Наша модель мочевого пузыря с удаленным детрусорным мышцем является новым экспериментальным подходом к изучению одновременно наличия уротелиальных посредников в ламии проприи и люмене мочевого пузыря во время заполнения мочевого пузыря. Эта модель может предоставить новые идеи в сигнальных механизмов между уротелием, субуротелием и детрусорными мышцами, которые регулируют возбудимость мочевого пузыря во время заполнения. Начните с размещения нетронутыми образца murine мочевого пузыря в рассечение блюдо под микроскопом вскрытия, содержащего 10 градусов по Цельсию кислородом KBS и очистки соединительной и жировой ткани вокруг мочевого пузыря.
Прикрепите небольшую часть купола изолированного мочевого пузыря на всем пути через внешний край мышцы детрусора вдали от внутреннего края мышцы, которая сталкивается с субуротелиевой ламией проприии, чтобы силгард покрыл рассеченное блюдо, наполненное KBS, и прикрепите мочеточители и шею мочевого пузыря, чтобы показать нетронутую подготовку мочевого пузыря. Используя мелко опрокинутые типсы, аккуратно потяните кусок серозы на углу между мочеточником и телом мочевого пузыря и отрегулируйте свет микроскопа, чтобы повысить прозрачность и различить маржу субмукосы под мышцей детрусора. Чтобы избежать перфорации стенки подготовки, не забудьте отрезать мышцы детрусора только в то время как боковой край слизистой оболочки мочевого пузыря хорошо виден.
Используя тонко наконечником ножницы, начать резки стенки мочевого пузыря вдоль внутренней поверхности слоя мышцы детрусора в то время как осторожно потянув сократить сегмент от подготовки заботясь о том, что боковой край слизистой оболочки можно наблюдать, избегая при этом касаясь края ткани. Оставьте небольшой кусочек мышцы детрусора на верхней части купола мочевого пузыря, чтобы позволить препарату быть обездвиженным во время остальных этапов протокола и заполнить двухметровый кусок 20 полиэтиленовых труб с 37 градусов по Цельсию кислородом KBS. После вставки катетера в отверстие мочевыводяной пузыря, осторожно нажмите катетер, пока кончик катетера не достигнет приблизительной середины мочевого пузыря.
Затем закретуть катетер в окружающих тканях шейки мочевого пузыря двойной петлей 6.0 нейлонового шва. После проверки ткани на протечки, поместите оголоженный мочевой пузырь подготовки в три миллилитровые камеры 37 градусов по Цельсию воды куртку орган блюдо с силгардом дно и обеспечить катетер в сторону камеры, так что препарат не плавает над поверхностью перфузии раствора. Подключите катетер мочевого пузыря к куску полиэтилена 20 труб, соединенных с трехугольным стоп-коком и инфузионный шприц заполнены 37 градусов по Цельсию кислородом KBS и начать инфузионный насос для заполнения мочевого пузыря с KBS заботясь, чтобы контролировать объем заполнения внутривечного давления во время заполнения.
Для обнаружения посредников в субуротелии ламина проприя аспект препарата, собирать aliquots раствора ванны в различных соответствующих экспериментальных точек времени и обрабатывать образцы в соответствии с запланированным анализом вниз по течению. Стена подготовки оголированного мочевого пузыря содержит уротелий и субуротелий, но не детрусорную гладкую мышцу. Отношения объема давления удивительно похожи в нетронутых и оголглых препаратов.
Пригодность модели для измерения посредников, полученных из уротелия, которые высвобождаются в сторону субуротелия ламина проприя во время заполнения, может быть проверена путем измерения высвобождения пурин-посредников в раствор, купающий субуротелий ламина проприя оголётного препарата. Как было продемонстрировано, незначительное количество пуринов может быть обнаружено в ванне, содержащей изолированный препарат мочевого пузыря с нетронутой мышцей детрусора; в то время как количество этих пуринов значительно выше в образцах, собранных из ванны, содержащей оголожее приготовление мочевого пузыря. Примечательно, что распределение пуринов и метаболитов в образцах, взятых из люмена и субуротелийной ламинии проприи в конце начинки, существенно отличается.
Добавление атено АТФ, высоко флуоресцентного аналога АТФ, к субуротелиальной стороне препаратов без детрусора приводит к снижению Атено АТФ и увеличению продуктов atheno ATP, atheno ADP, atheno AMP и atheno ADO. Аналогичным образом, добавление Атено АТФ в препарат люмена приводит к снижению Атено АТФ и увеличению atheno ADP, atheno AMP и atheno ADO в люмене. Кроме того, добавление атено АТФ в субуротелий ламина проприя стороне оголенного препарата приводит к появлению atheno AMP и atheno ADO в люмене.
Аналогичным образом, добавление атено АТФ в люмен приводит к появлению atheno AMP и atheno ADO в субуротелии ламины проприии. После этой процедуры, наличие возбуждающей и ингибирующие посредники могут быть измерены в ламина проприя и в мочевом пузыре люмен на разных стадиях заполнения мочевого пузыря. С помощью этой модели можно также изучить двустороннюю трансуретрную транспортировку посредников и обмен веществ посредников.
Использование этой новой модели мочевого пузыря приведет к новому пониманию внутренней, местной механочувствительной сигнализации между уротелием и детрусор гладкой мышцы, которые контролируют возбудимость мочевого пузыря в здоровье и болезни.
