Name: generation of single-cell suspensions from mouse neural tissue
Uploaded: 2009-07-07T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue at JoVE.com

على العمل تحت ظروف معقمة ، فمن المستحسن لتنفيذ كافة الخطوات في تدفق الصفحي هود. 1. المواد <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأنسجة العصبية التفكك كيت (P) (المكونات : الحل 1،2 و 3 و 4 ، والتخزين الاحتياطي) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل فصل فلاتر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (اختياري) الخرز إزالة المايلين </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيتا المركابتويثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> gentleMACS Dissociator </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> C أنابيب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MACSmix الأنبوب الدوار </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS (ث / س) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS (ث) </li></ul><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحلول التالية قبل بداية البروتوكول : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هانكس &quot;محلول الملح التخزين المؤقت دون كاتيونات الكالسيوم ثنائي التكافؤ 2 + أو Mg 2 + (HBSS (ث / س) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS ، ومعيار ، أي مع الكالسيوم والمغنيسيوم 2 + 2 + (HBSS (ث) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على حاتمة مستضد الفائدة في التطبيقات اللاحقة ، إما استخدام غراء المستندة إلى الأنسجة العصبية التفكك كيت (P) أو التربسين المستندة إلى الأنسجة العصبية التفكك كيت (T). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحلول التالية من أدوات الأنسجة العصبية التفكك : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل 2 : إضافة بيتا المركابتويثانول إلى 0.067 ملي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل 4 : مسحوق يذوب في 0.7 مل مخزن تخزين (المقدمة في المجموعة) ، ومزيج بلطف (لا الدوامة) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ميكس انزيم 1 : 1.9 مل من محلول الماصة 2 و 50 ميكرولتر الحل 1 (كلاهما من المجموعة) في أنبوب جيم واحتضان لمدة 10-15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. هذه هي كافية لفصل 400 ملغ من أنسجة المخ. </li></ol></li></ol> 2. عدم الربط بين الأنسجة العصبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن أنسجة المخ في أنبوب يحتوي على 1 مل HBSS (ث / س) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل مخ الفأر في أنبوب C تحتوي على 1950 ميكرولتر من أنزيم ميكس محمى 1. (ملاحظة : كتب هذا البروتوكول ل≤ 400 ملغ ، ولكن يمكن تحجيمها وحدات التخزين حل لتستوعب ما يصل إلى 1600 ملغ من نسيج المخ في الأنبوب C) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب C على لDissociator gentleMACS وتشغيل برنامج &quot;m_brain_01&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مع التناوب (4 دورة في الدقيقة باستخدام أنبوب MACSmix الدوار) لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب C على لDissociator gentleMACS وتشغيل برنامج &quot;m_brain_02&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال الخطوة تعد تفارق 30 ميكرولتر من أنزيم ميكس 2 في 400 ملغ من النسيج من خلال مزج بلطف 20 ميكرولتر من محلول 3 و 10 ميكرولتر من الحل 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة أنزيم ميكس 2 إلى C أنبوب عبر الحاجز كاب مختومة والمزيج بلطف دون vortexing. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الانبوب C مع التناوب لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب C على لDissociator gentleMACS وتشغيل برنامج &quot;m_brain_03&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الانبوب C مع التناوب لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع عينة في الجزء السفلي من الأنبوب. </li></ol> 3. تصفية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار مرشح كبيرة بما يكفي للسماح للمرور على خلايا الفائدة. على سبيل المثال ، خلايا بركينيي كبيرة جدا لتمر من خلال تصفية 30 ميكرون ، ولكن سوف Prominin - 1 + الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ماصة suitable1000 ميكرولتر لإزالة الخلايا تشكل أنبوب C من خلال كاب الحاجز مختومة وتطبيقه على تصفية ما قبل الفصل في أنبوب جمع 15 مل. (ملاحظة : لأحجام أكبر عينة استخدام أنبوب جمع 50 مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل فلتر مع 10 مل من HBSS (ث). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي الخلايا التي تمت تصفيتها في 300 x ج لمدة 10 دقيقة في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend supernatent والمتوسطة في المخزن الخاص أو في الاختيار للتطبيقات اللاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإزالة الحطام الميلين ، واستخدام الخرز إزالة الميالين. </li></ol> 4. ممثل النتيجة : يرجى الاطلاع على الأرقام 1-3 <img src="/files/ftp_upload/1267/Fig_1.png" alt="الشكل 1" /> الرقم. (1) أدى تفكك المخ مع Dissociator gentleMACS في خلايا قابلة للحياة بنسبة 97 ٪ ، كما يظهر تحليل تدفق cytometric. <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig2.png" alt="الشكل 2" /> الرقم. 2 صورة المجهر ضوء تشكيل خلية neurosphere بعد فرز المغناطيسي استخدام الألغام المضادة للProminin MicroBeads - 1 بعد 7 أيام من زراعتها في MACS ® NeuroMedium تستكمل مع PLUS MACS B27 الملحق. وأعدت خلايا من مخ الفأر CD1 (P3) باستخدام الأنسجة العصبية التفكك كيت (P). <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig4.jpg" alt="الشكل 3.5" /> الرقم. 3 المايلين في الحطام وحيدة الخلية تعليق يضعف إلى حد كبير بمعزل عن الخلية ، وإزالة الأنقاض التي الخرز إزالة النخاعين المايلين الزيادات فصل الخلايا الكفاءة. لفصل MACS استخدام الألغام المضادة للProminin MicroBeads - 1 ، وكان P22 مخ الفأر فصلها باستخدام الأنسجة العصبية التفكك كيت (P). وكانت الخلايا من التعليق وحيدة الخلية تستخدم إما مباشرة للانفصال ، أو قدمت إلى استنفاد المايلين باستخدام الخرز إزالة الميالين. مقارنة عينات من دون الانفصال عن ومع إزالة النخاعين ، يدل على أن نقاء أعلى للعينات مع إزالة النخاعين السابقة.

<ol>
	<li>Hardt, O., Scholz, C., K&#252;sters, D., Yanagawa, Y., Pennartz, S., Cremer, H., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+analysis+defines+differences+between+region-specific+GABAergic+neurons.">Gene expression analysis defines differences between region-specific GABAergic neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 39, 418-428 (2008).</li><li>Lee, J. K., McCoy, M. K., Harms, A. S., Ruhn, K. A., Gold, S. J., Tansey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response.">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li><li>K&#246;rnyei, Z., G&#243;cza, E., R&#252;hl, R., Orsolits, B., V&#246;r&#246;s, E., Szab&#243;, B., V&#225;govits, B., Madar&#225;sz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astroglia-derived+retinoic+acid+is+a+key+factor+in+glia-induced+neurogenesis.">Astroglia-derived retinoic acid is a key factor in glia-induced neurogenesis.</a> FASEB J. 21, 2496-2509 (2007).</li><li>Meylan, F., Davidson, T. S., Kahle, E., Kinder, M., Acharya, K., Jankovic, D., Bundoc, V., Hodges, M., Shevach, E. M., Keane-Myers, A., Wang, E. C., Siegel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TNF-family+receptor+DR3+is+essential+for+diverse+T+cell-mediated+inflammatory+diseases.">The TNF-family receptor DR3 is essential for diverse T cell-mediated inflammatory diseases.</a> Immunity. 29, 79-89 (2008).</li><li>Skog, J., W&#252;rdinger, T., van Rijn, S., Meijer, D. H., Gainche, L., Sena-Esteves, M., Curry, W. T., Carter, B. S., Krichevsky, A. M., Breakefield, X. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+microvesicles+transport+RNA+and+proteins+that+promote+tumour+growth+and+provide+diagnostic+biomarkers.">Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers.</a> Nat Cell Biol. 10, 1470-1476 (2008).</li></ol>

الكتاب هم من موظفي شركة محدودة Miltenyi بيوتيك ، ألمانيا.

وDissociator gentleMACS يسهل إعداد موحدة وحيدة الخلية تعليق من الأنسجة العصبية في نظام مغلق. الأنسجة العصبية هي الأمثل للحفاظ على أطقم التفكك الحواتم المستضد اللازمة لتطبيقات أخرى مثل وimmunostainings immunomagnetic فصل الخلية 1-5. في هذا البروتوكول نظهر التفكك طيف الأنزيمية للدماغ فأر باستخدام Dissociator gentleMACS والأنسجة العصبية التفكك كيت (P) ، مما أسفر في خلايا قابلة للحياة 97 ٪. 100 ملغ من غلة الأنسجة العصبية بين 6 و 5x10 1x10 7 خلايا ، اعتمادا على عمر النسيج المضيف. وقد تم عزل المستهدفة Prominin - 1 + الخلايا باستخدام مضاد للProminin - 1 MicroBeads واقتيد بعد ذلك إلى الثقافة. يظهر بروتوكول لتكون أكثر فعالية مع استخدام إضافية من الخرز إزالة المايلين عند العمل مع الأنسجة العصبية المشتقة من P7&gt; الفئران.

<table><tbody><tr><td>C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Starting Kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Neural Tissue Dissociation Kit (P)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-092-628</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Pre-Separation Filters</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-Prominin-1 MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-092-333</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-Prominin-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-092-335</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Myelin Removal Beads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-094-544</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Art 1000 Reach Pipet Tips </td><td>Molecular BioProducts</td><td>Order no. 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;br/&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Neural Tissue Dissociation Kit (T)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-093-231</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Propidium Iodide Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

generation of single-cell suspensions from mouse neural tissue

داخل الجهاز العصبي ، وقد وصفت المئات من أنواع الخلايا العصبية والدبقية. لكل نوع من أنواع معينة من الخلايا في الدماغ أو النخاع الشوكي لديه ذخيرة من جزيئات سطح الخلية ، أو المحددات الجزيئية ، والتي يمكن من خلالها التعرف عليه ، وتميزت. حاليا ، تحديد الخلية قوية وتقنيات الفصل يتطلب أن تكون ولدت وحيدة الخلية مع الحد في الوقت نفسه الاستعدادات موت الخلايا وتدمير للبروتين سطح مميزة. يمكن للDissociator gentleMACS ، عندما تستخدم في تركيبة مع التربسين أو غراء المستندة مجموعات تفارق وفعالية وبلطف فصل أنسجة المخ مع الحفاظ الحواتم المستضد ، والحد من فقدان الخلية. ويتحقق إعداد موحدة وحيدة الخلية الايقاف باستخدام أنابيب C ، وتحسين برامج gentleMACS مسبقا. ويمكن علاج تولد مرة واحدة ، وحيدة الخلية وحيدة النسيلة تقارن مع تعليق مثل مكافحة Prominin 1 - MicroBeads ، التي تحدد الأسلاف العصبية ، أو تنقيتها باستخدام مزيد من الخرز إزالة الميالين.

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue at JoVE.com

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

الفصل بين أنواع خلايا من نسيج معين يتطلب المعلمات محددة لaggitation الأنسجة للحصول على كميات كبيرة من الخلايا ، قابلة للحياة زروع. وgentleMACS Miltenyi Dissociator يحسن هذه المهمة مع بروتوكول بسيطة وعملية. في هذا الكتاب هو شرح لاستخدام هذا الجهاز على أنسجة nerual.

جيل وحيدة الخلية معلقات من الأنسجة العصبية ماوس

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

generation-of-single-cell-suspensions-from-mouse-neural-tissue

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

22.4K Views.  Miltenyi Biotec,GmbH.  中文 日本語 

Video: Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

Primary neural stem cell cultures are useful for studying the mechanisms underlying central nervous system development. Stem cell research will increase our understanding of the nervous system and may allow us to develop treatments for currently incurable brain diseases and injuries. In addition, stem cells should be used for stem cell research aimed at the detailed study of mechanisms of neural differentiation and transdifferentiation and the genetic and environmental signals that direct the specialization of the cells into particular cell types.  This video demonstrates a technique used to disaggregate cells from the embryonic day 12.5 mouse dorsal forebrain. The dissection procedure includes harvesting E12.5 mouse embryos from the uterus, removing the "skin" with fine dissecting forceps and finally isolating pieces of cerebral cortex. Following the dissection, the tissue is digested and mechanically dissociated. The resuspended dissociated cells are then cultured in "stem cell" media that favors growth of neural stem cells.

This video describes the method used for isolation of neuroprecursors from the developing cortex of embryonic mice. The procedure for removing embryos from the uterus, dissecting the cortical tissue, and digesting the isolated cerebral cortex is shown.

ثقافة العصبية الماوس السلائف الخلايا الجذعية

Primary neural stem cell cultures are useful for studying the mechanisms underlying central nervous system development. Stem cell research will increase ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life span of the animal. They can potentially replace cells that are lost in the aging process or in the process of injury and disease. The existence of neural stem cells (NSCs) was first described by Reynolds and Weiss (1992) in the adult mammalian central nervous system (CNS) using a novel serum&#8208;free culture system, the neurosphere assay (NSA). Using this assay, it is also feasible to isolate and expand NSCs from different regions of the embryonic CNS. These in vitro expanded NSCs are multipotent and can give rise to the three major cell types of the CNS. While the NSA seems relatively simple to perform, attention to the procedures demonstrated here is required in order to achieve reliable and consistent results. This video practically demonstrates NSA to generate and expand NSCs from embryonic day 14-mouse brain tissue and provides technical details so one can achieve reproducible neurosphere cultures. The procedure includes harvesting E14 mouse embryos, brain microdissection to harvest the ganglionic eminences, dissociation of the harvested tissue in NSC medium to gain a single cell suspension, and finally plating cells in NSA culture. After 5-7 days in culture, the resulting primary neurospheres are passaged to further expand the number of the NSCs for future experiments.

This video protocol demonstrates the application of the neurosphere assay for the isolation and expansion of neural stem cells from the ganglionic eminences of embryonic day 14-mouse brain.

تأسيس الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية الثقافة باستخدام الفحص Neurosphere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neuroscience

Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ultimately give rise to intermediate progenitors and later, the various neuronal and glial cell subtypes that form the cerebral cortex. The capacity to generate and expand human NSCs (so called neurospheres) from discarded normal fetal tissue provides a means with which to directly study the functional aspects of normal human NSC development 1-5. This approach can also be directed toward the generation of NSCs from known neurological disorders, thereby affording the opportunity to identify disease processes that alter progenitor proliferation, migration and differentiation 6-9. We have focused on identifying pathological mechanisms in human Down syndrome NSCs that might contribute to the accelerated Alzheimer's disease phenotype 10,11. Neither in vivo nor in vitro mouse models can replicate the identical repertoire of genes located on human chromosome 21. 
Here we use a simple and reliable method to isolate Down syndrome NSCs from aborted human fetal cortices and grow them in culture. The methodology provides specific aspects of harvesting the tissue, dissection with limited anatomical landmarks, cell sorting, plating and passaging of human NSCs. We also provide some basic protocols for inducing differentiation of human NSCs into more selective cell subtypes.

A simple and reliable method on isolation and culture of neural stem cells from discarded human fetal cortical tissue is described. Cultures derived from known human neurological disorders can be used for characterization of pathological cellular and molecular processes, as well as provide a platform to assess pharmacological efficacy.

جيل من الخلايا الجذعية العصبية من الأنسجة الجنينية البشرية المهملة القشرية

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult neural stem cells in vitro. These assays can be used to compare the precursor potential of cells isolated from genetically different or differentially treated animals&#160;to determine the effects of exogenous factors on neural precursor cell proliferation and differentiation and to generate neural precursor cell lines that can be assayed over continuous passages. The neurosphere assay is traditionally used for the post-hoc identification of stem cells, primarily due to the lack of definitive markers with which they can be isolated from primary tissue&#160;and has the major advantage of giving a quick estimate of precursor cell numbers in brain tissue derived from individual animals. Adherent monolayer cultures, in contrast, are not traditionally used to compare proliferation between individual animals, as each culture is generally initiated from the combined tissue of between 5-8 animals. However, they have the major advantage that, unlike neurospheres, they consist of a mostly homogeneous population of precursor cells and are useful for following the differentiation process in single cells. Here, we describe, in detail, the generation of neurosphere cultures and, for the first time, adherent cultures from individual animals. This has many important implications including paired analysis of proliferation and/or differentiation potential in both the subventricular zone (SVZ) and dentate gyrus (DG) of treated or genetically different mouse lines, as well as a significant reduction in animal usage.

Here we describe a detailed protocol for the simultaneous generation of neural precursor cell cultures, as either adherent monolayers or neurospheres, from the subventricular zone and dentate gyrus of individual adult mice.

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation into three types of cells: neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. Identifying aNSC-derived regions and characterizing the aNSC properties are critical for the potential use of aNSCs and for the elucidation of their role in neural regeneration. The subcallosal zone (SCZ), located between white matter and the hippocampus, has recently been reported to contain aNSCs and continuously give rise to neuroblasts. A low percentage of aNSCs from the SCZ is differentiated into neurons; most cells are differentiated into glial cells, such as oligodendrocytes and astrocytes. These cells are suggested to have a therapeutic potential for traumatic cortical injury. This protocol describes in detail the process to generate SCZ-aNSCs from an adult mouse brain. A brain matrix with intervals of 1 mm is used to obtain the SCZ-containing coronal slices and to precisely dissect the SCZ from the whole brain. The SCZ sections are initially subjected to a neurosphere culture. A well-developed culture system allows for the verification of their characteristics and can increase research on NSCs. A neurosphere culture system provides a useful tool for determining proliferation and collecting the genuine NSCs. A monolayer culture is also an in vitro system to assay proliferation and differentiation. Significantly, this culture system provides a more homogenous environment for NSCs than the neurosphere culture system. Thus, using a discrete brain region, these culture systems will be helpful for expanding our knowledge about aNSCs and their applications for therapeutic uses.

Establishing culture systems for the expansion of adult neural stem cells (aNSCs) allows for the examination and application of aNSCs for therapy. The subcallosal zone (SCZ) has recently been recognized as a novel neuroblast-forming region in adult mice. Here, methods for the isolation, expansion, and differentiation of SCZ-aNSCs are described.

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and expansion of NSCs provide a suitable source of cells for neuroscientists to study the function of neurons and glial cells along with their interactions. There are several reported techniques for the isolation of neural stem cells from adult or embryo mammalian brains. During the microsurgical operation to isolate NSCs from different regions of the embryonic CNS, it is very important to reduce the damage to the brain cells to obtain the highest ratio of live and expandable stem cells. A possible technique for stress reduction during isolation of these cells from the mouse embryo brain is the reduction of surgical time. Here, we demonstrate a developed technique for rapid isolation of these cells from the E13 mouse embryo ganglionic eminence. Surgical procedures include harvesting E13 mouse embryos from the uterus, cutting the frontal fontanelle of the embryo with a bent needle tip, extracting the brain from the skull, microdissection of the isolated brain to harvest the ganglionic eminence, dissociation of the harvested tissue in NSC medium to gain a single cell suspension, and finally plating cells in suspension culture to generate neurospheres.

Here, we introduce a novel microsurgical technique for the isolation of neural stem cells from the E13 mouse embryo ganglionic eminence.

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

<meta charset="utf8"></head><body>كفاءة النواة من NSCs المعزولة من منطقة البطين تحت البطين الفئران

Isolation, Expansion, and Nucleofection of Neural Stem Cells from Adult Murine Subventricular Zone

Isolation and expansion of neural stem cells (NSCs) from the subventricular zone (SVZ) of the adult mouse brain can be achieved in a medium supplemented with basic fibroblast growth factor (bFGF) and epidermal growth factor (EGF) as mitogens, producing clonal aggregates known as neurospheres. This in vitro system is a valuable tool for studying NSC potential. Transfection of siRNAs or genes carried in plasmids can be used to induce perturbations to gene expression and study NSC biology. However, the exogenous nucleic acid delivery to NSC cultures is challenging due to the low efficiency of central nervous system (CNS) cells transfection. Here, we present an improved nucleofection system that achieves high efficiency of gene delivery in expanded NSCs from adult murine SVZ. We demonstrate that this relatively simple method enhances gene perturbation in adult NSCs, surpassing traditional transfection protocols with survival rates exceeding 80%. Moreover, this method can also be applied in primary isolated NSCs, providing a crucial advancement in gene function studies through gene expression manipulation via knockdown or overexpression in neurosphere cultures.

<meta charset="utf8"></head><body>تسليط الضوء على المؤلف: تحسين النواة لتوصيل الجينات عالية الكفاءة في مزارع الخلايا الجذعية العصبية المشتقة من منطقة البطين تحت البطين

Here, we describe a nucleofection system designed to enhance gene delivery efficiency in expanded neural stem cells (NSCs) isolated from the adult murine subventricular zone. The findings demonstrate that this method significantly improves gene perturbation in NSCs, surpassing the effectiveness of traditional transfection protocols and enhancing cell survival rate.

عزل وتوسع ونواة الخلايا الجذعية العصبية من منطقة تحت البطين الفئران البالغة

Isolation and expansion of neural stem cells (NSCs) from the subventricular zone (SVZ) of the adult mouse brain can be achieved in a medium supplemented ...

الحصول على معلقات أحادية الخلية من دماغ الفئران ونخاع عظم الجمجمة

Isolating Immune Cells from Mouse Brain and Skull

Mounting evidence indicates that the immune response triggered by brain disorders (e.g., brain ischemia and autoimmune encephalomyelitis) occurs not only in the brain, but also in the skull. A key step toward analyzing changes in immune cell populations in both the brain and skull bone marrow after brain damage (e.g., stroke) is to obtain sufficient numbers of high-quality immune cells for downstream analyses. Here, two optimized protocols are provided for isolating immune cells from the brain and skull bone marrow. The advantages of both protocols are reflected in their simplicity, speed, and efficacy in yielding a large quantity of viable immune cells. These cells may be suitable for a range of downstream applications, such as cell sorting, flow cytometry, and transcriptomic analysis. To demonstrate the effectiveness of the protocols, immunophenotyping experiments were performed on stroke brains and normal brain skull bone marrow using flow cytometry analysis, and the results aligned with findings from published studies.

تسليط الضوء على المؤلف: التحقيق في الاستجابة المناعية المعقدة بعد نقص تروية الدماغ

To investigate the immune response to brain disorders, one common approach is to analyze changes in immune cells. Here, two simple and effective protocols are provided for isolating immune cells from murine brain tissue and skull bone marrow.

عزل الخلايا المناعية عن دماغ الفأر والجمجمة

Mounting evidence indicates that the immune response triggered by brain disorders (e.g., brain ischemia and autoimmune encephalomyelitis) occurs not only ...

جيل وحيدة الخلية معلقات من الأنسجة العصبية ماوس

Transcript

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

ثقافة العصبية الماوس السلائف الخلايا الجذعية

تأسيس الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية الثقافة باستخدام الفحص Neurosphere

جيل من الخلايا الجذعية العصبية من الأنسجة الجنينية البشرية المهملة القشرية

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية

عزل وتوسع ونواة الخلايا الجذعية العصبية من منطقة تحت البطين الفئران البالغة

عزل وتوسع ونواة الخلايا الجذعية العصبية من منطقة تحت البطين الفئران البالغة

عزل وتوسع ونواة الخلايا الجذعية العصبية من منطقة تحت البطين الفئران البالغة

عزل الخلايا المناعية عن دماغ الفأر والجمجمة