The research work presented in this manuscript was supported by a grant (HL107319 to Alan Daugherty and HL107326 to Lisa A. Cassis) from the National Institutes of Health of the United States of America. The content in this manuscript is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health. The publication of this manuscript was sponsored by DURECT Corporation.

Etik Beyanı: Fare çalışmaları Kentucky Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (: 2006-0009 IACUC protokol numarası) Üniversitesi onayı ile yapılır. Fareler ketamin (~ 210 mg / kg) ve ksilazin aşırı dozda kokteyl (~ 30 mg / kg) ile sona ermesi de ötenazi. AngII Tutarının Hesaplanması 1. NOT: Bu protokol, 4 erkek LDL reseptörü 4 hafta süreyle AngII (1000 ng / kg / dak) infüzyonu örneğini kullanarak, - / - fareler doymuş yağ bakımından zengin bir diyet ile beslenen. <ol><li> Infüzyon için gerekli AngII miktarını hesaplamadan önce fareler çalışma tartılır. </li><li> Deney için gerekli olan AngII kitle hesaplamak için şablonu (Tablo 1) kullanın. Şablonun adım 4&#39;te &quot;Pompa oranı&quot; olarak pompaların Öğretim belirtilen &quot;Terfi ortalama Rate&quot; kullanın. Manuel 5 ve 6 Adımlar - - şablonda, rekor Adımlar 1. 10 otomatik olarak hesaplanır. <ol><li> Şablonda olarak, varsayalımFareler 4 hafta içinde AngII 1000 ng / kg / dak enfüzyon boyunca vücut ağırlığının 1 g kazanacaktır. NOT: Her fare, fare zorlanma ve diyet gibi birçok değişkene bağlı olacaktır çok farklı vücut ağırlık artışı olabilir. Biz rutin önceki çalışmalardan kendi deneyimlerine dayanarak &quot;0&quot; veya &quot;1 gr&quot; kullanın. </li><li> Her pompa yaklaşık 250 ul gerektirdiğinden her fare için AngII çözümün bir 300 ul toplam hacmi hesaplayın. </li></ol></li></ol> AngII 2. Çözünme <ol><li> -20 ° C&#39;de de AngII şişeleri liyofilize edildi. Açmadan önce oda sıcaklığına AngII şişeleri dengelenmesi. </li><li> Steril plastik bir tüp içerisine hesaplanan AngII kitle (Tablo 1 &#39;de gösterildiği gibi 7,3 mg) tartılır. Not: AngII bir sulu çözelti, cama bağlanmak için güçlü bir afiniteye sahip olduğu başına The Merck Index, çözünme için cam tüpler kullanmayın. </li><li> (1200 mikron steril tuzlu su hesaplanan hacim eklemeLiyofilize AngII, kap içeren plastik bir tüp içerisine l) ve çözelti berrak hale gelinceye kadar inversiyon yolu ile iyice karıştırın. </li><li> Etiket fare numaraları # 1, # 2, # 3 ve kapaklar bireysel steril plastik tüpler üzerine 4. (0,5-1,5 ml). Aşama 1.2 ve Tablo 1 hesaplanan vücut ağırlığına göre her bir fare için bir laminer başlık altında AngII çözeltisi hazırlayın. <ol><li> Örneğin, tüp 1., daha sonra 296,4 ul AngII çözeltisi içine pipet 3.6 ul steril tuzlu ve yavaşça yukarı pipetleme ile iyice karıştırın. </li></ol></li><li> (Steril 4 mi) kapakları plastik borular üzerindeki etiket fare numaraları. Bu adım 3,13 tarif edildiği gibi pompalar kuluçka için kullanılacaktır. </li></ol> 3. Osmotik Pompa Dolum <ol><li> Pompanın ana gövdesine ve akış moderatörü (Şekil 1): iki ayrı bölümden pompaları edinin. Her kutu ayrı ayrı sarılır 10 pompa gövdeleri ve akış moderatörler vardır. Lot numarasını kaydedin. NOT: Her zaman giymekeldiven pompaların dış muhafazasına elinden aktarılan yağlar olumsuz işlevi pompalama etkileyecektir çünkü. İmplantın enfeksiyon riskini önlemek için, steril eldiven, gazlı bez, tüpler, dolum iğne kullanın ve pompalar hazırlamak için tekne tartın. </li><li> Bu kez açıldı saklanan edilemez, çalışma için gerekli olan pompa gövdeleri ve akış moderatörleri sadece numarasını açın. 10&#39;dan fazla pompa gerekiyorsa, farklı lot numaralı pompaları farklı ortalama Dolgu Hacmi ve Pompa Oranı beri pompa lot numaraları, bir çalışmada aynı olduğundan emin olun. </li><li> (Ana gövde ve moderatör akış hem de dahil olmak üzere) her pompanın tartılır ve 4 ondalık basamağa kadar ağırlık not (örneğin, fare no 1,1443 g 1). Şablonda (Tablo 1) &quot;Pompa Ağırlık boş&quot; olarak adlandırılan bu ağırlık, dolu oranını hesaplamak için kullanılır. </li><li> 1 cc steril şırınga pompa dolum iğne takın ve dikkatlice uygun gelen AngII çözümü ile şırınga doldurmaknumaralı plastik tüp. Bu enjektör içine hava çekme önlemek için önemlidir. </li><li> İğne aşağı konumlandırılmış ise şırınga dikkatle tüm hava kabarcıklarını çıkarın. Pompanın içine kabarcıklarının girişini önlemek için bu pozisyonda iğne / şırınga tutun. </li><li> Yavaşça pompa gövdesine doldurma iğne takın. Pompanın içine iğne ucu Advance. Sıkıca pompanın altındaki iğne ucu koymayın. </li><li> AngII çözümü ile pompayı doldurmak için yavaş yavaş şırınga pistonu itin. Pompa içindeki karanlık gölge dolum seviyesini gösterir. Doldurma hacmi Talimatları başına yaklaşık 246 ul. </li><li> Pompayı dolum durdurun ve sıvı boncuk pompa dışarı yükselir dikkatle kısa sürede iğne çıkarılır. </li><li> Hiçbir boşluk akış moderatör başkanı ve pompa gövdesinin üst (Şekil 1) arasında görülen kadar pompa gövdesinin üstündeki delikten pompanın içine akış moderatör yerleştirin. </li><li> Moderat yerleştirilmesiveya pompa vücuda akış moderatör açılması bazı sıvı sızıntı yol açar. Dikkatle moderatörler yerleştirilmesi sırasında sızan olabilir tüm ekstra sıvıyı kurulayın. </li><li> Dolu pompa tartılır. Şablonda &quot;Dolu Pompa Ağırlık&quot; altında kilo kaydedin. </li><li> Dolum Oranı (%) = (&quot;dolu&quot; Pompa Ağırlık - &quot;boş&quot;) hesaplayın 1000 / hacim x 100 doldurmak demek x. <ol><li> Oranı doldurma eşit veya% 100 daha fazla olmalıdır, Tablo 1. İdeal gösterildiği gibi Oranı Dolum hesaplayın. Doldurma oranı ise, dolum pompası &lt;% 95 (hava kabarcıkları pompa mevcut olabilir karıştığı). </li></ol></li><li> Moderatör kafası yukarı bakacak şekilde etiketlenmiş 4 ml tüp (Adım 2.5) doldurulur pompayı yerleştirin. Pompayı kapatmak için steril serum fizyolojik yeterli hacim ekleyin. Takılıncaya kadar tuzlu su tüp içinde pompa tutun. </li><li> 37 ºC inkübatör Yeri tüpleri. Inkübe kısmi astar izin ve sonra farelere implante O / N (en az 12 saat) pompalar. PompaAngII of ing fareler cerrahi öncesi AngII infüzyon sırasında ortaya çıkan herhangi bir potansiyel stres geri verir implantasyon sonrası yaklaşık 24 saat, başlar. </li></ol> Pompa İmplantasyonu 4. Hazırlık <ol><li> Otoklav (yerçekimi modu, kuru döngüsü, 15 dk) gazlı bez, pamuk bezlerden ve makas, hemostat, forseps, zımba dahil cerrahi aletler ve zımba en az 1 gün ameliyattan önce. </li><li> Bir prosedür odasında izofluran kullanarak anestezi buharlaştırıcı hazırlar. Laminer akış kaputu steril örtüler açın ve izofluran anestezisi için burun konisi yerleştirin. Laminar kaput betadin,% 70 etanol, steril su, boncuk sterilizatör, antiseptik ovucusu, bezlerden, gazlı bez ve dolu pompaları yerleştirin. </li><li> Don maske ve önlük, daha sonra temiz ellerle laminar kaput içinde bir dış örtü açın. Steril eldiven giyin ve steril iç paketini açın. </li></ol> Pompa İmplantasyonu 5. Cerrahi Prosedür <ol><li> Bir indüksiyon cham yerleştirin fare% 2 - 1.5 arasında bir akış hızında izofluran akışı ile ber. Yatma sonra 3 dakika - ek 2 için fare izleyin. Sol veya sağ omzunun üzerinden, bir çeyrek boyutu hakkında bir alan tıraş. </li><li> Izofluran çıkışı (Şekil 2A) bağlı bir koni ile aynı hizada olan burun, laminar kaput fare yerleştirin. Cerrahın dominant elin doğru farenin kafasını yerleştirin. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için farenin gözleri veteriner merhem kullanın. Fare ameliyat öncesi ağrı uyarısına yanıt olduğundan emin olun. Örneğin, pedal tepkisi ağrısı için iyi bir göstergedir. </li><li> Sürüntü ve% 70 etanol ile üç mendil ardından betadin traş bölgeyi silin. Don veya steril eldiven değiştirmek. </li><li> Ön bacak, omuz bıçak üzerinde kulağın arkasında ~ 1 cm&#39;lik kesi yapmak için bir cerrahi neşter kullanın. Bu kesi kuyruk dik olmalıdır. Sadece deri değil altta yatan dokuları kesmek için dikkatli olun. </li><li> Tut forcBir yandan eps kesi açın ve bir hemostat (Şekil 2B) kullanılarak derinin altında cilt altı tüneli yapmak için diğer elinizi kullanın. </li><li> Kuyruk doğru hemostat ucu Advance ve pompa için bir cep oluşturmak. Bu dikkatle bir kese açmak için deri altına hemostat çeneleri açarak gerçekleştirilir. Kesiden hemostat çekin. </li><li> Fare (Şekil 2C) arkasına yerleştirilmiş moderatör kafa ile kesi içine pompayı yerleştirin. Yavaşça cebine tamamen pompayı itin. Hiçbir gerginlik ya da derinin gerilmesi ile yarayı kapatmak için yeterli boş alan olmalıdır. </li><li> Bir pompa takıldıktan sonra, sıkı bir şekilde, kenarları karşılamak düzleştime, kesi her iki tarafı da tutam (Şekil 2D) kapatmak için 1 ya da 2, yara klipsleri yerleştirin. Yaranın tam kapanma olmasını sağlamak için Kesi sitesini inceleyin ve pompa sitesinde doğrudan basmak olmadığını. </li><li> Topikal lidokain krem ​​sürünBurun konisi temiz bir pamuk swab.Remove fare ile (% 4 ağırlık / ağırlık) ve bilinci yerine kadar bir ısıtma pedi üzerine yerleştirin. Kurtardıktan sonra, fare kafesine geri döner. </li><li> Fareler arasında 10 saniye boyunca bir kordon sterilize etme birimi içine cerrahi aletleri yerleştirin. Araçlar kullanılmadan önce soğumasını bekleyin. Fareler arasında antiseptik sıvı ile temizleyin eldivenler. Tam iyileşme sağlanana kadar tüm fareler izleyin. </li><li> Yakından ameliyat sonrası fareler izleyin. Fare sıkıntı, veya dehidrasyon kilo kaybı belirtileri gösteriyorsa - (0.3 ml 0.2) subkütan steril serum fizyolojik bir bolus enjekte edilir. Ilk 10 gün içinde en az günde iki kez fareler gözlemleyin ve daha sonra en az bir kez her gün. Herhangi fareler AngII infüzyon sırasında ölürseniz hemen nekropsi gerçekleştirin. Ameliyattan sonra 14 gün - 7 arası yara klipleri çıkarın. </li></ol> 6. Hasat, Tespit, Temizleme ve aortalarının Görüntüleme <ol><li> Ope kesti, ventral fare toraks ve batın boşluklar açmak kesmekn sağ atrium, aort kan kaldırmak için kalbin sol ventrikül ile tuzlu su ile serpmek ve aort 27 hasat. </li><li> 48 saat 27-24 süreyle% 4&#39;lük paraformaldehit veya% 10 nötr tamponlu formalin içinde en az 3 ml içeren plastik tüplere hasat aorta yerleştirin. </li><li> Dikkatlice adventisyal dokuları çıkarın. Iğnelerle siyah mum pin aorta. Aynı büyütme ile aort görüntüler elde. Şekil 3 &#39;de gösterildiği gibi, kalibrasyon her görüntüde bir cetvel içerir. </li></ol> Aorta 7. Tu yüz Görüntüleme <ol><li> Arkus aorta dış ve iç eğrilik uzunlamasına açık aort kesin ve innominate, sol karotis arter ve sol subklavyen arter dahil olmak üzere açık büyük dalları kesmek. Dış adventisyal siyah mum bitişik döşeme düz pim aorta. </li><li> Aynı büyütmede aortun intimal yüzeyinin yüz resmi tr edinin. Gösterisi olarak, kalibrasyon için her görüntüde bir cetvel ekleyinŞekil 4 n. </li></ol>

<ol><li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> J Surg Res. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+angiotensin+II+infusion+promotes+atherogenesis+in+low+density+lipoprotein+receptor+-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+NY+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Chronic angiotensin II infusion promotes atherogenesis in low density lipoprotein receptor -/- mice.</a> Ann NY Acad Sci. 892 (1), 108-118 (1999).</li>
<li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li>
<li>Deng, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urokinase-type+plasminogen+activator+plays+a+critical+role+in+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Urokinase-type plasminogen activator plays a critical role in angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm.</a> Circ Res. 92 (5), 510-517 (2003).</li>
<li>King, V. L., Trivedi, D., Gitlin, J. M., Loftin, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+cyclooxygenase-2+inhibition+with+celecoxib+decreases+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Selective cyclooxygenase-2 inhibition with celecoxib decreases angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26 (5), 1137-1143 (2006).</li>
<li>Uchida, H. A., Poduri, A., Subramanian, V., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urokinase-type+plasminogen+activator+deficiency+in+bone+marrow-derived+cells+augments+rupture+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Urokinase-type plasminogen activator deficiency in bone marrow-derived cells augments rupture of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (12), 2845-2852 (2011).</li>
<li>Wang, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+increases+urokinase-type+plasminogen+activator+expression+and+induces+aneurysm+in+the+abdominal+aorta+of+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II increases urokinase-type plasminogen activator expression and induces aneurysm in the abdominal aorta of apolipoprotein E-deficient mice.</a> Am J Pathol. 159 (4), 1455-1464 (2001).</li>
<li>Bruemmer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II-accelerated+atherosclerosis+and+aneurysm+formation+is+attenuated+in+osteopontin-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II-accelerated atherosclerosis and aneurysm formation is attenuated in osteopontin-deficient mice.</a> J Clin Invest. 112 (9), 1318-1331 (2003).</li>
<li>Gavrila, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+E+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+angiotensin+II-infused+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Vitamin E inhibits abdominal aortic aneurysm formation in angiotensin II-infused apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (8), 1671-1677 (2005).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE+actions+on+CD4%2B+T+cells%2C+mast+cells%2C+and+macrophages+participate+in+the+pathogenesis+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">IgE actions on CD4+ T cells, mast cells, and macrophages participate in the pathogenesis of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> EMBO Mol Med. 6 (7), 952-969 (2014).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li>
<li>Usui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammasome+activation+by+mitochondrial+oxidative+stress+in+macrophages+leads+to+the+development+of+angiotensin+II-induced+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammasome activation by mitochondrial oxidative stress in macrophages leads to the development of angiotensin II-induced aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 127-136 (2015).</li>
<li>Mellak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+mobilizes+spleen+monocytes+to+promote+the+development+of+abdominal+aortic+aneurysm+in+apoe-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II mobilizes spleen monocytes to promote the development of abdominal aortic aneurysm in apoe-/- mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 378-388 (2015).</li>
<li>Krishna, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+antagonist+of+thrombospondin-1+promotes+abdominal+aortic+aneurysm+progression+in+the+angiotensin+II-infused+apolipoprotein-E-deficient+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Peptide antagonist of thrombospondin-1 promotes abdominal aortic aneurysm progression in the angiotensin II-infused apolipoprotein-E-deficient mouse.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 389-398 (2015).</li>
<li>Norman, P. E., Curci, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+effects+of+tobacco+smoke+on+the+pathogenesis+of+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Understanding the effects of tobacco smoke on the pathogenesis of aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1473-1477 (2013).</li>
<li>Daugherty, A., Powell, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+highlights+of+ATVB%3A+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Recent highlights of ATVB: aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34 (4), 691-694 (2014).</li>
<li>Liu, J., Daugherty, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+and+abdominal+aortic+aneurysms%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Design%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II and abdominal aortic aneurysms: an update.</a> Curr Pharm Design. , (2015).</li>
<li>Rateri, D. L., Howatt, D. A., Moorleghen, J. J., Charnigo, R., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+infusion+of+angiotensin+II+in+apoE%28-%2F-%29+mice+promotes+macrophage+recruitment+with+continued+expansion+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prolonged infusion of angiotensin II in apoE(-/-) mice promotes macrophage recruitment with continued expansion of abdominal aortic aneurysm.</a> Am J Pathol. 179 (3), 1542-1548 (2011).</li>
<li>Saraff, K., Babamusta, F., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortic+dissection+precedes+formation+of+aneurysms+and+atherosclerosis+in+angiotensin+II-infused%2C+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Aortic dissection precedes formation of aneurysms and atherosclerosis in angiotensin II-infused, apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (9), 1621-1626 (2003).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+pathologies+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Zhejiang+Univ+Sci+B%22%5BJournal%5D)">Complex pathologies of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 12 (8), 624-628 (2011).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D. L., Charo, I. F., Owens, A. P., Howatt, D. A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+infusion+promotes+ascending+aortic+aneurysms%3A+attenuation+by+CCR2+deficiency+in+apoE-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II infusion promotes ascending aortic aneurysms: attenuation by CCR2 deficiency in apoE-/- mice.</a> Clin Sci (Lond). 118 (11), 681-689 (2010).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell-specific+deficiency+of+Ang+II+type+1a+receptors+attenuates+Ang+II-induced+ascending+aortic+aneurysms+in+LDL+receptor-%2F-+mice%29%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell-specific deficiency of Ang II type 1a receptors attenuates Ang II-induced ascending aortic aneurysms in LDL receptor-/- mice).</a> Circ Res. 108 (5), 574-581 (2011).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+endothelial+or+smooth+muscle+cell-specific+angiotensin+II+type+1a+receptors+does+not+influence+aortic+aneurysms+or+atherosclerosis+in+LDL+receptor+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Depletion of endothelial or smooth muscle cell-specific angiotensin II type 1a receptors does not influence aortic aneurysms or atherosclerosis in LDL receptor deficient mice.</a> PLoS One. 7 (12), 10-1371 (2012).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+induces+region-specific+medial+disruption+during+evolution+of+ascending+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II induces region-specific medial disruption during evolution of ascending aortic aneurysms.</a> Am J Pathol. 184 (9), 2586-2595 (2014).</li>
<li>Davis, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+cell+deletion+of+low-density+lipoprotein+receptor-related+protein+1+augments+angiotensin+II-induced+superior+mesenteric+arterial+and+ascending+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle cell deletion of low-density lipoprotein receptor-related protein 1 augments angiotensin II-induced superior mesenteric arterial and ascending aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 155-162 (2015).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+experimental+designs+for+atherosclerosis+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.</a> Methods. 36 (2), 129-138 (2005).</li>
<li>Henriques, T. A., Huang, J., D'Souza, S. S., Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orchidectomy%2C+but+not+ovariectomy%2C+regulates+angiotensin+II-induced+vascular+diseases+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Orchidectomy, but not ovariectomy, regulates angiotensin II-induced vascular diseases in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Endocrinology. 145 (8), 3866-3872 (2004).</li>
<li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonism+of+AT2+receptors+augments+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Antagonism of AT2 receptors augments angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms and atherosclerosis.</a> Br J Pharmacol. 134 (4), 865-870 (2001).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiency+of+receptor-associated+protein+attenuates+angiotensin+II-induced+atherosclerosis+in+hypercholesterolemic+mice+without+influencing+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Deficiency of receptor-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms.</a> Atherosclerosis. 220 (2), 375-380 (2011).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D., Lu, H., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording%2C+a+tail-cuff+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> J Vis Exp. (27), e1291(2009).</li>
</ol>

Bu makalenin yayınlanması Alzet ™ tarafından desteklenmektedir.

AngII subkutan teslim ozmotik pompalar farelerde aort anevrizması uyarılması için rutin bir yaklaşımdır. Birçok laboratuvarlarda elde edilen verilere dayanarak, bu AAAS 3,4 ve farelerde taas 22-26 hem çalışmak için güvenilir ve tekrarlanabilir bir yöntem olduğunu tutarlı bulgular olmuştur. Bu nedenle, bu fare modeli, insan aort anevrizması çeşitli özellikler özetlediği ve bu yıkıcı hastalıklar içine mekanistik anlayışlar sağlayan bir modeli olarak kabul edilir. Yaşlanma insanlarda AAA için bir risk faktörü olduğu da, sistematik olarak farelerde AngII kaynaklı AAA için çalışılmamıştır. 48 hafta 4,5,7 - Ancak, insidans ve AngII kaynaklı AAA şiddeti 8 yaşındayken farelerde benzer görünür. TAA oluşumunda belirgin yaşa bağlı farklılıklar gösterir yoktu 24 hafta 22-26, - Halen 8 yaşındayken farelerde AngII kaynaklı taas rapor sadece bir kaç çalışma vardır. Dişi fareler AngII 4,28 ile aşılanmış erkek farelere göre AAA çok daha düşük bir oranda bulunur. Bu AngII kaynaklı AAA sıklığı sırasıyla% 30&#39;dan daha az karşılık% 50&#39;den fazla olduğu normo-hiperkolesterolemik farelerde daha hiper çok daha yüksek olduğunu fazlalaştı. AngII infüzyonu sırasında hem normo ve hiperkolesterolemik farelerde - (% 30 yaklaşık 10) Ayrıca, aort rüptürü sıktır. 1000 ng / kg bir oranda AngII infüzyonu / dakika LDL reseptörü gibi hiperkolesterolemik fareler içine - / - fareler Batı diyet ya da apoliprotein (apoE) beslenen - / - fareler normal ya da Batı diyet ile beslenen, AAA maksimal etkiye sahiptir geliştirme 3,4,29. Bu infüzyon hızı Hiperkolesterolemik farelerde ilgi bir geni manipüle AAAS azaltmak için beklenen bir çalışma için en uygunudur. Hiperkolesterolemik farelerde bir manipülasyon AAAS artırmak için beklenen ise, 500 ng / kg / dakika veya 30 altında bir oranda AngII demlenmeye önerilir. AAA aksine, herhangi bir demo oradaerkek cinsiyet veya hiperkolesterolemi ve AngII kaynaklı taas 25 arasında nstrated ilişki. Ilgi konusu bir gen manipülasyonu TAA&#39;lar artırmak için beklenen, ancak, benzer şekilde AAA için biz AngII enfüzyon için 1000 ng / kg / dak daha düşük bir infüzyon hızı önerilir. Bu AngII kaynaklı aort anevrizmalarının bu insidans ve şiddeti bireysel farelerin arasında ve çalışmalar arasında farklılık bilmek de önemlidir. Fareler aort anevrizması geliştirmek yoksa, potansiyel bir ihtimal AngII başarıyla farelere teslim edilmemiş olabilir olmasıdır. AngII yüksek bir infüzyon hızının geçerli olabilmesi için, örneğin, 1000 ng / kg / dakika, kan basıncı ölçümü invaziv olmayan bir kuyruk ağzı yöntemi 31 kullanmadan önce ve AngII infüzyonla yapılması tavsiye edilmektedir. 1000 ng / kg bir oranda AngII infüzyon / dakika farelerinde sistolik kan basıncı artar. Ayrıca, plazma renin konsantrasyonları AngII r üzerinde olumsuz geribildirim beri AngII infüzyon sırasında veya fesih ölçülen olabilirenin salgı. Bu nedenle, AngII infüzyon plazma renin konsantrasyonlarında azalmalar yol açar. AngII ile aşılanmış bir fare hiçbir belirgin aort patolojileri, kan basıncı hiçbir artış ve plazma renin konsantrasyonuna hiçbir azalma varsa, AngII implante osmotik mini pompa sayesinde verimli bir şekilde teslim edilmediğini işaret eder. Biz çalışmamızda bu fareyi çıkarmadan öneriyoruz. Bazı fareler artmış sistolik kan baskılara rağmen aort anevrizması geliştirmek ve plazma renin konsantrasyonlarını azalma olmadığını dikkat etmek de önemlidir. Bu fareler kalmalıdır. Özet olarak, AngII infüzyon farelerde aort anevrizması uyarılması için ozmotik pompalar kullanılarak deri altından implantasyonu ile elde edilir. Bu yöntem, AAAS ve TAA&#39;lar hem incelemek için kullanılır belirlenen süreler için tanımlanmış bir oranda sürekli olarak AngII sunar.

Aort anevrizmaları ölüme yol açan genellikle rüptür portends ve aort kalıcı luminal genişleme gösterirler. Bu hastalık sırasıyla Abdominal aort anevrizmalarının (AAAs) ve torakal aort anevrizmalarının (TAA&#39;lar) olarak adlandırılır abdominal ve torakal aort bölgelerde, hem de oluşur. Nedeniyle moleküler mekanizmaları ve patofizyolojik süreçlerin eksik anlayış, aort anevrizmalarının iki tip genişleme veya delinmesine engel olabilir kanıtlanmış tıbbi tedavi yoktur. Hasta örneklerini edinme ve AAA mekanizmalarının tanımlanması odaklanarak, doğrudan insanlarda araştırma deneyleri yapmak zor olduğundan sık sık hayvan modellerinde yola çıkılarak olmuştur. Yaygın olarak kullanılan bir hayvan modeli, farelere anjiyotensin II (AngII) subkutan infüzyondur. Bu tür intra-aortik elastaz perfüzyon veya laparotomi 1,2 gerektiren kalsiyum klorür peri-aort uygulama, bu metho olarak farelerde, AAAS başlatılması için, diğer cerrahi yöntemlere göred vücut boşluğuna giriş gerektiren ve minimal cerrahi uzmanlık gerektiren 3,4 vermez. AAAS indüklemek için ozmotik pompalar aracılığıyla AngII deri altından infüzyon başlangıçta düşük yoğunluk lipoprotein (LDL) reseptörünün bildirilmiştir - / - fareler apoE daha sonra bir doymuş yağ bakımından zengin bir diyet 3 beslenen ve - / - fareler normal laboratuar diyetiyle 4 beslenir. Pek çok yeni çalışma AngII normolipidemik farelerde 5-7 AAAS indüklediğini göstermiştir. Beslerken AngII yaklaşımı AAAS neden ve bu model insan AAA gözlenen birçok özellik özetlediği bu yana moleküler mekanizmaları yanı sıra (örneğin, 5-15) potansiyel tedavi stratejileri geliştirilmesini araştırmak için uygulanmıştır. Örneğin, sigara, yaşlanma ve erkek cinsiyet gibi insan AAA risk faktörleri de farelerde 16,17 yılında AngII kaynaklı AAAS çoğaltmak. İnsanlarda AAA&#39;ların ile hiperkolesterolemi dernek açıklama gerektirir. Ancak, olmak vartutarlı en hiperkolesterolemi farelerde 18 AAAS AngII kaynaklı yükselmeye yol açtığını ortaya. Farelerde AngII kaynaklı AAA patolojileri ölçüde heterojen ve bunun sonucunda makrofaj infiltrasyonu, kolajen degradasyonu, trombotik oluşumu ve çözünürlük ve neovaskülarizasyon 19-21 ile karakterize edilir. İnsanlarda en sık AAA infrarenal aort konumu tersine, farelerde AAAs suprarenal aort bölgesinde meydana AngII kaynaklı. AngII kaynaklı AAA başka yerde özelliği transmural tromboz yol açan, transmural medial molası veriliyor. İnsanlarda AAA patolojik gelişim münhasıran nedeniyle erken evrelerde gelen anevrizmal dokuların eksikliği çalışılmamıştır çünkü transmural elastin kopma insanlarda meydana belirsizdir. Farelere AngII infüzyon da ağırlıklı olarak en yaygın bölge insanlarda taas için çıkan aorta ile sınırlıdır torakal aort bölgenin derin genişlemesine yol açar <s&gt; 19,22-26 kadar. AngII kaynaklı AAA benzer TAA&#39;lar insan taas 25 birçok özellik özetlemek AngII infüzyon sırasında uyarılan. Bununla birlikte, AngII kaynaklı AAA aksine, AngII kaynaklı TAA&#39;lar hiperkolesterolemi ile bağlantılı değildir ve cinsiyet farkları yoktur. Farelere deri altı AngII infüzyon genel amacı patolojik özellikleri ve AAA ve taas moleküler mekanizmaları incelemektir.

<table><tbody><tr><td>Angiotensin II</td><td>Bachem</td><td>H-1705</td><td>compound used to induce aortic aneurysms</td></tr><tr><td>Alzet Osmotic Pumps</td><td>DURECT Corporation</td><td>Alzet Model 2004</td><td>feasible for 28-day infusion in mice weighed &gt; 20 g</td></tr><tr><td>Saturated fat-enriched diet</td><td>Harlan Teklad</td><td>TD.88137</td><td>42% calories/calories to stimulate hypercholesterolemia in LDL receptor -/- mice</td></tr></tbody></table>

subcutaneous angiotensin ii infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals. This article introduces a standard protocol used to induce aortic aneurysms via subcutaneous infusion of angiotensin II (AngII) from implanted osmotic pumps. This protocol includes calculation of AngII amount and dissolution, osmotic pump filling, implantation of osmotic pumps subcutaneously, observation after pump implantation, and harvest of aortas to visualize aortic aneurysms in mice. Subcutaneous infusion of AngII through osmotic pumps following this protocol is a reliable and reproducible technique to induce both abdominal and thoracic aortic aneurysms in mice. Infusion durations range from a few days to several months based on the purpose of the study. AngII 1,000 ng/kg/min is sufficient to provide maximal effects on abdominal aortic aneurysmal formation in male hypercholesterolemic mouse models such as apolipoprotein E deficient or low-density lipoprotein receptor deficient mice. Incidence of abdominal aortic aneurysms induced by AngII infusion via osmotic pumps is 5 - 10 times lower in female hypercholesterolemic mice and also lower in both genders of normocholesterolemic mice. In contrast, AngII-induced thoracic aortic aneurysms in mice are not hypercholesterolemia or gender-dependent. Importantly, multiple features of this mouse model recapitulate those of human aortic aneurysms.

4 erkek LDL reseptörü - / - Protokol bölümünde açıklanan farenin AngII infüzyonu 4 hafta sonra kurban edilmiştir. Aort, hasat temizlenmiş ve aort dilatas- görselleştirmek için görüntülenmiştir. (Şekil 3A AAAs), artan bölgenin genişleme (TAA&#39;lar Şekil 3B) veya her iki bölgenin genişleme (AAA ve TAA&#39;lar hem varlığı, Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, aort böbreküstü bölgenin genişleme dahil olmak üzere birçok farklı özelliklere sahip Şekil 3C), morfoloji ise tek fare) Şekil 3D (fena halde normaldi. Şekil 3A&#39;da kırmızı çizgi ile gösterildiği gibi abdominal aorta dilatasyonu, böbrek üstü bölgede ex vivo maksimum genişliği ölçülerek belirlenir. Şekil 4 &#39;de gösterildiği gibi aort dilatasyonu artan ölçmek için, aort kesilerek açılır ve tutturulmuş edildi. Intimal yüzey alanı th çevrili çıkan aort bölgesinde (alanında ölçülmüştürŞekil 4A) e kırmızı çizgileri taas ölçmek için. Cetvel iki Şekiller 3 ve 4 &#39;de gösterildiği gibi, ölçümleri standardize etmek için her resim dahil edilmiştir. <img alt="figür 1" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig1.jpg" /> . Bir ana gövde ve bir akış moderatör: doldurulmuş osmotik pompa Şekil 1. Temsilcisi görüntü Her pompa iki ayrı bölümden oluşmaktadır. AngII Pompa gövdesini doldurduktan sonra, akış moderatör pompası mühür eklenir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53191/53191fig2.jpg" /> Pompa implantasyon cerrahi Şekil 2. İşlem (A) Fare izofluran ve oksijen salan sürekli olarak, bir burun hunisi olan bir laminer başlık yerleştirilir.; (B) düz bir hemostat subkutan tünel yapmak için cilt kesisi içine yerleştirilir; (C) Pompa sokulur<html> cilt kesisi nazikçe; (D) cilt kesi pompa yerleştirilmesinden sonra zımbalanır. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53191/53191fig3.jpg" /> Ile aşılanmış farelerden alınan Şekil 3. Aort görüntü (ex vivo) AngII AngII 1000 ng / kg / dak bir erkek LDL reseptörü infüze edildi -. / - 28 gün süre ile farelerin. (A) AAAs trombozu eşliğinde; Kırmızı çizgi (2.05 mm) böbreküstü bölgede maksimal aort genişliği ölçüsünü gösterir. Fena halde normal bir abdominal aort ile aort dilatasyon (TAA) Artan (B); (C) Artan ve böbreküstü aort bölgelerinde (TAA&#39;lar ve AAAs) hem de derin dilatasyon; (D) artan veya böbrek üstü aort bölge ya hiçbir belirgin dilatasyon ile fena halde normal bir aort. 4.jpg &quot;/&gt; Şekil AngII AngII 1000 ng / kg / dk erkek LDL reseptörü infüze edildi ile aşılanmış farelerin torakal aort bölgelerin 4. Tu yüz görüntüleri - 28 gün boyunca farelerin -. /. Kırmızı çizgi ile belirtilen yüzey alanı aortik arkın kısmı dahil asendan aort bölgeyi temsil eder. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 1 </td><td colspan="2"> Doz gerekli </td><td></td><td> 1000 </td><td colspan="2"> ng / kg / dakika </td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td colspan="3"> Vücut ağırlığını (büyük fare) Başlangıç </td><td> 24.8 </td><td> g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td colspan="3"> Toplam tahmini vücut ağırlık kazancı </td><td> 1 </td><td> g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 </td><td> Pompalama hızı </td><td></td><td></td><td> 0.25 </td><td> ul / saat </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td colspan="2"> NuFarelerin mber </td><td></td><td> 4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td colspan="2"> Hayvan için doz saatte </td><td></td><td> 1518 </td><td> ng </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> Kons gerekli </td><td></td><td></td><td> 6072 </td><td> ng / | il </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td colspan="2"> 300 ul çözüm için </td><td></td><td> 1.82 </td><td colspan="2"> mg / 300 ul </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"> ÇÖZÜM GEREKLİ </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td colspan="2"> Toplam AngII (mg) </td><td></td><td> 7.3 </td><td> mg </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 </td><td colspan="2"> Tuzlu su içinde çözülmüş ve# 160; </td><td></td><td> 1200 </td><td> ul </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mouse </td><td> Vücut ağırlığı </td><td> Seyreltme faktörü </td><td colspan="2"> Hacim (ul) </td><td colspan="2"> Pompa Ağırlık (g) </td><td> Dolgulu Oran </td></tr><tr><td> # </td><td> (g) </td><td></td><td> AngII </td><td> Tuzlu </td><td> Boş </td><td> Dolu </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296,4 </td><td> 3.6 </td><td> 1,1443 </td><td> 1,3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278,2 </td><td> 21.8 </td><td> 1,1677 </td><td> 1,4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263,7 </td><td> 36.3 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="7"> Seyreltme faktörü = en büyük fare fare / vücut ağırlığı, vücut ağırlığı </td><td></td></tr></tbody></table><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Mouse </td><td> Vücut ağırlığı </td><td> Seyreltme faktörü </td><td colspan="2"> Hacim (ul) </td><td colspan="2"> Pompa Ağırlık (g) </td><td> Dolgulu Oran </td></tr><tr><td> # </td><td> (g) </td><td></td><td> AngII </td><td> Tuzlu </td><td> Boş </td><td> Dolu </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296,4 </td><td> 3.6 </td><td> 1,1443 </td><td> 1,3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278,2 </td><td> 21.8 </td><td> 1,1677 </td><td> 1,4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263,7 </td><td> 36.3 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: osmotik pompalar aracılığıyla 28 günlük infüzyon için hesaplama.

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

Ozmotik pompalar deri altından implantasyonu bileşiklerinin uzun süreli ve tutarlı bir teslimat için uygun bir yaklaşım sağlar. Bu yaklaşım, farelerde abdominal ve torakal aort anevrizması, hem incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır.

Ozmotik kullanarak Subkutan Anjiotensin II İnfüzyon Farelerde İndükler Aort anevrizmaları Pompalar

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals.  This article introduces a standard protocol used to induce aortic ...

subcutaneous-angiotensin-ii-infusion-using-osmotic-pumps-induces

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

37.2K Görüntüleme.  University of Kentucky.  Ozmotik pompalar deri altından implantasyonu bileşiklerinin uzun süreli ve tutarlı bir teslimat için uygun bir yaklaşım sağlar. Bu yaklaşım, farelerde abdominal ve torakal aort anevrizması, hem incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. 

Video: Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

Visualizing Leukocyte Rolling and Adhesion in Angiotensin II-Infused Mice: Techniques and Pitfalls

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability to role and adhere to the endothelial layer. Visualization of circulating cells by injection of fluorescent dyes or fluorophore-coupled antibodies is commonly used. Alternatively, fluorescent reporter mice can be used. Interactions of leukocytes, in particular lysozyme M+ (LysM+) monocytes, with the vessel wall play pivotal roles in promoting vascular dysfunction and arterial hypertension. We here present the technique to visualize and quantify leukocyte rolling and adhesion in carotid arteries in angiotensin II (AngII)-induced hypertension in mice by IVM.
The implantation of a catheter damages the vascular wall and leads to altered blood cell responses. We compared different injection techniques and administration routes to visualize leukocytes in a LysMCre+IRG+ mouse with widespread expression of red fluorescent protein and conditional expression of green fluorescent protein in LysM+ cells. To study LysM+ cell activation, we used AngII infused mice in which rolling and adhesion of leukocytes to the endothelium is increased. We either injected acridine orange using a jugular catheter or directly though the tail vein and compared the amount of rolling and adhering cells. We found that jugular catheter implantation per se increased the number of rolling and adhering LysM+ cells in sham-infused LysMCre+IRG+ mice compared to controls. This activation was augmented in AngII-infused mice. Interestingly, injecting acridine orange directly through the tail vein did not increase LysM+ cell adhesion or rolling in sham-infused mice. We thereby demonstrated the importance of transgenic reporter mice expressing fluorescent proteins to not interfere with in vivo processes during experimentation. Furthermore, tail vein injection of fluorescent tracers might be a possible alternative to jugular catheter injections.

This manuscript describes the use of transgenic reporter mice and different administration routes of fluorescent dyes in angiotensin II-induced hypertension using intravital video microscopy of blood vessels to evaluate the activation of immune cells and their ability to roll and adhere to the endothelium.

Lökosit haddeleme ve yapışma Anjiyotensin II-infüzyon farelerde görselleştirme: teknikleri ve Püf noktalar

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been widely used to measure aortic dimensions in mouse models of aortic aneurysms. Aortic aneurysms are defined as permanent dilations of the aorta, which occur most frequently in the ascending and abdominal regions. Sequential measurements of aortic dimensions by ultrasound are the principal approach for assessing the development and progression of aortic aneurysms in vivo. Although many reported studies used ultrasound imaging to measure aortic diameters as a primary endpoint, there are confounding factors, such as probe position and cardiac cycle, that may impact the accuracy of data acquisition, analysis, and interpretation. The purpose of this protocol is to provide a practical guide on the use of ultrasound to measure the aortic diameter in a reliable and reproducible manner. This protocol introduces the preparation of mice and instruments, the acquisition of appropriate ultrasound images, and data analysis.

Ultrasound imaging has become a common modality to determine the luminal dimensions of thoracic and abdominal aortic aneurysms in mice. This protocol describes the procedure to acquire reliable and reproducible two-dimensional ultrasound images of the ascending and abdominal aorta in mice.

Torasik ve Abdominal aort anevrizması boyutlarını belirlemek farelerde ultrason görüntüleme

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...

Tıp

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. An aneurysm forms as a result of progressive weakening and eventual dilation of the aorta, which can rupture or tear once it reaches a critical diameter. Aneurysms of the descending aorta in the chest, called descending thoracic aortic aneurysms (dTAA), make up a large proportion of aneurysm cases in the United States. Uncontained dTAA rupture is almost universally lethal, and elective repair has a high rate of morbidity and mortality. The purpose of our model is to study dTAA specifically, to elucidate the pathophysiology of dTAA and to search for molecular targets to halt the growth or reduce the size of dTAA. By having a murine model to study thoracic pathology precisely, targeted therapies can be developed to specifically test dTAA. The method is based on the placement of porcine pancreatic elastase (PPE) directly on the outer murine aortic wall after surgical exposure. This creates a destructive and inflammatory reaction, which weakens the aortic wall and allows for aneurysm formation over weeks to months. Though murine models possess limitations, our dTAA model produces robust aneurysms of predictable size. Furthermore, this model can be used to test genetic and pharmaceutical targets which may arrest dTAA growth or prevent rupture. In human patients, interventions such as these could help avoid aneurysm rupture, and difficult surgical intervention.

We describe a surgical protocol to consistently induce robust descending thoracic aortic aneurysms in mice. The procedure involves left thoracotomy, thoracic aorta exposure, and placement of a sponge soaked in porcine pancreatic elastase on the aortic wall.

Topikal Elastaz Indüklenen İndüklenen Torasik Aort Anevrizması Murine Cerrahi Modeli

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Improved Renal Denervation Mitigated Hypertension Induced by Angiotensin II Infusion

The benefits of renal sympathetic denervation (RDN) on blood pressure have been proved in a large number of clinical trials in recent years. However, the regulatory mechanism of RDN on hypertension remains elusive. Thus, it&#39;s essential to establish a simpler RDN model in mice. In this study, osmotic mini pumps filled with Angiotensin II were implanted in 14-week-old C57BL/6 mice. One week after the implantation of the mini-osmotic pump, a modified RDN procedure was performed on bilateral renal arteries of the mice using phenol. Age-sex-matched mice were given saline and served as sham group. Blood pressure was measured at baseline and every week subsequently for 21 days. Then, renal artery, abdominal aorta and heart were collected for histological examination using H&#38;E and Masson staining. In this study, we present a simple, practical, repeatable, and standardized RDN model, which can control hypertension and alleviate cardiac hypertrophy. The technique can denervate peripheral renal sympathetic nerves without renal artery damage. Compared to previous models, the modified RDN facilitates the study of the pathobiology and pathophysiology of hypertension.

Here, we present a protocol for renal sympathetic denervation (RDN) in mice with hypertension induced by Angiotensin II infusion. The procedure is repeatable, convenient and allows to study the regulatory mechanisms of RDN on hypertension and cardiac hypertrophy.

Anjiyotensin II İnfüzyonu ile İndüklenen Geliştirilmiş Renal Denervasyon Azaltılmış Hipertansiyon

The benefits of renal sympathetic denervation (RDN) on blood pressure have been proved in a large number of clinical trials in recent years. However, the ...

Drug Treatment by Central Venous Catheter in a Mouse Model of Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm and Monitoring by 3D Ultrasound

Since pharmaceutical treatment options are lacking in the clinical management of abdominal aortic aneurysm (AAA), animal models, in particular mouse models, are applied to advance the understanding of the disease pathogenesis and to identify potential therapeutic targets. Testing novel drug candidates to block AAA growth in these models generally requires repeated drug administration during the time course of the experiment. Here, we describe a compiled protocol for AAA induction, insertion of an intravenous catheter to facilitate prolonged therapy, and serial AAA monitoring by 3D ultrasound. Aneurysms are induced in apolipoprotein E (ApoE) deficient mice by angiotensin II release over 28 days from osmotic mini-pumps implanted subcutaneously into the mouse back. Subsequently, the surgical procedure for external jugular vein catheterization is conducted to allow for daily intravenous drug treatment or repeated blood sampling via a subcutaneous vascular access button. Despite the two dorsal implants, the monitoring of AAA development is readily facilitated by sequential semi-automated 3D ultrasound analysis, which yields comprehensive information on the expansion of aortic diameter and volume and on aneurysm morphology, as illustrated by experimental examples.

This protocol describes the consecutive implantation of an osmotic pump to induce abdominal aortic aneurysm by angiotensin II release in apolipoprotein E (ApoE) deficient mice and of a vascular access port with a jugular vein catheter for repeated drug treatment. Monitoring of aneurysm development by 3D ultrasound is effectively conducted despite dorsal implants.

Anjiyotensin II İndüklü Abdominal Aort Anevrizmasının Bir Fare Modelinde Santral Venöz Kateter ile İlaç Tedavisi ve 3D Ultrason ile İzleme

Since pharmaceutical treatment options are lacking in the clinical management of abdominal aortic aneurysm (AAA), animal models, in particular mouse ...

<meta charset="utf8"></head><body>Murin abdominal aort anevrizmasının altında yatan moleküler mekanizmaların araştırılması

A Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model by Periadventitial Calcium Chloride and Elastase Infiltration

Abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening disease associated with high mortality rates. It is characterized by the permanent dilation of the abdominal aorta with at least a 50% increase in arterial diameter. Various animal models of AAA have been introduced to mimic the pathophysiological changes and study the underlying mechanisms of AAA. Among these models, the calcium chloride (CaCl2)- and elastase-induced AAA models are commonly used in mice. However, these methods have certain limitations. Traditional intraluminal porcine pancreatic elastase (PPE) perfusion is associated with high technical difficulty and a high rupture rate, while periadventitial administration of PPE yields inconsistent results. In addition, the CaCl2-induced AAA model lacks human AAA features, such as atherothrombosis and aneurysm rupture. Therefore, the combined application of CaCl2 and PPE has been proposed as an approach to enhance success rates and induce greater diameter increases in AAA animal models. This manuscript presents a comprehensive protocol for establishing a mouse AAA model through periaortic infiltration of PPE and CaCl2 in the infrarenal segment of the abdominal aorta. By following this protocol, we can achieve an AAA formation rate of approximately 90% with technical simplicity and reproducibility. Further ultrasound and histological experiments confirm that this model effectively replicates the morphological and pathological changes observed in human AAA.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: Abdominal Aort Anevrizması için Bir Fare Modelinin Geliştirilmesi ve Karakterizasyonu

This manuscript presents a protocol for establishing a mouse abdominal aortic aneurysm model using calcium chloride and elastase, combining the advantages of previous modeling methods. This model can be utilized to investigate the pathophysiological mechanisms underlying abdominal aortic aneurysms.

Periadventitial Kalsiyum Klorür ve Elastaz İnfiltrasyonu ile Bir Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening disease associated with high mortality rates. It is characterized by the permanent dilation of the ...

Surgically Induced Cardiac Volume Overload by Aortic Regurgitation in Mouse

Aortic regurgitation (AR) is a common valvular heart disease that exerts volume overload on the heart and represents a global public health problem. Although mice are widely applied to shed light on the mechanisms of cardiovascular disease, mouse models of AR, especially those induced by surgery, are still paucity. Here, a mouse model of AR was described in detail which is surgically induced by disruption of the aortic valves under high-resolution echocardiography. In accordance with regurgitated blood flow, AR mouse hearts present a distinctive and clinically relevant volume overload phenotype, which is characterized by eccentric hypertrophy and cardiac dysfunction, as evidenced by echocardiographic and invasive hemodynamic evaluation. Our proposal, in a reliable and reproducible manner, provides a practical guide on the establishment and assessment of a mouse model of AR for future studies on molecular mechanisms and therapeutic targets of volume overload cardiomyopathy.

<meta charset="utf8"></head><body>Farede Aort Yetersizliği ile Cerrahi Olarak İndüklenen Kardiyak Hacim Aşırı Yüklenmesi

This protocol presents a practical guide on the surgery for creation of aortic regurgitation (AR) in the mouse. Assessment of the AR mouse by echocardiography and invasive hemodynamic measurement recapitulates its clinically relevant characteristics of volume overload-induced eccentric hypertrophy, suggesting its promising application in the study of cardiac hypertrophy.

Farede Aort Yetersizliği ile Cerrahi Olarak İndüklenen Kardiyak Hacim Aşırı Yüklenmesi

Aortic regurgitation (AR) is a common valvular heart disease that exerts volume overload on the heart and represents a global public health problem. ...

Ozmotik kullanarak Subkutan Anjiotensin II İnfüzyon Farelerde İndükler Aort anevrizmaları Pompalar

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Lökosit haddeleme ve yapışma Anjiyotensin II-infüzyon farelerde görselleştirme: teknikleri ve Püf noktalar

Torasik ve Abdominal aort anevrizması boyutlarını belirlemek farelerde ultrason görüntüleme

Topikal Elastaz Indüklenen İndüklenen Torasik Aort Anevrizması Murine Cerrahi Modeli

Anjiyotensin II İnfüzyonu ile İndüklenen Geliştirilmiş Renal Denervasyon Azaltılmış Hipertansiyon

Anjiyotensin II İndüklü Abdominal Aort Anevrizmasının Bir Fare Modelinde Santral Venöz Kateter ile İlaç Tedavisi ve 3D Ultrason ile İzleme

Periadventitial Kalsiyum Klorür ve Elastaz İnfiltrasyonu ile Bir Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Periadventitial Kalsiyum Klorür ve Elastaz İnfiltrasyonu ile Bir Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Periadventitial Kalsiyum Klorür ve Elastaz İnfiltrasyonu ile Bir Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

Farede Aort Yetersizliği ile Cerrahi Olarak İndüklenen Kardiyak Hacim Aşırı Yüklenmesi

Farede Aort Yetersizliği ile Cerrahi Olarak İndüklenen Kardiyak Hacim Aşırı Yüklenmesi