في أجنة الزرد

تنشيط الإشارات البصرية الوراثية في أجنة الزرد

العناية والصيانة العادية من اسماك الزرد (

إعداد جبل مسطح لمراقبة وتحليل الأجنة الزرد عينات الملون بواسطة جبل الجامعة

دليل جزيء صغير شاشة تقترب عالية الإنتاجية عن طريق الزرد الأجنة