Эффективный протокол для анализа CUT&RUN изолированных FACS-клеток мыши-сателлитов

Уже более 20 лет наша лаборатория интересуется патофизиологической ролью ядерных рецепторов. Чтобы расшифровать их функцию in vivo, мы разработали мышиную модель, позволяющую пространственно и во времени контролировать их выражение. Параллельно мы разработали передовые методы для исследования их молекулярной функции в тканях мышей.

Наш научный интерес недавно привел нас к определению передачи сигналов секостероидов и стероидных рецепторов в различных тканях, включая скелетные мышцы. Недавно мы продемонстрировали, что андрогенный рецептор в миоволокнах, дифференцирующих клетки скелетной мускулатуры, играет важную роль в их сократительных и метаболических функциях. Наши недавние результаты обеспечивают более глубокое понимание патофизиологической динамики скелетных мышц, что имеет решающее значение для разработки эффективных методов лечения мышечно-ассоциированных заболеваний.

Мы разработали этот протокол, чтобы иметь возможность проводить анализ цистромы мышечных стволовых клеток in vivo. Во всех прежних протоколах использовались модальные методы in vitro, что полностью отделяет исследование от контекста всего организма. Помимо того, что этот протокол является недорогим и эффективным по времени, он обеспечивает эффективную экспериментальную обстановку для изучения рекрутирования транскрипционных факторов и ландшафта хроматина в клетках-предшественниках скелетных мышц.

Хроматин, полученный по этому протоколу, обеспечил первый полногеномный анализ цистромы AR в сателлитных клетках и будет способствовать будущим исследованиям регуляции генов. Среди многих, наша будущая цель будет состоять в том, чтобы распространить эти исследования на другие оксостероидные рецепторы и изучить их специфические корегуляторы в различных типах клеток, участвующих в процессе регенерации в скелетных мышцах.