В этом видео, протокол для непрерывного отбора проб крови предоставляется. Радиоактивность крови будет измеряться параллельно ПЭТ/КТ с помощью экстракорпоральных артериовенозных шунтов. При этом генерируется функция артериального ввода для последующей количественной оценки данных ПЭТ/КТ, что позволяет позднее провести точное биокинетическое моделирование.
Основными преимуществами этого протокола являются то, что он воспроизводится, генерирует минимальную кровопотерю и способствует высокой точности временного разрешения функции ввода артерий. Важно прокалибровать все измерительные приборы, которые будут использоваться для определения концентрации активности крови. Демонстрацией процедуры будет Энн Моллер, техник из нашей лаборатории.
После подтверждения отсутствия реакции на щепотку ног в 12-часовой постясь крысы, брить ногу и пах на хирургической стороне животного и очистить кожу с дополнительным дезинфицирующим средством. Нанесите мазь на глаз животного и поместите ректальный зонд для непрерывного мониторинга и поддержания температуры тела. Лента конечностей крысы на рабочую поверхность, и дезинфицировать операционное место с слизистой дезинфицирующим средством.
Сделайте примерно 20-миллиметровый разрез в паху и рассекайте тонкие слои кожи, чтобы разоблачить бедренную вену, артерию и нерв. Поместите две тонкие нити под бедренную вену и артерию, и ligate сосудов с дистальными мисями. Удерживая сосуды под напряжением бульдогом, используйте проксимальные нити шва, чтобы напрягать сосуд бульдогом без узла.
Блок вены с проксимальной аневризмы зажим от двух до трех миллиметров дистальной от шва с бульдогом зажим, и использовать ножницы роговицы, чтобы сделать разрез, который составляет 1/3 от диаметра сосуда. Разрез сосуда является самым важным шагом в нашем протоколе. Пожалуйста, убедитесь, что использовать микрохирургические инструменты, такие как ножницы роговицы, и обеспечить, чтобы сократить судно тщательно в 45-градусный угол.
Используйте стерильный ватный тампон, чтобы удалить протекающую кровь, и расширить вену с тупыми типсами. Держа сосуд открытым, вставьте заточенный катетер в вену в проксимальное направление, в сторону аневризмы. Откройте зажим аневризмы и нажмите катетер еще на два-три сантиметра.
Если катетер был помещен правильно, кровь будет течь в катетер. Защитите катетер двумя проксимальными узлами. Используйте инсулиновый шприц, чтобы промыть и аспирировать 100 микролитров гепаринизированного солевого раствора через катетер, чтобы проверить функциональность катетера.
Затем поместите катетер в артерию, как только что продемонстрировали для вены, и закрыть ногу швами. Демонстрацией процедуры будет Джоанна Форстер, техник из нашей лаборатории. Для получения изображения поместите животное в положение, подверженное голову, на поддоне кровати шаттла и переместит кровать шаттла в расширенное положение кровати для инъекций.
Подключите катетеры к системе шунтирования и запустите перистальтический насос со скоростью потока 1,52 миллилитров в минуту, чтобы заполнить систему шунтирования кровью животного. Переместите кровать шаттла в центр поля зрения позитронно-эмиссионной томографии, или ПЭТ, кольца обнаружения, и запустите онлайновую систему отбора проб крови. Затем запустите ПЭТ/компьютерную томографию, или КТ, рабочий процесс.
После 60 секунд, ввести 0,5 до одного миллилитра примерно 22-мегабеккерель дозы 18F-фтордеоксиглукозы внутривенно через Т-кусок. Промыть Т-кусок около 150 микролитров гепаринизированного солевого раствора. Для приобретения ПЭТ-излучения установите опцию приобретения по времени до 3600 секунд и выберите F-18 в качестве изотопа исследования.
Используйте от 350 до 650 килоэлектрон вольт в качестве энергетического уровня и 3, 438 наносекунд в качестве тайм-окна. Для приобретения КТ выберите сканирование лечения в варианте приобретения, а в поле настроек проекции выберите 180 проекций для половины общего вращения. Для параметров поля зрения и разрешения выберите низкое увеличение и четыре на четыре для связывания с 275-миллиметровой длиной сканирования и 3, 328 пикселей в качестве трансаксиального заряда в сочетании с размером устройства.
В поле настроек экспозиции установите 500 микроампер для тока, 80 киловольт для напряжения и 180 миллисекунд для времени экспозиции. Затем приобрети динамический ПЭТ в течение следующих 60 минут, а затем компьютерную томографию в конце ПЭТ-изображения. Для ПЭТ-эмиссии гистограммы, установить серию из 20 кадров в качестве динамического обрамления и выбрать вычесть для задержек.
В поле расширенных настроек выберите 128 шириной синограммы, три — пролетом и 79 — разницей в кольцах и коррекцией мертвого времени. Для пэт-реконструкции используйте двухмерную упорядоченную подмножество максимизации ожидания и применяем и сохраните сонограмму рассеяния с четырьмя итерациями и Фурье для переобучения в качестве алгоритма реконструкции. Затем выберите 128 на 128 в качестве размера матрицы, используйте один в качестве увеличения изображения, и выберите все для кадров и все для сегментов.
Для ручной выборки крови 30, 60, 90, 600 и 1800 секунд после начала получения изображений откройте первый трехготовный клапан. Соберите 100 микролитров артериальной крови в трубку сбора капиллярной крови ЭДТА через 30 секунд после инъекции трассировщика. Для измерения активности всей крови загрузите образец в счетчик колодец, чтобы дать возможность вычислить активность всей крови для каждой точки времени ручного отбора проб крови в килобеккереле на миллилитр.
Для онлайн-проб крови используйте руководство по трубке, чтобы поместить трубку в детектор и начать программное обеспечение для анализа крови. Откройте интерфейс приобретения и подтвердите, что компьютер онлайн-установки анализа крови и ПЭТ/КТ синхронизированы во времени. Нажмите кнопку «Пуск» ровно за 60 секунд до введения трассировщика, чтобы получить достаточно данных для коррекции фона.
Сохраните необработанные данные с помощью кнопки «Сохранить» в базе данных PMOD после измерения. Для коррекции и калибровки онлайновых данных крови переключитесь на интерфейс коррекции и включите коррекцию распада. Выберите 18 F и определите время начала получения изображения, что позволит кнопке «Средняя» выполнить фоновую коррекцию.
Активируйте калибровку и введите калибровку. Сохраните исправленные и откалиброванные данные крови с помощью кнопки Save TAC и выберите кровь. crv файл.
В начале непрерывного отбора проб крови, первоначальный пик концентрации радиоактивности можно наблюдать, начиная примерно через пять секунд после инъекции трассировщика в онлайн-анализе. После этого пика активность в крови быстро снижается, достигая плато примерно на 15 минут. В данных ручного отбора проб крови обнаруженный пик меньше, и плато не так-то просто определить.
На полученных изображении данных отчетливо видны пик и отправная точка плато. Тем не менее, максимум пика меньше по сравнению с данными непрерывного отбора проб крови. В этой неоптимальный непрерывный анализ крови, не было возможно получить данные в течение первых 3 1 / 2 минуты выборки из-за свертывания крови.
После очистки сгустка, поток в трубной системе был перезапущен и измерение было продолжено, выявление пика примерно в четыре минуты, которые не записывают максимальную радиоактивность в крови. Однако в этой неоптимальный отбор проб все еще можно было продать ручную выборку крови и анализ изображений, которые продемонстрировали результаты, сопоставимые с результатами, наблюдаемыми для правильного непрерывного отбора проб крови. Имейте благополучие животного в виду в течение всей процедуры, подготовить шунт системы точно так, как рекомендуется, и попытаться уменьшить длину трубки.
Протокол может быть использован для изменения новых диагностических следов ПЭТ, характеристики новых моделей заболеваний, а также оценки реакции терапии новых терапевтических средств в доклинической обстановке.
