Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в экспериментальной области инсульта, такие как, как уменьшить связанные с этими моделями, и как улучшить воспроизводимость. Основным преимуществом этого метода является то, что он позволяет повторно перфузии через общую сонную артерию, и, следовательно, не зависит от круга Уиллис, который может варьироваться анатомически между животными, и, следовательно, может способствовать изменчивости видели в экспериментальных показателей результата. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, так как шаги по ремонту судна CCA трудно узнать из-за технических трудностей, связанных при использовании герметика, чтобы гарантировать, что CCA полностью патент, после ремонта.
Для начала подготовьте и обезболить мышь в соответствии с протоколом теста. Затем используйте лезвие скальпеля номер 15, чтобы сделать разрез средней линии 1,5 см на открытой брюшной шее. Используя тупые методы вскрытия, аккуратно убирайте слюнные железы в сторону, чтобы разоблачить трахею.
Затем вскрыть общую сонную артерию, или CCA, свободную от окружающих тканей и вагального нерва. После этого проходят два небольших участка нерапустимого 6-0 шва ниже CCA, спинной к CCA, и брюшной к вагальный нерв. Нарисуйте один шелковый галстук ближе к хирургу, и связать его свободно вокруг CCA.
Затем свободно связать второй шелковый галстук к бифуркации внутренних и внешних сонных артерий. Затем нанесите микрососудистый клип чуть выше дистального галстука, гарантируя, что бифуркация не будет затруднена. Используйте микро венозные ножницы, чтобы сделать небольшое отверстие в CCA.
Вставьте 7-0 силиконовой покрытием микро нити в CCA, и заранее его к микрососудистой клип. Затем затяните дистальный галстук, чтобы закрепить нить на месте. И использовать клип держатели для удаления микрососудистого клипа.
Далее, заранее нити во внутреннюю сонную артерию, или ICA. После того, как головка нити проходит дистальный галстук, потяните галстук крепче, чтобы предотвратить кровопотерю. Используя дистальный шелковый галстук, поднимите и потяните CCA к внешней стороне тела мыши, и направить нить к изгибу, мимо открытия птеригопалатиновой артерии, или PPA.
После того, как нить на месте, обеспечить его путем ужесточения дистального шелкового галстука дальше. В конце периода MCAO, втягивать нить, пока белая головка нити хорошо видны. Затем ослабить дистальный галстук CCA достаточно, чтобы удалить голову нити большую часть пути, из сосуда.
Затем полностью удалите головную голову нити с сосуда. После этого поместите микрососудистый зажим в горизонтальное положение, к бифуркации CCA и рядом с дистальной связью. Затем поместите еще один клип ниже проксимальной галстук CCA, к хирургу.
Тщательно используйте Dumont 5 типсов, чтобы удалить оба шелковых связей. И высушить область с помощью стерильных ватных тампонов. Затем добавьте фибриноген и тромбин герметинные растворы один и два, в стерильную чашку Петри.
Используя микронозные ножницы и технику тупого вскрытия, получить тонкий брюшной кусочек стерноклидомастоидной мышцы. Затем, используя Dumont 5 типсов, возьмите прокладку ткани и смешайте ее равномерно через растворы fibrinogen и Thrombin sealant. Здесь важно обеспечить, чтобы ткань площадку достаточно большой, чтобы покрыть разрез CCA.
И как только он смешивается через два решения, он должен быть немедленно помещен над разрезом, чтобы предотвратить чрезмерное коагуляции и плохой адгезии. После смешивания между двумя растворами, удалить ткань площадку для разреза CCA. Поместите ткань площадку плашмя вниз на разрез со средним давлением, и открытые типсы.
Быстро удалите дистальный микрососудистый клип, удерживая ткань площадку на месте. Далее, медленно облегчить давление от ткани площадку, что позволяет крови течь под областью разреза. Теперь медленно и осторожно отпустите давление от проксимального микрососудистого зажима, а затем удалите полностью.
Удаление верхнего клипа позволяет небольшому количеству крови активировать герметик. Устойчивый выпуск дистального клипа позволяет постепенно увеличивать давление на месте разреза, активируя дальше и помогая предотвратить неудачный ремонт. Наконец, как только сосуд опечатан, шов раны с растворимыми 6-0 швов.
В этом протоколе, окклюзия средней мозговой артерии, или MCAO, была выполнена на 24 взрослых мышах мужского пола. Избежание перевязки ЭКА и добавление анальгетики показали тенденцию к снижению потери веса на 48 часов после MCAO. Через пять минут после удаления нити, региональный мозговой кровоток значительно увеличился в области мозга MCA.
Перфузия была сохранена до ремонта судна, с увеличением перфузии на территорию MCA, после ремонта судна CCA. Это говорит о том, что ремонт CCA позволил увеличить перфузию крови на ишемической территории, по сравнению с зависимостью от круга Уиллиса в одиночку. T2 взвешенных МРТ был использован для определения общего LV и DTI сканирования были использованы для определения ядра LV на 48 часов после MCAO.
Между этими двумя группами не было существенной разницы. Интересно, что изменчивость для общего и основного LV была значительно снижена в ремонтной группе CCA. Наш анализ показал, что меньше животных в группе лечения будет необходимо продемонстрировать 30%-ное сокращение LV, после MCAO, используя ремонт CCA, по сравнению с типичной процедурой CCA ligated.
При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы обеспечить пакет ткани достаточного размера, чтобы покрыть разрез CCA. Кроме того, скорость имеет важное значение, чтобы предотвратить герметик чрезмерной коагуляции, до размещения площадку на CCA.
