Этот новый метод для реального времени мезоскопической визуализации флуоресцентных следов CSF через нетронутый череп живых мышей может быть использован для оценки глимфатического транспорта. Основным преимуществом является то, что этот метод позволяет динамические измерения in-vivo intracisternal трассировщиков на долю от стоимости других условий изображения. Процедуры, необходимые для поставить головную пластину на канюлю cisterna magna, просты и минимально инвазивны, но требуют правильной практики.
Визуальная демонстрация критических шагов этого метода необходима для максимизации качества изображения и обеспечения воспроизводимых сравнений между различными мышами и экспериментальными группами. После подтверждения отсутствия реакции на щипать ногой мокрую шею и голову стерильной водой и побрить увлажненный мех. Протрите обитаемую кожу спиртовой мазком, чтобы удалить остаточные волосы и поместить мышь в стереотаксическую рамку поверх контролируемой температурой площадки.
Нанесите мазь на глаза животных и очистите обитаемую кожу хлоргексидином. Через 2 минуты снимите хлоргексидин с спиртовой салфеткой и нанесите раствор иодона. Когда иодон высохнет, введать подкожной анальгезии в верхней части черепа и шеи.
Начиная с части шеи, которая покрывает затылочной коры, сделать средней линии сократить в чрезмерной кожи продолжается ростральный к интраорбитальной линии. Расширьте разрез боковой к границе, где височная мышца вставляет в череп и удалить всю кожу фузиформного разреза, чтобы разоблачить как лобные, так и теменные кости. Орошать череп стерильным солевым раствором и использовать ватные тампоны для очистки поверхности до тех пор, пока он не освободится от мусора и волос.
После вставки цистерны magna cannula нанесите смесь зубного цемента и цианоакрилатного клея на вентриалистическую сторону головной пластины вокруг границы. Поместите головную пластину на череп так, чтобы передняя граница пластины выравнивается с задней кончиком носовой кости, а задняя граница выравнивается с передним аспектом межпариетальной кости, убедившись, что sagittal шов по центру и прямо по отношению к окну. Важно убедиться, что головная пластина защищена и что она не препятствует поле зрения цистерны великой каннуляции.
Используйте пару капель клея ускоритель, чтобы исправить положение головной пластины и заполнить все оставшиеся пробелы с цементной смесью. Клей цистерна магна канюли на головную пластину и использовать головную пластину, чтобы поместить мышь в держатель головы в фиксированном положении. Аккуратно поместите мышь и инфузионный насос, прикрепленный к канюле, на тележку для транспортировки к макроскопу и поместите держатель головы на сцену макроскопа.
Убедитесь, что линия от шприц-насоса до канюли cisterna magna не подтянута и что у нее нет изломов. Наблюдайте частоту дыхания и розовую окраску слизистых оболочек, чтобы подтвердить хорошую оксигенацию. Включите макроскоп камеры и светоизлучающих диодов и начать жить режиме.
Отрегулируйте увеличение поля изображения так, чтобы насофронтальный шов в верхней части поля и шов лямбдоида внизу можно было четко визуализировать. После того, как на месте ленты держатель головы на стадии макроскопа и сосредоточить макроскоп на открытый череп, пока фокусная плоскость находится на боковых сторонах теменной кости задней корональных швов. Для CSF трассировщик инфузии установить инфузионный насос до соответствующей скорости и объема и установить соответствующую длину волны возбуждения и время экспозиции для трассировщика для каждого канала.
Затем убедитесь, что функция срабатывания на макроскопе является правильной, прежде чем одновременно инициировать вливание трассировщика и визуализацию. Во время визуализации лобных, сагитталовых, корональных и лямбдоидных швов можно легко определить. После того, как CSF трассировщик был проникнут в цистерна magna трассировщик флуоресценции впервые наблюдается в больших бассейнах субарахноидов CSF на olfactofrontal цистерны и четырехглавой цистерны вблизи шишковидной ниши и в конечном итоге окружающих средних мозговых артерий.
CsF трассировщики затем войти в их мозг вдоль пери сосудистых пространств корковых грушевидных ветвей средней мозговой артерии. CSF транспортной визуализации после черепно-мозговой травмы показывает трассировщик первоначально на olfactofrontal цистерны, но глимфатический приток вдоль корковых периваскулярных пространств полностью отменена на стороне травмы. Количественный анализ на снимках in-vivo показывает, что площадь притока ипсилатеральных уменьшилась почти на треть по сравнению с контралатеральным полушарием.
Чтобы избежать движения артефактов и изменений в фокусной плоскости не забудьте правильно обеспечить головную пластину и держатель головной пластины и проверить уровень анестезии животного. После эксперимента результаты визуализации in-vivo могут быть дополнительно проверены путем количественной оценки проникновения трассировщика с использованием фактического Этот метод позволяет изучать глимфатической системы в физиологической и минимально инвазивной манере и может помочь решить будущие вопросы о гидродинамике CSF в области здравоохранения и болезней.
