Este estudo se concentra em melhorar as técnicas de amostragem de leite na pesquisa de lactação, particularmente em camundongos. Apresentamos um método que supera desafios como perda de amostras, volume limitado e processos trabalhosos, oferecendo uma solução simplificada para coleta de leite de roedores e uma ferramenta valiosa para pesquisadores da área. Um dos maiores desafios da realização de pesquisas em camundongos é seu pequeno tamanho, especialmente quando se trata de amostragem de biofluidos, como o leite.
É difícil obter volume suficiente sem agrupar amostras ou ter duas pessoas coletando-as manualmente, o que torna o processo menos prático em muitos casos. Nosso protocolo simplifica a coleta de leite, permitindo que uma pessoa colete volume suficiente em menos de 10 minutos usando ferramentas de laboratório prontamente disponíveis. Ao contrário de outros métodos, ele minimiza a perda de amostra com sucção contínua, puxando o leite diretamente para os tubos de coleta, economizando tempo e preservando o volume para análise.
Para começar, prenda uma extremidade do tubo de PVC de 5/32 polegadas de diâmetro interno à bomba de vácuo e prenda o acessório com fita adesiva. Usando um conector reto farpado, conecte a outra extremidade do tubo de PVC de diâmetro interno de 5/32 polegadas ao tubo de PVC de diâmetro interno de 1/8 de polegada. Em seguida, use um conector para conectar a outra extremidade do tubo de PVC de 1/8 de polegada de diâmetro interno a uma agulha hipodérmica de calibre 18.
Usando uma tesoura, corte a ponta de uma ponta de pipeta P200, aproximadamente 0,2 centímetros, para criar uma abertura maior. Insira a ponta da pipeta P200 modificada através da abertura da rolha do septo de modo que a ponta aponte para cima e prenda a rolha do septo a um tubo coletor estéril. Usando a agulha hipodérmica de calibre 18, perfure a rolha do septo.
Agora, ligue a bomba de vácuo para verificar a pressão de sucção, colocando um dedo enluvado sobre a abertura da ponta da pipeta No dia da ordenha, separe a mãe de seus filhotes para permitir o acúmulo de leite nas glândulas. Mantenha os filhotes aquecidos em um ninho. Depois de anestesiar a barragem, aperte um pé da barragem com firmeza para avaliar a percepção do animal sobre a sensação e a dor.
Em seguida, aplique pomada oftálmica veterinária nos olhos da barragem para evitar o ressecamento durante a anestesia. Coloque a barragem anestesiada de costas em uma superfície de trabalho sólida. Limpe suavemente a área mamária da barragem com um lenço de preparação com álcool estéril.
Administre uma a duas unidades de ocitocina por via intraperitoneal entre o quarto e o quinto par de no lado da cavidade peritoneal que não recebeu nenhuma injeção. Limpe suavemente a área do pescoço da barragem com a mão não dominante. Em seguida, aperte o tecido mamário da base até a ponta do teto até que uma gota de leite fique visível.
Ligue o dispositivo de aspiração pressionando o botão liga/desliga. Para iniciar a ordenha, aplique suavemente a ponta da pipeta P200 invertida em uma tetina e use um movimento suave de puxar para retirar o leite. Ordenhe todas as tetinas até que um volume suficiente de leite seja coletado.
Depois, devolva a mãe anestesiada à gaiola e certifique-se de que ela seja mantida aquecida durante o período de recuperação anestésica. 0,1 a 0,5 mililitros de leite podem ser coletados confortavelmente de cada barragem em menos de 10 minutos. A concentração de gordura do leite aumentou significativamente de 174,4 gramas por litro no segundo dia pós-parto para 224,4 gramas por litro no 10º dia pós-parto.
As concentrações de lactose e proteína total não apresentaram diferenças significativas entre o segundo dia pós-parto e o 10º dia pós-parto. A abundância relativa de alfa-S1-caseína e proteína ácida do soro de leite foi maior no leite pós-parto do dia 10 em comparação com o leite pós-parto no segundo dia, enquanto a beta-caseína foi mais abundante no leite pós-parto do segundo dia do que no leite pós-parto do dia 10. As intensidades da banda de proteína no gel de eletroforese confirmaram visualmente as diferenças nas abundâncias relativas de proteínas individuais do leite.
