Name: murine model for non-invasive imaging to detect and monitor ovarian cancer recurrence
Uploaded: 2014-11-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence at JoVE.com

Bu çalışma Programı Cure Sands Aile Vakfı ve Discovery tarafından, NIH hibe RO1CA118678 ve RO1CA127913 tarafından desteklenmiştir.

Yale Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi açıklanan tüm in vivo çalışmalarını onaylamak. Numune toplama hasta rızası ile gerçekleştirilmiştir ve Yale Üniversitesi Tıp Fakültesi İnsan Araştırmaları Komitesi tarafından onaylandı. İnsan Yumurtalık Kanseri Hücrelerinin hazırlanması 1. <ol><li> Hazırlanması önce hücreler, aşağıda tarif edilen rahim içi enjeksiyon için gerekli tüm malzeme hazır ve erişimi kolay olduğundan emin olun. Hazır olduğunda en kısa sürede hücre süspansiyonu enjekte edilir. <ol><li> Kültürde-floresan etiketli kanser hücreleri büyümek. Biz daha önce böyle tümörgenezine, kemoterapi ve tümör onarım 14-19 yüksek kapasite olarak stemness özelliklerini barındırması gösterilen insan CD44 + / MyD88 + over kanseri hücrelerinin, bir F2 nesil kullanın. Bu hücreler, kararlı bir şekilde MCherry floresan ifade etmek için üretilmiştir (F2-MCherry, Şek. 1) lentivirüs polietilenimin elde kullanılarak(PEI) protokolü 20,21. </li><li> Enjeksiyon gününde, tripsinizasyon ile hücrelerin hasat ve fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile bir kez yıkanır. </li><li> Hücre sayısını belirlemek ve 3 x 10 6 hücre / uygun büyüme ortamı 50 ul hücreleri askıya. Yumurtalık kanseri hücreleri için bize% 10 FBS ile RPMI 160 kullanımı. Enjekte hazır olana kadar inkübatör hücreleri tutun ama uzun 15 dakika tutmuyorum. Bu, bir fare enjeksiyon için yeterlidir. </li></ol></li></ol> Atimik çıplak farelerde insan yumurtalık kanser hücrelerinin 2. intra-uterin Enjeksiyon Aşağıdaki yordam, ikinci bir kişiden yardım gerektirdiğini unutmayın. Bu hayatta kalma ameliyat olduğundan Ayrıca, steril cerrahi aletler kullanmayın. Bu hayatta kalma cerrahi işlemdir yaklaşık 10 ila 15 dakika sürer. <ol><li> % 2 izofluran kullanılarak fare anestezisi. 7- ila 8 haftalık atimik çıplak farelere genellikle kullanılır. </li><li> Hayvan Komplet olduğundan emin olunely parmaklarını veya forseps kullanarak ayak pedi kısma anesteziye. Hayvan ameliyatı başlamadan önce ağrı tamamen non-duyarlı olmalıdır. </li><li> Uzakta araştırmacıdan kafa ile steril bir gazlı bez anestezi fare ventral yüzü yukarı yerleştirin. </li><li> Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için bir pamuk uçlu aplikatör ile gözlerinize merhem sürün. </li><li> Hemen izofluran buharlaştırıcı (Şek. 2A) bağlı bir burun konisi sisteminde sokulur. Bu, cerrahi prosedür boyunca anestezi sağlar. </li><li> Sonra cerrahi sitesi üzerinden steril cerrahi örtü koyun sol dezenfekte (veya sağ) iyot ardından karın kullanarak alkol pedleri (Şekil. 2B) yan. </li><li> Kullanımı steril cerrahi makas ve forseps fare (Res. 2C) sol alt kadranda 1-2 cm&#39;lik cilt kesi yapmak. </li><li> Kas kaldırın ve periton ulaşmak için bir kesi yapmak. </li> &lt;li&gt; karın boşluğuna maruz eğik kas ayır. </li><li> Bulun ve sol uterin boynuz (Şekil. 2B) tanımlamak. </li><li> Steril hemostatın kullanarak, boynuz (Şekil. 2E) her iki anterior ve posterior taraftan kelepçe. Sağ fallop tüpünün altında ön kelepçesini ve sağ serviks yukarıda arka kelepçe yerleştirin. </li><li> İkinci kişi, hücre süspansiyonu enjekte var. Boynuz (Şekil. 2F) dik 45 ° açıyla hücreleri içeren iğne, yerleştirin. Çok yavaş uterin boynuzu lümenine hücre süspansiyonu 50 ul enjekte edilir. </li><li> İğneyi çıkarın ve ön kelepçesini. </li><li> Posterior kelepçesini karın boşluğunda uterus boynuzu değiştirin. </li><li> Bir sentetik emilebilir sütür kullanılarak periton kapatın ve bir doku yapıştırıcı kullanılarak cilt kapatın. </li><li> Burun konisi gelen fareyi çıkarın ve kafesine geri koyun. Eğer gerekli ise, bir temizleme sağlamak için yatak takımları değiştirmekAmeliyattan sonra n kafes. Tüm hayvanlar bırakıp gitmeden önce uyanık ve aktif olduğundan emin olun. </li><li> İlk 48 saat sonra ameliyat için içme suyu ve 0.11 mg / ml&#39;de İbuprofen sağlar. Daha sonra, düzenli içme suyu ile değiştirin. <ol><li> Not: atimik çıplak fareler kullanılır ve deri, dikiş yerine doku yapışkan kullanarak kapalı ise, ameliyattan sonra fareler ayırmak gerekli değildir. SCID fareleri, daha agresif ve ayrılabilir gerekebilir. </li></ol></li><li> Yakından bağlı açık yara olası enfeksiyon için kesi sitesini izlemek. </li></ol> Canlı İn Vivo Görüntüleme Erken Evre İçi periton Yumurtalık Kanseri 3. Algılama In vivo görüntüleme canlı intra-peritoneal IP hastalık varlığını belirlemek. Bir Modlu Hayvan Rotasyon Sistemi (MARS) Bu protokolde kullanılır. <ol><li> MI yazılım içinde MARS yakalama yazılımına erişmek. Bu modül sağlargörüntüleme sisteminin yakalama ve analiz yetenekleri yararlanarak iken MARS koordineli denetim ayarlarını yakalamak. Adım 3.4 rotasyon protokolü geliştirmek için önce bir tek bakış görüntüleme kullanarak her yöntemi için ayrı çekim ayarlarını optimize eder. </li><li> Giriş yakalama değerleri önceden belirlenmiş. 550 nm, em: 600 nm filtre yakalama ayar floresan yakalamak için, 10 sn pozlama, 2 x 2 binning kullanın, 2.8, FOV 120 mm, eski f-stop. X-ışını çekimi için, bir 10 sn pozlama kullanmak, 2 x 2 binning, 2.8, FOV 120 mm, 35 kVp, 0.4 mm Al filtre yakalama ayarını f-stop. </li><li> Tek oturum dosyaları olarak adım 3.2 parametreleri kaydedin. </li><li> Sistemi arabirimi edinmekte penceresinden Oluştur / Düzenle Protokoller düğmesini seçerek bir rotasyon sıra protokol oluşturmak. </li><li> Önceden kaydedilmiş bir floresan oturumu dosyayı seçin ve Adım Bir olarak kaydedin. Sonra, gelen X-ışını oturum dosyasını seçin ve Adım iki olarak kaydedin. </li><li> Adım Bir seçeneği seçildiğinde, Set Rotasyon kullanınÖnce Görüntü Yakalama açılır menüden Serisi özelliklerin sorunsuz görünüm için sağlamak için istenen başlangıç ​​açısı, aralık ve artışını ayarlamak için. Özgül değerler -180 derecelik bir başlangıç ​​açısı 375 derece aralığında ve 15 derece kadar bir artış bulunmaktadır. </li><li> Protokolü kaydedin ve MARS başlatmak ve açı artışlarla her birine karşılık gelen step motor pozisyonları eşleştirmek için Bitti düğmesini tıklatın. </li><li> Yazılım protokolü tarafından kullanılmak üzere dönüş belirli bir derece ile hayvan desteği yerleştirilmiş, belirli bir hayvan için ventral, dorsal ve lateral incelemeler hizalamak için aşağıda tarif edildiği gibi nihai bir kalibrasyon yapın. </li><li> 2 L / dakikalık bir akış hızında tıbbi hava ve% 2 izofluran ile bir karışımını kullanarak fare anestezisi. </li><li> Rotator sekmesini getirmek için Edinme menüsü içinden Önizleme düğmesini seçerek uyum başlayın. Multiwavelength ya da X-ra yerine yansıtıcı ışık modalitesini kullanıny modaliteleri süreci hızlandırmak için. </li><li> Yük Fare seçeneğini seçin ve konumlandırma menülerin dizi devam edin. </li><li> Katlanabilir roket ucu konisi ve tubed sonu roket ucu konisi tatilde emin olun ve roket ucu konisi onun kafası eğilimli yönde fareyi yerleştirin. </li><li> Aşağı bakacak şekilde hayvanın ventral tarafı ile 0 derece pozisyonunda kalibrasyon başlayın. Önizleme penceresinde merkezli görünür, böylece hayvan konumlandırmak için rotasyon sistemi üzerinde iki düğmeyi kullanın. </li><li> 90, 90, ve 180 derece pozisyonları ve Bitti düğmesini tıklatın - -180 için istendiğinde, bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Ana edinmekte penceresinden Protokol düğmesini Yürüt tıklayarak önceden kaydedilmiş protokolünü yürütün. Protokolün yürütülmesi sırasında, Güncel Yakalama, Pozlama Süresi ve genel Protokol adım için gerçek zamanlı durum güncellemelerini sağlayan bir durum penceresi gözlemlemek. </li><li> Kullanarak bir film formatında içine tek tek görüntüleri birleştirinRotasyon yazılım. Parlaklık / kontrast, şeffaflığı ayarlamak için, ve floresan sinyali için ekran rengini ayarlamak için Ekran Kontrolleri kullanın. </li><li> Sunum için * .AVI dosyası formatındaki resimlerin nihai diziyi aktarmak. </li></ol> 1. ve 2 nci Yuvarlak Kemoterapi 4. İdaresi <ol><li> MARS tarafından ip tümör tespiti takiben, standart iki boyutlu konumlandırma kullanarak faiz (ROI) ilk tümör yükü bölgeyi belirler. Bu ilk YG belirlendikten sonra, 12 mg / kg paklitaksel ip 4 doz her üç günde bir uygulanması, Bölüm 5&#39;te aşağıda tarif edildiği gibi görüntüleme sistemi içinde yerleştirilmiş bir saydam bir hayvan tepsi üzerinde gerçekleştirilir. Paklitaksel vasıta olarak Cremaphor ile hazır-go formülasyonda Hospira Inc.&#39;den elde edilir. Daha önce, bu tedavi rejimi, araç kontrolü ile karşılaştırıldığında ksenograft modeli karşı kayda değer bir anti-tümör aktivitesine sahip olduğu gösterilmiştir ve tespit t tamamen ortadan kaldırılması indüklerumor yükü 20. Tedavi 20 sona erdikten sonra Fakat, hastalığın doğasına, ip Tümörlerin birkaç gün tekrarlar. </li><li> Standart iki boyutlu konumlandırma kullanarak her 3 günde bir görüntüleme ile tedaviye yanıtın izlenmesi. </li><li> Paklitaksel dördüncü dozdan sonra, (başlangıç ​​ROI% 50 kadar bir artış tam yanıt (İB az 2000), kısmi yanıt (adım 4.1, stabil hastalık elde edilen ilk ROI% 35&#39;e kadar azalma sahip olarak farelerin sınıflandırmak ) veya gözlenen floresan sinyali esasına dayanan bir tedavi (temel YG fazla% 50 artış) ile ilerlemesi. </li><li> Tam yanıt fareler için, her 3 günde bir görüntüleme ile nüks izlemek. Nüks (Adım 4.1 ROI başlangıç ​​ROI =) gözlenir sonra 4.1&#39;de açıklandığı gibi Paklitaksele ikinci turda yeniden başlatmak. </li><li> Kısmi hastalığı, stabil hastalık veya tedavi ile ilerleme olanlar ile farelerde, 3 gün 4. dozdan sonra Paklitaksele ikinci turda yeniden başlatmakPaklitaksele. Benzer şekilde, görüntü bu üç günde. </li></ol> Standart İki boyutlu Konumlandırma Kullanılması Tedavi 5. İzleme Tepki <ol><li> Fareler anestezi 2 L / dakikalık bir akış hızında tıbbi hava ve% 2 izofluran ile bir karışım kullanılarak, görüntülenecek. </li><li> Görüntüleme odasının (Res. 3) içinde şeffaf hayvan tepsiye tek tek nosecones yılında anestezi farelerin başını yerleştirin. </li><li> Giriş floresan için önceden belirlenmiş maruz kalma parametreleri (10 sn pozlama, 2 x 2 binning, FOV 120 mm, eski 2.8 f-stop:, em 550 nm: 600 nm), 2 x 2 binning ve X-ray (20 sn pozlama, 2.8, FOV 120 mm, 35 kVp, 0.4 mm Al filtresi) f-stop. </li><li> Dizisi hem görüntü yakalamak için Açığa tıklayın. </li><li> Görsel denetim ve faiz analiz bölge için Bruker MI yazılımında görüntüleri açın. </li></ol> 6. Görüntü Bindirme ve Analizi Bo için geçerli bir karşılaştırma sağlamakTüm plan ve arka plan görüntüleri benzer süre ders görüntü dizisi sürecinin inci görsel ve kantitatif analizi. <ol><li> Yazılım ön planda görüntü (yani floresan) ve arka plan görüntüleme hem açın ve üst (Res. 4A) de Pencere menüsünden kiremit işlevi seçin. </li><li> Ön görüntüyü işlemek için; üst bar (Res. 4A, kırmızı ok) Görüntü Ekranı sekmesini açın ve sırasıyla 260 ve 5,000 için min / max değerlerini ayarlamak (Res. 4A, mavi ok) Not: Resim Görüntüleme aralık görüntüleri yakalanan floresan sinyal yoğunluğu bağlı olarak çalışmadan çalışmaya farklıdır. Görüntüler tümör kitleleri göstermek, henüz hayvanın otofloresansı arkaplan göstermeyecektir bir min / max ile tezat olmalıdır. </li><li> Soldaki Navigasyon Paneli (Res. 4B, kırmızı ok) Sonraki açık Auto-ROI Tab ve menüden Yeni ROI Set seçin (Şekil. 4C, kırmızı birrrow). 630 gri tonlama düzeyde Eşik algoritmasını kullanmak için ayarları yapın ve en kaydedilir tüm potansiyel ROI (Res. 4C) sağlamak için boyutu Max kısıtlayın kaldırın. Not: Eşik ayarları görüntülerde yakalanan floresan sinyal yoğunluğu bağlı olarak çalışmadan çalışmaya farklılık gösterebilir. Görüntüler henüz tümör kitlelerinin sinyali quantitate hayvanın otofloresansı arka fonda sinyali ölçmek değil eşiklenir. </li><li> Görüntü Display Window içinde Maskesi işlevini seçin. Şimdi eşit değerleri veya 630 gri tonlama düzeyleri eşik değerini aşan sahip piksel karşılık sadece alan görüntülenir. </li><li> Kantitatif sonuçlar üst menü çubuğu ve seçme ekran sekmesi (Şekil. 4D, kırmızı oklar) Analiz sekmesini seçin görüntülemek için. </li><li> Görüntü menüsünde Seri Numarası, Sum, ortalama, ve Alan onay kutularını seçin ve Tamam &#39;ı tıklatın. </li><li> Değerler eski olabilir bu yüzden görüntü kaydetmebirlikte taşıdık kez tüm floresan görüntüler işlenir. </li><li> Sonra, X-ray görüntü vurgulayın ve tekrar üst menü çubuğundan Image Display açın. Fare iskeletin iyi görsel temsilini vermek için dakika, max ve gama değerlerini ayarlayın. Not: niceleme zaman dizisinden her X-ışını görüntü işlenebilir X-ışını görüntü üzerinde gerçekleştirilir yana (örneğin min, maks ve gama değerleri) veri kümesinin en iyi ve en ideal bir numunesi elde etmek için. </li><li> Yine X-ray görüntü ile Overlay onay kutusunu seçin ve menüden (Şekil. 4E) açılan gelen floresan görüntü dosyası adı seçin vurgulanır. </li><li> Yerleştirilmiştir çıkışı ayıklamak için, soldaki Gezinti menüsü (Şekil. 4B, mavi ok) Açıklamalar sekmesini seçin. Floresan yoğunluğu verileri hızlı bir şekilde im tespit edilebilir, böylece herhangi bir ek veri veya metin eklemek ve nihayet şiddeti ölçek çubuğu eklemek için uygun sekmeleri seçinyaş. </li><li> Açıklamalar vurguyu ekran için tüm Açıklamalar sayfasında nesneler ve üst Düzen menüsünden seçin kopyalama ve uygun dosyasına Bindirme görüntü verilerini yapıştırmak (örneğin Word, PowerPoint, ve / veya Photoshop) tamamlandıktan sonra. </li><li> Tekrar adımları 6.1- sırayla floresans ve X-ışını görüntü çiftleri için tekrarlanır 6.11. Onları kapatmadan önce güvenli tüm görüntülere emin olun. </li><li> Son kantitatif için aynı anda tüm floresan görüntüleri açın ve üstündeki Pencere menüsünden Tile seçin. </li><li> Sonraki verilerini görüntülemek için İhracat Tüm Açık Belgeler seçeneğini seçin. Not: Excel programının yokluğunda, sekmesini kaldırın. MI bir sekme ayrılmış metin daha fazla analiz için uygun bir bilgisayara aktarılabilir (yani .txt) dosyası oluşturur. </li></ol>

<ol>
	<li>Cho, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+update:+lessons+from+morphology,+molecules,+and+mice.">Ovarian cancer update: lessons from morphology, molecules, and mice.</a> Archives of pathology &amp; laboratory medicine. 133, 1775-1781 (2009).</li><li>Jong, M., Maina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+humans:+are+they+the+same?--Implications+in+cancer+translational+research.">Of mice and humans: are they the same?--Implications in cancer translational research.</a> Journal of nuclear medicine : official publication, Society of Nuclear Medicine. 51, 501-504 (2010).</li><li>Langdon, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+modeling+of+cancer+pathology+and+studying+tumor+response+to+therapy.">Animal modeling of cancer pathology and studying tumor response to therapy.</a> Current drug targets. 13, 1535-1547 (2012).</li><li>Mullany, L. K., Richards, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minireview:+animal+models+and+mechanisms+of+ovarian+cancer+development.">Minireview: animal models and mechanisms of ovarian cancer development.</a> Endocrinology. 153, 1585-1592 (2012).</li><li>Ricci, F., Broggini, M., Damia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+ovarian+cancer+preclinical+models:+implications+for+a+better+management+of+the+disease.">Revisiting ovarian cancer preclinical models: implications for a better management of the disease.</a> Cancer treatment reviews. 39, 561-568 (2013).</li><li>Pizzonia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodality+animal+rotation+imaging+system+(Mars)+for+in+vivo+detection+of+intraperitoneal+tumors.">Multimodality animal rotation imaging system (Mars) for in vivo detection of intraperitoneal tumors.</a> Am J Reprod Immunol. 67, 84-90 (2012).</li><li>House, C. D., Hernandez, L., Annunziata, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Technological+Advances+in+Using+Mouse+Models+to+Study+Ovarian+Cancer.">Recent Technological Advances in Using Mouse Models to Study Ovarian Cancer.</a> Frontiers in oncology. 4, 26 (2014).</li><li>Rao, J., Dragulescu-Andrasi, A., Yao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+in+vivo:+recent+advances.">Fluorescence imaging in vivo: recent advances.</a> Current opinion in biotechnology. 18, 17-25 (2007).</li><li>Manegold-Brauer, G., Bellin, A. K., Tercanli, S., Lapaire, O., Heinzelmann-Schwarz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+special+role+of+ultrasound+for+screening,+staging+and+surveillance+of+malignant+ovarian+tumors:+distinction+from+other+methods+of+diagnostic+imaging.">The special role of ultrasound for screening, staging and surveillance of malignant ovarian tumors: distinction from other methods of diagnostic imaging.</a> Archives of gynecology and obstetrics. 289, 491-498 (2014).</li><li>Zinn, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals.">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> ILAR journal / National Research Council, Institute of Laboratory Animal Resources. 49, 103-115 (2008).</li><li>Rockall, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeatability+of+Quantitative+FDG-PET/CT+and+Contrast-Enhanced+CT+in+Recurrent+Ovarian+Carcinoma:+Test-Retest+Measurements+for+Tumor+FDG+Uptake,+Diameter,+and+Volume.">Repeatability of Quantitative FDG-PET/CT and Contrast-Enhanced CT in Recurrent Ovarian Carcinoma: Test-Retest Measurements for Tumor FDG Uptake, Diameter, and Volume.</a> Clin Cancer Res. 20, 2751-2760 (2014).</li><li>Hickson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+optical+imaging:+preclinical+applications+and+considerations.">In vivo optical imaging: preclinical applications and considerations.</a> Urologic oncology. 27, 295-297 (2009).</li><li>Contag, C. H., Bachmann, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+in+vivo+bioluminescence+imaging+of+gene+expression.">Advances in in vivo bioluminescence imaging of gene expression.</a> Annual review of biomedical engineering. 4, 235-260 (2002).</li><li>Alvero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+phenotyping+of+human+ovarian+cancer+stem+cells+unravels+the+mechanisms+for+repair+and+chemoresistance.">Molecular phenotyping of human ovarian cancer stem cells unravels the mechanisms for repair and chemoresistance.</a> Cell Cycle. 8, 158-166 (2009).</li><li>Alvero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-like+ovarian+cancer+cells+can+serve+as+tumor+vascular+progenitors.">Stem-like ovarian cancer cells can serve as tumor vascular progenitors.</a> Stem Cells. 27, 2405-2413 (2009).</li><li>Alvero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NV-128,+a+novel+isoflavone+derivative,+induces+caspase-independent+cell+death+through+the+Akt/mammalian+target+of+rapamycin+pathway.">NV-128, a novel isoflavone derivative, induces caspase-independent cell death through the Akt/mammalian target of rapamycin pathway.</a> Cancer. , (2009).</li><li>Chefetz, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR2+enhances+ovarian+cancer+stem+cell+self-renewal+and+promotes+tumor+repair+and+recurrence.">TLR2 enhances ovarian cancer stem cell self-renewal and promotes tumor repair and recurrence.</a> Cell Cycle. 12, 511-521 (2013).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequency+of+putative+ovarian+cancer+stem+cells+with+CD44/CK19+coexpression+is+associated+with+decreased+progression-free+intervals+in+patients+with+recurrent+epithelial+ovarian+cancer.">High frequency of putative ovarian cancer stem cells with CD44/CK19 coexpression is associated with decreased progression-free intervals in patients with recurrent epithelial ovarian cancer.</a> Reprod Sci. 20, 605-615 (2013).</li><li>Steffensen, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+epithelial+ovarian+cancer+stem+cells+correlates+with+recurrence+in+early-stage+ovarian+cancer.">Prevalence of epithelial ovarian cancer stem cells correlates with recurrence in early-stage ovarian cancer.</a> J Oncol. 2011, 620523 (2011).</li><li>Craveiro, V., Yang-Hartwich, Y., Holmberg, J., Sumi, N., Pizzonia, J., Griffin, B., Gill, S., Silasi, D., Azodi, M., Rutherford, T., Alvero, A. B., Mor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Modifications+in+Ovarian+Cancer+Stem+Cells+Following+Paclitaxel+Treatment.">Phenotypic Modifications in Ovarian Cancer Stem Cells Following Paclitaxel Treatment.</a> Cancer Medicine. , (2013).</li><li>Kuroda, H., Marino, M. P., Kutner, R. H., Reiser, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+lentiviral+vectors+in+protein-free+media.">Production of lentiviral vectors in protein-free media.</a> Current protocols in cell biology / editorial board, Juan S. Bonifacino..[etal.]. 26, (2011).</li><li>Yin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+proteasomal+degradation+of+TWIST-1+in+epithelial-ovarian+cancer+stem+cells+impacts+differentiation+and+metastatic+potential.">Constitutive proteasomal degradation of TWIST-1 in epithelial-ovarian cancer stem cells impacts differentiation and metastatic potential.</a> Oncogene. 32, 39-49 (2013).</li><li>Vassileva, V., Allen, C. J., Piquette-Miller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sustained+and+intermittent+paclitaxel+therapy+on+tumor+repopulation+in+ovarian+cancer.">Effects of sustained and intermittent paclitaxel therapy on tumor repopulation in ovarian cancer.</a> Mol Cancer Ther. 7, 630-637 (2008).</li></ol>

Bu yazı için yayın ücreti kısmen Bruker Corporation tarafından sponsor edildi.

Biz hastalarda gözlenen klinik profilini taklit eden bir ip insan yumurtalık kanseri hayvan modeli oluşturmak için bir protokol açıklar. Buna ek olarak, 2 boyutlu görüntüleme duyarlılığı sınırlama olarak ele alan bir hayvan dönüş cihazının kullanılmasını tarif eder. Birlikte ele alındığında, bu teknikler Kemoterapiye tekrarlayan yumurtalık kanseri hedefleyebilir yeni bileşikler keşfetmek için platform olarak hizmet edebilir. Buna ek olarak, model kanser nüksü ve progresyon biyolojisini anlamak için kullanılabilir. Nedeniyle retroperitoneal konumu, erken evre ip yumurtalık kanseri ksenograftları fiziksel fareyi inceleyerek tespit etmek neredeyse imkansız. Çoğu durumda, hastalık hissedilebilecek bir kez, bir tümör zaten önemli bir oranda ve bu nedenle tedavi etkinliğinin değerlendirilmesini sınırlar. Floresan etiketli hücrelerin kullanımı gerçek zamanlı ve buna bağlı olarak t başlamak için uygun zamanı tanımlayan IP tümör kurulmasını değerlendirmek için olanak verenreatment. Benzer bir şekilde, floresan-etiketli ksenogrefleri tedaviye yanıt izlenmesini mümkün kılar. Bu işaret-out gerektiğini ancak bu ip daha derine 1 cm bakılmaksızın muhabiri sistemin tipik bir şekilde saptanabilir değildir tümörleri. Insan yumurtalık kanseri kök hücre 14,15,17,22 kullanılması hastada klinik profilini taklit ksenograftları oluşturur. Birincil bir hastalık olarak, bu model Paklitaksel&#39;e cevap verir, fakat tedavinin kesilmesi sonunda Kemoterapiye tekrarlayan hastalığına yol açar. Protokol bölümünde belirtilen yoğunlukta rahim boynuzları aracılığıyla hücrelerini Tanıtımı genellikle bu nedenle birkaç peritoneal implantları, mimikler ve erken evre hastalık ile 10 gün içinde yumurtalık tümörlerinde sonuçlanır. Floresan işaretli hücrelerin kullanımı, gerçek zamanlı olarak ve dolayısıyla tedaviye başlamak için en uygun zamanı belirleme ip tümörün kurulmasını değerlendirmek için bize izin verir. Benzer bir şekilde, floresan-etiketli ksenogrefleri izleme o sağlartedaviye F yanıtı. Kanser hücre çizgilerinin diğer tür yumurtalık, kullanılan ya da başka şekilde, bu profili gözlenememiştir olanaklıdır. SKOV3 örneğin, kullanıldığı zaman, bu, ilk ip tümörler önceden 23 dirençli olduğu bildirilmiştir. Örneğin floresan, IP gibi bir raportör ile etiketlenir Ancak buna rağmen, hastalık gerçek zamanlı olarak takip edilebilir. Diğer floresan haberci kullanıldığı takdirde, bu, bir kontrol (tümör), bir hayvan ile ilk görüntüleme gerçekleştirmek için önemlidir. Bu görüntüleme protokolün optimizasyonu oranını sinyal en iyi arka plan elde etmek için izin verir. GFP Satın alma ayarlarını kullanarak görüntülü zaman bizim deneyim, çıplak fareler genellikle yüksek bir arka plan var. Bu hücreler, uterus tümör kurulmasını önlemek için tek bir süspansiyon içinde intra-uterin, enjeksiyon önemlidir. Ayrıca, kanser hücresinin naklini kolaylaştırır rahim epitel tabakası, çizilmesini önlemek için de önemlidirrahim s, böylece bir rahim içi tümör yerine IP hastalığı üretilir. Buna ek olarak, veri analizi sırasında, o bu görüntülerin yoğunluğu doğrusal ve görüntülerin karşılaştırılmasını sağlar insures 1. gama değeri ayarlamak için önemlidir. MARS görüntülerin elde edilmesi sırasında, katlanabilir roket ucu konisi olan tüplere aktarılmıştır ucu roket ucu konisi girinti içinde olduğundan emin olmak için önemlidir. Roket ucu konisi fare için bir irtibat noktası olarak hizmet vermektedir ve bu nedenle hassas bir şekilde kalibre açıları elde etmek için gereklidir. Uzun görüntüleme protokolleri (yani daha uzun 1 saat), dehidratasyon önlemek için steril serum fizyolojik subkutan enjekte 100 ul. Hayvan vücut sıcaklığı, yaklaşık 37 ° C sistemi aracılığıyla akan sıcak hava ile muhafaza edilmelidir. MARS sisteminin bir sınırlaması, sadece bir hayvan, hayvan başına yaklaşık 1 saat bir toplam çalışma süresi olan bir zamanda görüntülü edilebilmesidir. Sonuç olarak, biz est tarifyakından yumurtalık kanseri, hem primer hem de nüks taklit eden bir hayvan modelinin ablishment. Bu model, yeni teşhise yönelik veya terapötik yöntemlerinin etkinliğinin değerlendirilmesi için kullanılabilir.

Hayvan modelleri yaşam bilim araştırma vazgeçilmez araçlardır. Kanserinde, özellikle hayvan çalışmalarından elde edilen veriler insanlarda 1-3 yeni teşhise yönelik veya terapötik uygulamaları test başlatmak için gerekli olan bilgi sağlar. Bu hayvanlar kurban gerek kalmadan tedavi etkinliğini tümör yükünü ölçmek ve değerlendirmek için kolay bir yol sağlar gibi katı kanserler için hayvan modelleri klasik deri altına kurulur. Nitekim, intra-peritoneal (ip) modelleri hayvanlar tespit ve tümör büyümesinde herhangi bir değişiklik ölçmek için kurban gerektirir. Ancak, IP kanser, yumurtalık kanseri için ortotrop modelleri bunun kendi uygun ortamı 4-6 hastalık okuyan bir avantaj sunmaktadır. Bu tür bir model, anti-tümör aktivitesinin değerlendirilmesinde yararlı olması için, invazif olmayan görüntüleme yöntemleri canlı farelerde IP tümör yükü kantifikasyonuna izin veren bu geliştirilmesi gerekmektedir. Önemli zorlukIP hayvan modellerinin kullanımı kesin fiziksel muayene ile tümör yükü miktarının zorluktur. Ip tümörlerin doğru ölçümü genellikle diseksiyon için feda edilecek fareler gerektirir. Bu yaklaşım, farklı zaman noktalarında feda edilecek hayvanların çok yüksek sayıda, kullanımını gerektirir. Maliyetine ek olarak, bağlı her bir hayvanda doğal varyasyon için yüksek veri çeşitliliklerin. Vivo optik görüntüleme non-invaziv canlı farelerde ip tümör yükünü izlemek için daha uygun bir yaklaşım sağlar. Invazif olmayan birkaç görüntüleme yöntemleri şu anda, tümör büyümesi ve terapötik tepkilerin izlenmesi için klinik öncesi araştırmalarda kullanılır. Bunlar floresan ve biyolüminesensin 7-12 olarak bilgisayarlı tomografi (BT), ultrason (US), manyetik rezonans görüntüleme (MRG), pozitron emisyon tomografisi (PET) ve optik görüntüleme sayılabilir. CT X-ray ve Comput birleştiren bir iletim görüntüleme sürecier teknoloji. Farklı hız ile gövdeden geçer, yüksek enerjili foton, bir tespit kirişleri enine kesit görüntü üretir. ABD yüksek frekanslı farklı hız doku yoğunluğuna bağlı olarak ve görsel görüntü üretmek için bilgisayar tarafından tanınan yansıtılmıştır vücut yaratmak ses dalgaları sesleri gönderir yansıma görüntü, bir türüdür. MR ve PET görüntü üretmek için sırasıyla, manyetik enerji ve nükleer parçacıkları kullanabilirsiniz emisyon görüntüleme yöntemleridir. PET idare etiketli 2-fluorodeoxy-D-glikoz 7,9,11 radyoaktivite tespit duyarlı bir kamera gerekir iken MRG bir görüntü oluşturmak için kullanılan kendi radyo frekanslarını üretmek için hücreleri uyarmaktadır güçlü bir manyetik alan oluşturur. Son olarak, optik görüntüleme biyolojik olarak ışık veren veya floresanlı bir muhabir veya sonda 9,12 emisyon ışığın saptanmasına dayanır. Bu raporda, sağlamadığı, floresan kullanımını tarif edergörüntüleme yöntemlerinin diğer türleri üzerinde birkaç avantajları. Floresan görüntüleme ile, hücreler sürekli olarak sırasıyla biyoluminesans ve manyetik rezonans görüntüleme için gerekli olan, bir alt-tabaka ya da bağlanmanın dayalı sondalar, eklenmesini gerektirmeden floresan proteinleri ifade etmek için genetik olarak tasarlanmış olabilir. Floresan muhabir ayrıca tipik olarak, böylece, daha az hassas bir algılama yöntemi 8,12 kullanımına olanak sağlayan daha parlak bir sinyali ifade eder. Buna ek olarak, flüoresan görüntüleme ile, bu BT 7-9 elde edilmesi mümkün olmayan bir 1 cm, daha küçük tümörleri tespit etmek mümkündür. Son olarak, biyolüminesans aksine, floresans sinyali aerobik bir ortam gerekli değildir ve bu nedenle, genellikle sinyal, büyük tümörlerde 13 çekirdeklerinde olarak oluşan hipoksik ortamda, sınırlı değildir. Ancak, herhangi bir başka bir teknoloji olarak, flüoresan bazlı görüntüleme yöntemleri de dezavantajları vardır. Biri machi yetersizlikNE-üretilen düşük enerjili fotonlar yeterli bir derinliğe kadar nüfuz. Böylece hayvanlar, farklı açılarda görüntülü olmalıdır dağıtılmış doku fotonların miktarını en aza indirmek için. Biz çıplak farelerde bir ip yumurtalık kanseri ve rotasyonu yoluyla bütün hayvan görüntüleme sağlar ip tümör takibi için bir yaklaşım kurmak için bir protokol açıklar. Döndürücü, genellikle, ışık kaynağı ve detektör arasındaki meydana gelen doku girişimi azaltmak özel ve tekrarlanabilir konumlara fare açılar oluştururlar. Bu aksi cevapsız olabilir küçük tümörlerin görselleştirme optimize eder.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>fetal bovine serum</td><td>Gemini Bioproducts</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>T75 cell culture flasks</td><td>Corning</td><td>430641</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Butler Schein</td><td>NDC 11695-6776-1</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol pads</td><td>Fischer Scientific</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringe</td><td>Becton Dickinson</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>25 gauge needle</td><td>Becton Dickinson</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>synthetic absorbable suture</td><td>Covidien</td><td>SL-636</td><td></td></tr><tr><td>tissue adhesive</td><td>Vetbond</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>surgical scissors</td><td>VWR</td><td>82027-584</td><td></td></tr><tr><td>surgical forceps</td><td>VWR</td><td>82027-386</td><td></td></tr><tr><td>hemostat</td><td>VWR</td><td>82027-422</td><td></td></tr><tr><td>Paclitaxel</td><td>Hospira, Inc.</td><td>NDC 61703-345-50</td><td></td></tr><tr><td>Ibuprofen</td><td>Walgreens</td><td></td><td>Children&#039;s Ibuprofen 100 (100 mg/5 ml)</td></tr><tr><td>Puralube Vet ointment</td><td>Pharmaderm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>In vivo MS FX PRO</td><td>Bruker Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MI software</td><td>Bruker Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>athymic nude mice</td><td>Harlan</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine model for non-invasive imaging to detect and monitor ovarian cancer recurrence

Epitelyal over kanseri ABD&#39;de en ölümcül jinekolojik kanseridir. Hastalar başlangıçta tümör rezeksiyon cerrahisi sonrasında platin ve taksan bileşiklerinden oluşan kombinasyon kemoterapi oluşan bakım mevcut standart yanıt vermekle birlikte, hastaların neredeyse% 90&#39;ı birkaç yıl içinde tekrarlar. Bu hastalarda Kemoterapiye hastalığının gelişimi mevcut kemoterapi maddelerinin etkinliğini sınırlar ve dolayısıyla, yüksek ölüm katkıda bulunur. Nüks hedefleyebilir yeni bir tedavi seçeneklerini keşfetmek için, yakından tekrarlayan yumurtalık kanseri olan hastaların klinik profilini taklit uygun hayvan modelleri gereklidir. Intra-peritoneal (ip) olarak hastalığının izlenmesi karşılaşılan zorluk IP modelleri ve bu nedenle en çok ksenogrefleri kurulan deri altından kullanımını sınırlamaktadır. Biz algılama ve ip tümör kitlesinin anatomik yerini sağlayan bir hassas optik görüntüleme platformu geliştirdi. Platform u içerir2-boyutlu X-ışını ko-kayıt ile birlikte moleküler sinyallerin anatomik konumu sağlayabilir yakın kızılötesi, görünür ışık aralığında, uzanan optik gazetecilere se. Algılama önemli ölçüde tek bir oryantasyonda görünmez tümörlerin tanımlanmasına izin veren, 360 derece görüntüleme için çok sayıda açısal konumlara hayvan sağlayan bir dönme sistemi sayesinde geliştirilmiştir. Bu platform, invasiv olmayan bir monitör tümör büyümesi için benzersiz bir modeli sağlar ve önlenmesi veya tekrarlayan yumurtalık kanseri tedavisi için yeni tedavilerin etkisini değerlendirmek.

Non-invaziv canlı görüntüleme süresi sayesinde aynı farelerden ip tümör ilerlemesinin izlenmesine olanak sağlar. Açıklanan protokol kullanılarak MCherry etiketli F2 yumurtalık kanseri hücrelerinin intra-uterin enjeksiyon günde 32 gün 5 ve karsinomatoz görünür IP tümörleri oluşturur (Şek. 5). Şekil 6 fareler telef edildikten sonra gözlemlenen karsinomatozise elde edilen görüntülerin bir korelasyon olduğunu göstermektedir . MARS kullanarak görüntüleme görüntü sadece tek bir düzlemde elde edilir, aksi takdirde özlenecek ip tümörlerin algılanmasını sağlar. 7 (üst panel) Şekil açısına bağlı olarak bile önemli tümör yükü ile kontrol farelerde tümör boyutu hafife alınabileceğini göstermektedir görüntü alınmıştır. Hayvanlar ya tam cevap olarak kategorize edildiğinde tümör kitlesi cevapsız veya hafife olmadığından emin olmak için yetenek 1. yuvarlak kemoterapi bitiminde daha da önemlidirer, kısmi cevap, ya da olmayan cevap (Res. 7 orta panel). Benzer şekilde, idame tedavisi sırasında düzgün progresyonsuz bir aralık (Res. 7 orta panel) tanımlayan, nüks için gün tayin etmek çok küçük tekrarlayan tümörlerin tespit etmek büyük önem taşımaktadır. Tümör yükünün kantitatif değerlendirilmesi hayvan rotasyonu yoluyla optimize edilmiştir. Derinlik uyarma en aza indirmek ve emisyon ışık tümör hücrelerinin sayısı ve dolayısıyla tümör yükü göstergesi olan floresan, foton en doğru yakalama sağlayacak dolaşır olacaktır açıları hayvanın dönmesi. Bu nedenle, miktar tayini rotasyon dizisi içinde konumuna bağlı olarak hayvanın belirli tümörler için optimize edilmiştir. Dönme veri setleri görüntü sunarken, bu visu için izin verirken, etkili tüm tümör kitleleri görüntüler min / max görüntü kontrast aralığını görüntüleri atamak için önemlidir<html> Bireysel tümör kitlelerinin al tarif. Bu çalışma için, ideal bir kontrast aralığı 50 sayıları minimum ve 1200 sayıları maksimum olduğu bulunmuştur. Bu değerler, diğer çalışmalar için bir rehber olarak görülebilir, ancak, optimum kontrast aralıkları tümör yükü düzeyi, hücrelerde floresan peptid ifade düzeyleri, görüntüleme sistemi konfigürasyonu ve yakalama ayarlarına bağlı olarak çalışmadan çalışmaya farklı olacaktır. <img alt="Şekil 1," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig1highres.jpg" width="600" /> Şekil 1: F2 yumurtalık kanseri hücreleri stabil MCherry floresan ifade eder. (A) Faz görüntü; (B) floresan görüntü; A ve B (C) katlamalı hücrelerin% 100 flüoresan raportör ifade unutmayın. s.jpg &quot;width =&quot; 600 &quot;/&gt; Şekil 2: yumurtalık kanseri hücrelerinin intra-uterin enjeksiyonu. (A), anestezi sürekli bir burun hunisi yoluyla tatbik edilir; Cilt bulmak ve uterin boynuz kelepçe kesilir (BE); (F), kanser hücrelerinin rahim lümeni içine yavaş yavaş enjekte edildi. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig3highres.jpg" width="600" /> Şekil 3: sıcaklık kontrollü ve kapalı devre görüntüleme odasının içinde şeffaf hayvan tepsisini havalandırmalı (A) 2D görüntüleme; (B, C) ​​tepsi anestezi sunmak ve beş farelere kadar tutabilir burun konileri ile donatılmıştır. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig4highres.jpg" width="600" /> &lt;strong&gt; Şekil 4: analiz yazılımı alınan Temsilcisi pencere panelleri veri analizinde yardımcı olmak. Açıklama için metne bakınız lütfen. <img alt="Şekil 5," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig5highres.jpg" width="600" /> Şekil 5: MCherry floresan tespiti boyuna görüntüleme sırası X-ray ile co-lokalize. Ip tümörü olan üç fare ip tümör ilerlemesini değerlendirmek için zaman içinde takip edilmektedir. Tümör ilerlemesi değişebilir unutmayın. Şekil farklı tümör ilerlemesi oranları ve dolayısıyla zaman içinde tümör yükünü değişen 3 farelerin temsilcisi resimdir. <img alt="Şekil 6," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig6highres.jpg" width="600" /> Şekil 6: ip tümör yükü (üst panel) ve floresan / X-ışını bindirme ima arasındaki korelasyonge (alt panel). Yaklaşık 32 gün 2D-görüntüleme yapıldı ve fareler elde edilen görüntünün ile gerçek tümör yükünü ilişkilendirmek için kurban edilir, F2-MCherry yumurtalık kanseri hücrelerinin enjeksiyonu sonrası. Kırmızı oklar tümör yükü işaret. <img alt="Şekil 7," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig7highres.jpg" width="600" /> Şekil 7: Çok açılı görüntüleme ve tümörlerin tespit Kontrolü (üst panel) Paklitaksel&#39;e tedavi (orta panel) ve tekrarlayan fareler (alt panel) izin Rotasyon veri setleri. Bu MARS sistemi kullanılarak döndürülür Şekil panelin başına tek bir fare görüntüsünü gösterir. Daha belirgin bir tümör yükü ile kontrol farelerde, tümör boyutu görüntü alınmıştır açısına bağlı olarak göz ardı edilebilir unutmayın.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence at JoVE.com

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

murine-model-for-non-invasive-imaging-to-detect-monitor-ovarian

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

12.2K Görüntüleme.  Yale University School of Medicine. We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer. 

Video: Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is important to control peritoneal dissemination. However, it is still unclear how tumor cells detach from primary lesions and attach to the mesothelium. The establishment of an appropriate animal model is needed to gain an understanding of the mechanism of peritoneal dissemination in vivo. In the current study, we introduce the process from the local injection of EOC cells into the murine ovarian surface to the development of metastasis, including the peritoneum and distant organs. Female nude mice (BALB/c nu/nu) at 8 weeks of age were used. Under a microscopic field of view, EOC cells (1 x 105 cells/&#181;l of medium-extracellular matrix (ECM)-based hydrogel/unilateral ovary/mouse) were injected into murine ovaries through a retroperitoneal approach from the dorsal flank. This proposed method is a less invasive procedure for the mouse and minimizes damage to the ovary. Here, we describe the methodological steps in the development of the original and metastatic tumor formation of EOC.

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

To clarify the multistep process of peritoneal dissemination of ovarian carcinoma, the current study presents a murine experimental model of original tumor development and peritoneal metastasis via orthotopic inoculation with these tumor cells.

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Kanser Araştırmaları

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all gynecologic malignancies among US women 1,2,3. Serous tumors are the most widespread forms of ovarian cancer and 4,5 the Tg-MISIIR-TAg transgenic represents the only mouse model that spontaneously develops this type of tumors. Tg-MISIIR-TAg mice express SV40 transforming region under control of the Mullerian Inhibitory Substance type II Receptor (MISIIR) gene promoter 6. Additional transgenic lines have been identified that express the SV40 TAg transgene, but do not develop ovarian tumors. Non-tumor prone mice exhibit typical lifespan for C57Bl/6 mice and are fertile. These mice can be used as syngeneic allograft recipients for tumor cells isolated from Tg-MISIIR-TAg-DR26 mice.
Objective: Although tumor imaging is possible 7, early detection of deep tumors is challenging in small living animals. To enable preclinical studies in an immunologically intact animal model for serous ovarian cancer, we describe a syngeneic mouse model for this type of ovarian cancer that permits in vivo imaging, studies of the tumor microenvironment and tumor immune responses.
Methods: We first derived a TAg+ mouse cancer cell line (MOV1) from a spontaneous ovarian tumor harvested in a 26 week-old DR26 Tg-MISIIR-TAg female. Then, we stably transduced MOV1 cells with TurboFP635 Lentivirus mammalian vector that encodes Katushka, a far-red mutant of the red fluorescent protein from sea anemone Entacmaea quadricolor with excitation/emission maxima at 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically implanted MOV1Kat in the ovary 11,12,13,14 of non-tumor prone Tg-MISIIR-TAg female mice. Tumor progression was followed by in vivo optical imaging and tumor microenvironment was analyzed by immunohistochemistry.
Results: Orthotopically implanted MOV1Kat cells developed serous ovarian tumors. MOV1Kat tumors could be visualized by in vivo imaging up to three weeks after implantation (fig. 1) and were infiltrated with leukocytes, as observed in human ovarian cancers 15 (fig. 2).
Conclusions: We describe an orthotopic model of ovarian cancer suitable for in vivo imaging of early tumors due to the high pH-stability and photostability of Katushka in deep tissues. We propose the use of this novel syngeneic model of serous ovarian cancer for in vivo imaging studies and monitoring of tumor immune responses and immunotherapies.

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

To study in vivo tumor growth and tumor microenvironment, we used a syngeneic and orthotopic mouse model of ovarian cancer in immunocompetent animals. We transduced a mouse tumor cell line (MOV1) with Katushka fluorescent protein (MOV1KAT) and here we show its orthotopic implantation in ovary and in vivo imaging.

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo</emTümör Bağışıklık Yanıtları> Tümör Görüntüleme ve İzleme

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Surface-enhanced Resonance Raman Scattering Nanoprobe Ratiometry for Detecting Microscopic Ovarian Cancer via Folate Receptor Targeting

Ovarian cancer represents the deadliest gynecologic malignancy. Most patients present at an advanced stage (FIGO stage III or IV), when local metastatic spread has already occurred. However, ovarian cancer has a unique pattern of metastatic spread, in that tumor implants are initially contained within the peritoneal cavity. This feature could enable, in principle, the complete resection of tumor implants with curative intent. Many of these metastatic lesions are microscopic, making them hard to identify and treat. Neutralizing such micrometastases is believed to be a major goal towards eliminating tumor recurrence and achieving long-term survival. Raman imaging with surface enhanced resonance Raman scattering nanoprobes can be used to delineate microscopic tumors with high sensitivity, due to their bright and bioorthogonal spectral signatures. Here, we describe the synthesis of two &#39;flavors&#39; of such nanoprobes: an antibody-functionalized one that targets the folate receptor &#8212; overexpressed in many ovarian cancers &#8212; and a non-targeted control nanoprobe, with&#160;distinct spectra. The nanoprobes are co-administered intraperitoneally to mouse models of metastatic human ovarian adenocarcinoma. All animal studies were approved by the Institutional Animal Care and Use Committee of Memorial Sloan Kettering Cancer Center. The peritoneal cavity of the animals is surgically exposed, washed, and scanned with a Raman microphotospectrometer. Subsequently, the Raman signatures of the two nanoprobes are decoupled using a Classical Least Squares fitting algorithm, and their respective scores divided to provide a ratiometric signal of folate-targeted over untargeted probes. In this way, microscopic metastases are visualized with high specificity. The main benefit of this approach is that the local application into the peritoneal cavity &#8212; which can be done conveniently during the surgical procedure &#8212; can tag tumors without subjecting the patient to systemic nanoparticle exposure. False positive signals stemming from non-specific binding of the nanoprobes onto visceral surfaces can be eliminated by following a ratiometric approach where targeted and non-targeted nanoprobes with distinct Raman signatures are applied as a mixture. The procedure is currently still limited by the lack of a commercial wide-field Raman imaging camera system, which once available will allow for the application of this technique in the operating theater.

Ovarian cancer forms metastases throughout the peritoneal cavity. Here, we present a protocol to make and use folate-receptor targeted surface-enhanced resonance Raman scattering nanoprobes that reveal these lesions with high specificity via ratiometric imaging. The nanoprobes are administered intraperitoneally to living mice, and the derived images correlate well with histology.

Yüzey gelişmiş rezonans Raman nanoprobe Ratiometry mikroskobik yumurtalık kanseri folat reseptör via algılamak için saçılma hedefleme

Ovarian cancer represents the deadliest gynecologic malignancy. Most patients present at an advanced stage (FIGO stage III or IV), when local metastatic ...

An Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer using Human Stroma to Promote Metastasis

Ovarian cancer is characterized by early, diffuse metastasis with 70% of women having metastatic disease at the time of diagnosis. While elegant transgenic mouse models of ovarian cancer exist, these mice are expensive and take a long time to develop tumors. Intraperitoneal injection xenograft models lack human stroma and do not accurately model ovarian cancer metastasis. Even patient derived xenografts (PDX) do not fully recapitulate the human stromal microenvironment as serial PDX passages demonstrate significant loss of human stroma. The ability to easily model human ovarian cancer within a physiologically relevant stromal microenvironment is an unmet need. Here, the protocol presents an orthotopic ovarian cancer mouse model using human ovarian cancer cells combined with patient-derived carcinoma-associated mesenchymal stem cells (CA-MSCs). CA-MSCs are stromal progenitor cells, which drive the formation of the stromal microenvironment and support ovarian cancer growth and metastasis. This model develops early and diffuses metastasis mimicking clinical presentation. In this model, luciferase expressing ovarian cancer cells are mixed in a 1:1 ratio with CA-MSCs and injected into the ovarian bursa of NSG mice. Tumor growth and metastasis are followed serially over time using bioluminescence imaging. The resulting tumors grow aggressively and form abdominal metastases by 14 days post injection. Mice experienced significant decreases in body weight as a marker of systemic illness and increased disease burden. By day 30 post injection, mice met endpoint criteria of &gt;10% body weight loss and necropsy confirmed intra-abdominal metastasis in 100% of mice and 60%-80% lung and parenchymal liver metastasis. Collectively, orthotopic engraftment of ovarian cancer cells and stroma cells generates tumors that closely mimic the early and diffuse metastatic behavior of human ovarian cancer. Furthermore, this model provides a tool to study the role of ovarian cancer cell: stroma cell interactions in metastatic progression.

Orthotopic engraftment of ovarian cancer cells mixed with human stromal cells provides a mouse model that exhibits rapid, diffuse metastatic behavior that is characteristic of human ovarian cancer. This model also allows for the study of tumor cell and stromal cell interactions, as well as their role in tumor progression and metastasis.

Ovarian cancer is characterized by early, diffuse metastasis with 70% of women having metastatic disease at the time of diagnosis. While elegant ...

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to assessing pathology post-mortem in animals euthanized at multiple time points in different cohorts, which increases the number of mice needed for a study. Imaging mice in longitudinal studies can track the progression of disease in individual animals, reducing the number of mice needed. Advances in ultrasound technology have allowed for the detection of micrometer-level changes in tissues. Ultrasound has been used to study follicle maturation in ovaries and xenograft growth but has not been applied to morphological changes in the mouse uterus. This protocol examines the juxtaposition of pathology with in vivo imaging comparisons in an induced endometrial cancer mouse model. The features observed by ultrasound were consistent with the degree of change seen by gross pathology and histology. Ultrasound was found to be highly predictive of the observed pathology, supporting the incorporation of ultrasonography into longitudinal studies of uterine diseases such as cancer in mice.

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

This protocol describes a method for monitoring the progression of morphological changes over time in the uterus in an inducible mouse model of endometrial cancer using ultrasound imaging with correlation to gross and histological changes.

Farelerde Tümör Baskılayıcıları Arid1a ve Pten'in Pax8'e Yönelik Delesyonunda Endometriyal Kanser Progresyonunun Non-İnvaziv Ultrason Değerlendirmesi

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Over Kanseri-Omentum Etkileşimi için 3 Boyutlu Ex Vivo Model Oluşturulması

An Ex Vivo Model of Ovarian Cancer Peritoneal Metastasis Using Human Omentum

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian cancer cells as well as immune modulatory signals that allow tumor tolerance. However, we have limited models that closely mimic the interaction between ovarian cancer cells and adipose-rich tissues. To further understand the cellular and molecular mechanisms by which the omentum provides a pro-tumoral microenvironment, we developed a unique 3D ex vivo model of cancer cell-omentum interaction. Using human omentum, we are able to grow ovarian cancer cells within this adipose-rich microenvironment and monitor the factors responsible for tumor growth and immune regulation. In addition to providing a platform for the study of this adipose-rich tumor microenvironment, the model provides an excellent platform for the development and evaluation of novel therapeutic approaches to target metastatic cancer cells in this niche. The proposed model is easy to generate, inexpensive, and applicable to translational investigations.

Yazar Spotlight: Kanser-Adipoz Mikroçevre Etkileşimini Araştırmak için Gelişmiş Ex Vivo Model 

This protocol describes the establishment of a three-dimensional (3D) ex vivo model of cancer cell-omentum interaction. The model provides a platform for elucidating pro-tumor mechanisms within the adipose niche and for testing novel therapies.

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Biyoloji

Quantitation of Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metastasis

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States. Mortality is due to diagnosis of 75% of women with late stage disease, when metastasis is already present. EOC is characterized by diffuse and widely disseminated intra-peritoneal metastasis. Cells shed from the primary tumor anchor in the mesothelium that lines the peritoneal cavity as well as in the omentum, resulting in multi-focal metastasis, often in the presence of peritoneal ascites. Efforts in our laboratory are directed at a more detailed understanding of factors that regulate EOC metastatic success. However, quantifying metastatic tumor burden represents a significant technical challenge due to the large number, small size and broad distribution of lesions throughout the peritoneum. Herein we describe a method for analysis of EOC metastasis using cells labeled with red fluorescent protein (RFP) coupled with in vivo multispectral imaging. Following intra-peritoneal injection of RFP-labelled tumor cells, mice are imaged weekly until time of sacrifice. At this time, the peritoneal cavity is surgically exposed and organs are imaged in situ. Dissected organs are then placed on a labeled transparent template and imaged ex vivo. Removal of tissue auto-fluorescence during image processing using multispectral unmixing enables accurate quantitation of relative tumor burden. This method has utility in a variety of applications including therapeutic studies to evaluate compounds that may inhibit metastasis and thereby improve overall survival.

Ovarian cancer metastasis is characterized by numerous diffuse intra-peritoneal lesions, such that accurate visual quantitation of tumor burden is challenging. Herein we describe a method for in situ and ex vivo quantitation of metastatic tumor burden using red fluorescent protein (RFP)-labeled tumor cells and optical imaging.

İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States.  Mortality is due to diagnosis of 75% of ...

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo Tümör Görüntüleme ve İzleme

Yüzey gelişmiş rezonans Raman nanoprobe Ratiometry mikroskobik yumurtalık kanseri folat reseptör via algılamak için saçılma hedefleme

An Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer using Human Stroma to Promote Metastasis

Farelerde Tümör Baskılayıcıları Arid1a ve Pten'in Pax8'e Yönelik Delesyonunda Endometriyal Kanser Progresyonunun Non-İnvaziv Ultrason Değerlendirmesi

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu