Name: probing the limits of egg recognition using egg rejection experiments along phenotypic gradients
Uploaded: 2018-08-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Probing the Limits of Egg Recognition Using Egg Rejection Experiments Along Phenotypic Gradients at JoVE.com

MEH HJ Van Cleave profesörlük Illinois Üniversitesi, Urbana-Champaign, tarafından finanse edildi. Buna ek olarak, finansman için insan sınır bilim programı (M.E.H. ve T.G.) ve Avrupa Sosyal Fonu ve Çek Cumhuriyeti devlet bütçesi teşekkür ediyoruz proje no. CZ.1.07/2.3.00/30.0041 (TG için). Okyanus optik yayın maliyetleri kapsayan için teşekkür ediyoruz.

Okyanus optik sayfa giderler bu el yazması için finanse.

Yumurta ret deneyler damızlık parazit-ana bilgisayar coevolution66eğitim için en yaygın yöntem olmakla birlikte, malzemeler, teknik veya iletişim kuralları standartlaştırmak için uyumlu çabaları eksik vardır. Bu meta-analizleri için özellikle problemlidir. Hiçbir meta-analiz, bizim bilgi, bir ana bilgisayar yumurta Red defa arasında çalışmalar67,68mimetic veya mimetic olmayan olarak kabul edilir ne de dahil olmak üzer...

Damızlık parazitler sonra yavrularını yükseltmek ve Ebeveyn Bakımı1,2,3ile ilgili maliyetler ödemek diğer türler yuva içinde yumurtlamak. Bu kanunun ana yorumlanmamalıdır parazit algılamak için ana bilgisayar parazit ve sleuthing mat etmek için aldatma güçlü seçici baskıların her iki oyuncu sağlar. Kuş damızlık parazitizm bazı durumlarda, farklı parazit yumurtaları tanınması ana bilgisayarın ana bilgisayar yumurta, taklit parazitler için ev sahibi ve parazit4arasında evrimsel bir silah yarışı üreten seçer. Damızlık parazitizm eğitim önemli çünkü coevolutionary dynamics soruşturma için bir model sistem ve vahşi5karar verme. Yumurta ret deneyler bir kuş damızlık Asalaklıktan interspecific etkileşimleri6araştırmaya ekologlar kullanmak önemli bir araç ve alanında çalışmak için kullanılan en yaygın yöntemleri vardır.
Yumurta ret deneyler süresince, araştırmacılar genellikle doğal tanıtmak veya yumurta model ve ana bilgisayarın yanıt-e doğru bu deneysel yumurta standartlaştırılmış bir süre içinde değerlendirmek. Bu tür deneyler (Bu görünüm olarak farklı) gerçek yumurta yuva7arasında swapping veya boyama içerebilen veya bu yumurta, gerçek yumurta (isteğe bağlı olarak ekleyerek desenler) ve onları kendi özgün yuva8' e dönen veya model oluşturma yüzeyleri boyama renk910, boyutu11ve/veya şekil12lekelenme gibi özellikleri manipüle. Ana bilgisayar yanıt yumurta değişen görünüm için bilgi içeriği içine bir yumurta ret kararı13 ve ne kadar farklı bir yanıt14temin için olması gereken yumurta ulaşmak için kullandıkları değerli bilgiler sağlayabilir. En iyi kabul eşik teorisi15 devletlerin ana yanlışlıkla bir parazit yumurtası (kabul hata) kabul veya yanlışlıkla kendi yumurtalarını arasındaki farkı inceleyerek kendi yumurta (reddetme hatası) kaldırma riskleri denge olmalıdır (veya bir iç şablon yumurtaları /) ve parazit yumurtaları. Bu nedenle, bir kabul eşiği karar hangi ana bilgisayarlar bir uyarıcı tahammül etmek çok farklı bulunmaktadır. Asalaklıktan riski düşük olduğunda, kabul hataları riskini parazitizm riski yüksek olduğunda daha düşüktür; Böylece, kararlar bağlamda belirli vardır ve uygun olarak algılanan risk değişikliği14,16,17kayacak.
En iyi kabul eşik teorisi ana kararlar sürekli değişim içinde ev sahibi ve parazit fenotipleri üzerine temel varsayar. Bu nedenle, ana bilgisayar yanıt için değişik parazit fenotipleri ölçüm ne kadar hoşgörülü bir ana bilgisayar nüfus (fenotipik kendi çeşitlemesiyle) parazit fenotipleri bir dizi gelir kurmak gereklidir. Ancak, hemen hemen tüm önceki çalışmalar kategorik yumurta renk ve maculation tedavisi (Örneğin, mimetic/sigara-mimetic) yararlanmıştır. Yalnızca ana bilgisayar yumurta kabuğu fenotipleri, biyolojik olarak pratik bir beklenti değil farklı değil ise, tüm yanıtlar (asla bilemeycek derecesi ne olursa olsun) doğrudan karşılaştırılabilir olacaktır. Aksi takdirde, "mimetic" yumurta manken ne kadar benzer ana bilgisayar yumurta içinde ve arasında karışıklığa yol bulgular18karşılaştırırken gerektirebilecek nüfus için içeride değişir. Teorisi barındıran kararlar paraziter yumurta ve kendi14, ille belirli parazit yumurta renkler arasındaki farkı temel alır öneriyor. Yumurta modeli türü ve bireysel host yumurta renk arasında sadece göze çarpan fark (bundan sonra JND) olmadığı sürece bu nedenle, bir tek yumurta modeli türü kullanarak ana bilgisayar karar eşikleri ya da ayrımcılık yetenekleri, hipotezler test etmek için ideal bir yaklaşım değildir Faiz değişken. Bu takas veya ana bilgisayar yanıt renkleri19doğal bir dizi için test etmek için doğal yumurta ekleyin deneysel çalışmalar için de geçerlidir. Ancak, bu çalışmalar ana bilgisayar ve parazit fenotipleri varyasyon için izin verirken, özellikle conspecific yumurta7kullanırken özellikleri6' da bulunan doğal varyasyon tarafından sınırlıdır.
Buna karşılık, çeşitli renklerde yapay yumurta araştırmacılar doğal varyasyon kısıtlamaları ücretsiz (Örneğin, superstimuli20yanıtlarını araştırmak için), onları ana bilgisayar algı6sınırlarını soruşturma izin. Son araştırmalar roman teknikleri boyama deneysel yumurta maç ve yumurta kabuğu9 ve spot renkleri21varyasyon doğal dizi aşmak için tasarlanmış tarafından fenotipik aralığında ana bilgisayar yanıt ölçmek için kullandı. Çünkü sürekli farklılıkları kabul eşikleri15 veya coevolved asla bilemeycek4, gibi teorik Öngörüler esas alan ana bilgisayar yanıt için yumurta renkli gradyanlar boyunca eğitim temel bilişsel süreçler ortaya çıkarmak özellikleri. Örneğin, kullanarak bu yaklaşım, Dainson vd. 21 yumurta kabuğu zemin rengi ve nokta rengi arasındaki renk kontrast daha yüksek olduğunda, Amerikan Robin Turdus migratorius yumurta daha güçlü reddetme eğilimi kurdu. Bu bulgu, nasıl bu ana bilgisayar bilgileri, bu durumda lekelenme aracılığıyla, bir parazit yumurtası kaldırmak karar vermek için işler üzerinde değerli bilgiler sağlar. Boya karışımları özelleştirerek, araştırmacılar tam bir deneysel Egg'in renk ve ana bilgisayarın yumurta renk arasındaki benzerliği desenleri10, yumurta boyutu22 ve yumurta lekelenme gibi karıştırıcı diğer faktörler standartlaştırılması işleyebilirsiniz Şekil23.
Daha fazla çoğaltma ve metareplication24 klasik ve son yumurta ret iş teşvik etmek için bilim adamları arasında phylogeny (farklı ana tür)7,22standart yöntemleri kullanmak önemlidir, alanı (farklı ana nüfus)7,22,25,26 saat (farklı üreme sezon)7,22,ve25,26 ,27nadiren yapıldı,. Standart28 değildi metodolojileri daha sonra artefactual sonuçları29,30' a yol gösterilmiştir. Bu kağıt bu tür sürekli varyasyon yanıt inceler ve önemli metodolojik kavramları bir dizi vurgular yumurta ret deney çoğaltmak isteyen araştırmacılar için yönergeleri kümesi olarak hizmet vermektedir: denetim yuva, önemi bir priori hipotezler, metareplication, pseudoreplication ve renk ve spektral analizi. Kuş ev sahibi-parazit coevolution alan hakim yumurta ret deneyler rağmen henüz kapsamlı protokol bulunmaktadır. Bu nedenle, aşağıdaki yönergeleri Inter - ve içi-tüm çalışmalar phylogeny arasında yinelenen herhangi bir hipotez gerçek testi metareplication yani, yalan gibi tekrarlanabilirlik uzay laboratuarı artırmak ve24, saat için değerli bir kaynak olacak olan yalnızca anlamlı tutarlı yöntemleri29,30,31kullanırken yapılabilir.

<table><tbody><tr><td>Replicator Mini +</td><td>Makerbot</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Cobalt Turquoise Light</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28382</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Titanium White</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28489</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Cobalt Green</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28381</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Cobalt Turquoise</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28449</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Burnt Umber</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28433</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Red Iron Oxide</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28486</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Cadmium Orange</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28437</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Raw Umber Light</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28391</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Yellow Ochre</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28491</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Mars Black</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28460</td><td></td></tr><tr><td>Paint Brush</td><td>Utrecht</td><td>206-FB</td><td>Filbert brush</td></tr><tr><td>Paint Brush</td><td>Utrecht</td><td>206-F</td><td>Flat brush</td></tr><tr><td>Hair Dryer</td><td>Oster</td><td>202</td><td></td></tr><tr><td>Fiber optic cables</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>OCF-103813</td><td>1 m custom bifurcating fiber optic assembly with blue zip tube (PVDF), 3.8mm nominal OD jeacketing and 2 legs</td></tr><tr><td>Spectrometer</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>Jaz</td><td>Spectrometer unit with a 50 um slit width, installed with a 200-850 nm detector (DET2B-200-850), and grating option # 2.</td></tr><tr><td>Battery and SD card module for spectrometer</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>Jaz-B</td><td></td></tr><tr><td>Light source</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>Jaz-PX</td><td>A pulsed xenon light source</td></tr><tr><td>White standard</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>WS-1-SL</td><td>made from Spectralon</td></tr><tr><td>OHAUS Adventurer Pro Scale</td><td>OHAUS</td><td>AV114C</td><td>A precision microbalance</td></tr><tr><td>Gemini-20 portable scale</td><td>AWS</td><td>Gemini-20</td><td>A standard scale</td></tr><tr><td>Empty Aluminum Paint Tubes (22 ml)</td><td>Creative Mark</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Telescopic mirror</td><td>SE</td><td>8014TM</td><td></td></tr><tr><td>GPS</td><td>Garmin</td><td>Oregon 600</td><td></td></tr><tr><td>220-grit sandpaper</td><td>3M</td><td>21220-SBP-15</td><td>very fine sandpaper</td></tr><tr><td>400-grit sandpaper</td><td>3M</td><td>20400-SBP-5</td><td>very fine sandpaper</td></tr><tr><td>color analysis software: &amp;lsquo;pavo&amp;rsquo;, an R package</td><td>for use in, &lt;em&gt;R: A language and environment for statistical computing&lt;/em&gt;</td><td>v 1.3.1</td><td>https://cran.r-project.org/web/packages/pavo/index.html</td></tr><tr><td>UV clear transparent</td><td>Flock off!</td><td>UV-001</td><td>A transparent ultraviolet paint</td></tr><tr><td>Plastic sandwich bags</td><td>Ziploc</td><td></td><td>Regular plastic sandwich bags from Ziploc that can be purchased at the supermarket.</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td>11 x 21 cm kimwipes</td></tr><tr><td>Toothbrush</td><td>Colgate</td><td></td><td>Toothbrush</td></tr></tbody></table>

probing the limits of egg recognition using egg rejection experiments along phenotypic gradients

Damızlık parazitler yumurtadan ve onların genç arka için ana bilgisayar veliler bırakarak diğer kadın yuva içinde yumurtlamak. Eğitim nasıl damızlık parazitler ana çocuklarını yetiştirme içine işlemek ve nasıl algılamak hosts Asalaklıktan coevolutionary biyoloji alanında önemli bilgiler sağlar. Onlar kendi çocuklarını yetiştirme masrafları ödemek zorunda değilsiniz çünkü uğultusu ve cowbirds, gibi damızlık parazitler evrimsel bir avantaj. Ancak, bu maliyetleri parazit yumurtaları, Genç ve yetişkin de dahil olmak üzere, tüm gelişim aşamalarında karşı ana savunma için seçin. Yumurta ret deneyler konak savunma eğitim için kullanılan en yaygın yöntem vardır. Bu deneyler sırasında bir araştırmacı deneysel bir yumurta bir ana bilgisayar yuvada yerleştirir ve nasıl ev sahibi yanıt izler. Renk kez manipüle ve yumurta ayrımcılık ve ana bilgisayar ile deneysel yumurta arasında farklılık derecesini olasılığını ilgili olumlu beklenti olduğunu. Bu kağıt tür deneyler bulguları analiz için tutarlı yumurta renkler oluşturmak için kullanılan yöntemlerin açıklandığı gelen yumurta ret deneyler için bir kılavuz olarak hizmet vermektedir. Özel dikkat renk önyargıları ana bilgisayar tanıma'keşfetmek için potansiyele sahip renk geçişlerini boyunca benzersiz olarak renkli yumurta içeren yeni bir yöntem verilir. Standardizasyon bulgular arasında anlamlı bir şekilde çalışmalar karşılaştırmak mümkün değildir; Bu alanın içindeki standart bir protokol daha fazla deneyler için giderek daha hassas ve karşılaştırılabilir sonuçlar için izin verir.

Renkli yumurta modeller oluşturuluyor
Yansıma spectra özel boya karışımları ve doğal yumurta Şekil 1A-Biçinde gösterilir. Damızlık parazitizm çalışmalarda kullanılan boya karışımları yakından spektral şekli (renk) ve parlaklık (aydınlık) açısından doğal yansıma ölçümleri ile karşılık gelmelidir. Eğer bu elde, deneysel yumurta re...

Watch this Scientific Journal Video about Probing the Limits of Egg Recognition Using Egg Rejection Experiments Along Phenotypic Gradients at JoVE.com

Probing the Limits of Egg Recognition Using Egg Rejection Experiments Along Phenotypic Gradients

Yumurta ret deneyler boyunca fenotipik degradeler kullanarak yumurta tanıma sınırları sondalama

Bu iletişim kuralı reddetme deneyler yumurta çalıştırmak için yönergeler sağlar: deneysel boyama için anahat oluşturma teknikleri yumurta modelleri doğal kuş yumurtaları, saha çalışmaları yürütmek ve toplanan verilerin analiz renkleri taklit etmek için. Bu iletişim kuralı karşılaştırılabilir yumurta ret deneyler için Tekdüzen bir yöntem sağlar.

Brood parasites lay their eggs in other females' nests, leaving the host parents to hatch and rear their young. Studying how brood parasites manipulate ...

probing-limits-egg-recognition-using-egg-rejection-experiments-along

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Behavior

8.2K Görüntüleme.  Long Island University-Post. Bu iletişim kuralı reddetme deneyler yumurta çalıştırmak için yönergeler sağlar: deneysel boyama için anahat oluşturma teknikleri yumurta modelleri doğal kuş yumurtaları, saha çalışmaları yürütmek ve toplanan verilerin analiz renkleri taklit etmek için. Bu iletişim kuralı karşılaştırılabilir yumurta ret deneyler için Tekdüzen bir yöntem sağlar.

Video: Probing the Limits of Egg Recognition Using Egg Rejection Experiments Along Phenotypic Gradients

Upright Imaging of Drosophila Egg Chambers

Drosophila melanogaster oogenesis provides an ideal context for studying varied developmental processes since the ovary is relatively simple in architecture, is well-characterized, and is amenable to genetic analysis. Each egg chamber consists of germ-line cells surrounded by a single epithelial layer of somatic follicle cells. Subsets of follicle cells undergo differentiation during specific stages to become several different cell types. Standard techniques primarily allow for a lateral view of egg chambers, and therefore a limited view of follicle cell organization and identity. The upright imaging protocol describes a mounting technique that enables a novel, vertical view of egg chambers with a standard confocal microscope. Samples are first mounted between two layers of glycerin jelly in a lateral (horizontal) position on a glass microscope slide. The jelly with encased egg chambers is then cut into blocks, transferred to a coverslip, and flipped to position egg chambers upright. Mounted egg chambers can be imaged on either an upright or an inverted confocal microscope. This technique enables the study of follicle cell specification, organization, molecular markers, and egg development with new detail and from a new perspective.

Upright Imaging of Drosophila Egg Chambers

The upright imaging method described in this protocol allows for the detailed visualization of the poles of a developing Drosophila melanogaster egg. This end-on view provides a new perspective into the arrangements and morphologies of multiple cell types in the follicular epithelium.

Dik Görüntüleme<em&gt; Drosophila</em&gt; Yumurta Odaları

Drosophila melanogaster oogenesis provides an ideal context for studying varied developmental processes since the ovary is relatively simple in ...

Gelişim Biyolojisi

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

Identification of genes responsible for embryonic induction poses a number of challenges; to name a few, secreted molecules of interest may be low in abundance, may not be secreted but tethered to the signaling cell(s), or may require the presence of binding partners or upstream regulatory molecules. Thus in a search for gene products capable of eliciting an early lens-inductive response in competent ectoderm, we utilized an expression cloning system that would allow identification of paracrine or juxtacrine factors as well as transcriptional or other regulatory proteins. Pools of mRNA were injected into Xenopus oocytes, and responding tissue placed directly on the oocytes and co-cultured. Following functional cloning of ldb1 from a neural plate stage cDNA library based on its ability to elicit the expression of the early lens placode marker foxe3 in lens-competent animal cap ectoderm, we characterized the mRNA expression pattern, and assayed developmental progression following overexpression or knockdown of ldb1. This system is suitable in a very wide variety of contexts where identification of an inducer or its upstream regulatory molecules is sought using a functional response in competent tissue.

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

We describe a Xenopus oocyte and animal cap system for the expression cloning of genes capable of inducing a response in competent ectoderm, and discuss techniques for the subsequent analysis of such genes. This system is useful in the functional identification of a wide range of gene products.

Bir kullanılması Fonksiyonel Klonlama<em&gt; Xenopus</em&gt; Oosit ekspresyon sistemi

Identification of genes responsible for embryonic induction poses a number of challenges; to name a few, secreted molecules of interest may be low in ...

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has allowed for experiments to map cell fates using several approaches, including chick quail chimeras and focal dye labeling.  In addition, it allows for molecular perturbations of several types, including placement of protein-coated beads and introduction of plasmid DNA using in ovo electroporation.  These experiments have yielded important data on the development of the central and peripheral nervous systems.  For many of these studies, it is necessary to open the eggshell and reclose it without perturbing the embryo's growth.  The embryo can be examined at successive developmental stages by re-opening the eggshell.  While there are several excellent methods for opening chicken eggs, in this article we demonstrate one method that has been optimized for long survival times.  In this method, the egg rests on its side and a small window is cut in the shell.  After the experimental procedure, the shell is used to cover the egg for the duration of its development.  Clear plastic tape overlying the eggshell protects the embryo and helps retain hydration during the remainder of the incubation period.  This method has been used beginning at two days of incubation and has allowed survival through mature embryonic ages.

The ease of accessibility of the embryo has allowed for experiments to map cell fates using several approaches, including chick quail chimeras and focal dye labeling. In this article we demonstrate one egg preparation method that has been optimized for long survival times.

Gelişim Araştırmaları Pencereleme Tavuk Yumurta

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has ...

Biyoloji

Identification of Critical Conditions for Immunostaining in the Pea Aphid Embryos: Increasing Tissue Permeability and Decreasing Background Staining

The pea aphid Acyrthosiphon pisum, with a sequenced genome and abundant phenotypic plasticity, has become an emerging model for genomic and developmental studies. Like other aphids, A. pisum propagate rapidly via parthenogenetic viviparous reproduction, where the embryos develop within egg chambers in an assembly-line fashion in the ovariole. Previously we have established a robust platform of whole-mount in situ hybridization allowing detection of mRNA expression in the aphid embryos. For analyzing the expression of protein, though, established protocols for immunostaining the ovarioles of asexual viviparous aphids did not produce satisfactory results. Here we report conditions optimized for increasing tissue permeability and decreasing background staining, both of which were problems when applying established approaches. Optimizations include: (1) incubation of proteinase K (1 &#181;g/ml, 10 min), which was found essential for antibody penetration in mid- and late-stage aphid embryos; (2) replacement of normal goat serum/bovine serum albumin with a blocking reagent supplied by a Digoxigenin (DIG)-based buffer set and (3) application of methanol rather hydrogen peroxide (H2O2) for bleaching endogenous peroxidase; which significantly reduced the background staining in the aphid tissues. These critical conditions optimized for immunostaining will allow effective detection of gene products in the embryos of A. pisum and other aphids.

A protocol of whole-mount immunostaining on aphid embryos is presented, in which critical conditions for decreasing background staining and increasing tissue permeability are addressed. These conditions are specifically developed for effective detection of protein expression in the embryonic tissues of aphids.

Bezelye Afit Embriyolar immün için kritik Koşulların Belirlenmesi: Doku geçirgenliğini arttırarak ve Arka Plan Boyama azaltılması

The pea aphid Acyrthosiphon pisum, with a sequenced genome and abundant phenotypic plasticity, has become an emerging model for genomic and developmental ...

Injecting Gryllus bimaculatus Eggs

Altering gene function in a developing organism is central to different kinds of experiments. While tremendously powerful genetic tools have been developed in traditional model systems, it is difficult to manipulate genes or messenger RNA (mRNA) in most other organisms. At the same time, evolutionary and comparative approaches rely on an exploration of gene function in many different species, necessitating the development and adaptation of techniques for manipulating expression outside currently genetically tractable species. This protocol describes a method for injecting reagents into cricket eggs to assay the effects of a given manipulation on embryonic or larval development. Instructions for how to collect and inject eggs with beveled needles are described. This relatively straightforward technique is flexible and potentially adaptable to other insects. One can gather and inject dozens of eggs in a single experiment, and survival rates for buffer-only injections improve with practice and can be as high as 80%. This technique will support several types of experimental approaches including injection of pharmacological agents, in vitro capped mRNA to express genes of interest, double-stranded RNA (dsRNA) to achieve RNA interference, use of clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) in concert with CRISPR-associated protein 9 (Cas9) reagents for genomic modification, and transposable elements to generate transient or stable transgenic lines.

Injecting Gryllus bimaculatus Eggs

Here we present a protocol to inject cricket eggs, a technique which serves as a foundational method in many experiments in the cricket, including, but not limited to, RNA interference and genomic manipulation.

Enjekte Gryllus bimaculatus Yumurta

Altering gene function in a developing organism is central to different kinds of experiments. While tremendously powerful genetic tools have been ...

Egg Microinjection and Efficient Mating for Genome Editing in the Firebrat Thermobia domestica

The firebrat Thermobia domestica is an ametabolous, wingless species that is suitable for studying the developmental mechanisms of insects that led to their successful evolutionary radiation on the earth. The application of genetic tools such as genome editing is the key to understanding genetic changes that are responsible for evolutionary transitions in an Evo-Devo approach. In this article, we describe our current protocol for generating and maintaining mutant strains of T. domestica. We report a dry injection method, as an alternative to the reported wet injection method, that allows us to obtain stably high survival rates in injected embryos. We also report an optimized environment setting to mate adults and obtain subsequent generations with high efficiency. Our method underlines the importance of taking each species&#8217; unique biology into account for the successful application of genome editing methods to non-traditional model organisms. We predict that these genome editing protocols will help in implementing T. domestica as a laboratory model and to further accelerate the development and application of useful genetic tools in this species.

Egg Microinjection and Efficient Mating for Genome Editing in the Firebrat Thermobia domestica

We provide a detailed protocol for rearing, microinjection of eggs and for efficient mating of the firebrat Thermobia domestica to generate and maintain mutant strains after genome editing.

Firebrat Thermobia domestica'da Genom Düzenleme için Yumurta Mikroenjeksiyon ve Verimli Çiftleşme

The firebrat Thermobia domestica is an ametabolous, wingless species that is suitable for studying the developmental mechanisms of insects that led to ...

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. When selecting sites to deposit their eggs, female flies are capable of ranking the relative attractiveness of their options and choosing the &#34;greater of two goods.&#34; However, most egg-laying preference assays are not practical if one wants to take a systematic genetic screening approach to search for the circuit basis underlying this simple decision-making process, as they are population-based and laborious to set up. To increase the throughput of studying of egg-laying preferences of single females, we developed custom chambers that each can simultaneously assay egg-laying preferences of up to thirty individual flies as well as a protocol that ensures each female has a high egg-laying rate (so that their preference is readily discernable and more convincing). Our approach is simple to execute and produces very consistent results. Additionally, these chambers can be equipped with different attachments to allow video recording the egg-laying animals and to deliver light for optogenetics studies. This article provides the blueprints for fabricating these chambers and the procedure for preparing the flies to be assayed in these chambers.

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

This protocol describes a high throughput assay for testing egg-laying preferences of Drosophila melanogaster at single-animal resolution. This assay provides a simple, efficient, and scalable platform to identify genes and circuit components that control a simple decision-making process.

Yüksek Verimli Testi Bireyin Yumurta Yumurtlayan Tercihler incelemek için<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

Nörobilim

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which enables them to seek out their preferred thermal landscape. To define the temperature preferences of larvae over a defined linear range, we developed an assay using a temperature gradient. To establish a single-directional gradient, two aluminum blocks are connected to independent water baths, each of which controls the temperature of individual blocks. The two blocks set the lower and upper limits of the gradient. The temperature gradient is established by placing an agarose-coated aluminum plate over the two water-controlled blocks so that the plate spans the distance between them. The ends of the aluminum plate that is set on the top of the water blocks defines the minimum and maximum temperatures, and the regions in-between the two blocks form a linear temperature gradient. The gradient assay can be applied to&#160;larvae of different ages and can be used to identify mutants that exhibit phenotypes, such as those with mutations affecting genes encoding TRP channels and opsins, which are required for temperature discrimination.

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Here, we present a protocol to determine the preferred environmental temperature of Drosophila larvae using a continuous thermal gradient.

Drosophila larva termal tercihlerini belirlemek için bir sıcaklık gradyanı tahlil

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, sequester or eliminate damaged proteins to maintain a healthy proteome, thus ensuring cellular proteostasis and preventing further protein damage. Because of redundant functions within the proteostasis network, screening for detectable phenotypes using knockdown or mutations in chaperone-encoding genes in the multicellular organism Caenorhabditis elegans results in the detection of minor or no phenotypes in most cases. We have developed a targeted screening strategy to identify chaperones required for a specific function and thus bridge the gap between phenotype and function. Specifically, we monitor novel chaperone interactions using RNAi synthetic interaction screens, knocking-down chaperone expression, one chaperone at a time, in animals carrying a mutation in a chaperone-encoding gene or over-expressing a chaperone of interest. By disrupting two chaperones that individually present no gross phenotype, we can identify chaperones that aggravate or expose a specific phenotype when both perturbed. We demonstrate that this approach can identify specific sets of chaperones that function together to modulate the folding of a protein or protein complexes associated with a given phenotype.

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

To study chaperone-chaperone and chaperone-substrate interactions, we perform synthetic interaction screens in Caenorhabditis elegans using RNA interference in combination with mild mutations or over-expression of chaperones and monitor tissue-specific protein dysfunction at the organismal level.

Dokuya Özgü Chaperone Etkileşimlerini Taramak için Caenorhabditis elegans'ı Kullanma

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...

Egg Laying Assay: A Method to Quantify the Egg-Laying Behavior of C. elegans

Source: Lee, S. Y. and Kang, K. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/video/60419/measuring-effects-bacteria-chemicals-on-intestinal-permeability">Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of&#160;Caenorhabditis elegans</a>.&#160;J. Vis. Exp. (2017).
C. elegans egg-laying behavior can provide important information in developmental, reproductive, and anatomical studies.&#160; This video introduces the important steps of an egg laying assay and shows a sample experiment in which a drug is tested for reproductive toxicity.

Yumurtlama Deneyi: C. elegans'ın Yumurtlama Davranışını Ölçmek İçin Bir Yöntem

Source: Lee, S. Y. and Kang, K. Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of&#160;Caenorhabditis elegans.&#160;J. Vis. Exp. 
...

Yumurta ret deneyler boyunca fenotipik degradeler kullanarak yumurta tanıma sınırları sondalama

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Dik Görüntüleme

Bir kullanılması Fonksiyonel Klonlama