Nossa pesquisa se concentra em entender como o olho previne naturalmente a inflamação. Nossa pesquisa mostrou que a via do miecórnio é essencial para suprimir a inflamação no olho e promover a sobrevivência celular na retina estressada. Isso sugere que a inativação da via do miecórnio pode ser benéfica para o tratamento de doenças generativas da retina.
Esse protocolo normaliza a pressão intraocular antes da retirada da agulha, reduzindo o trauma nas estruturas oculares e limitando a lesão do componente isquemia-reperfusão. Esse refinamento minimiza a variabilidade experimental causada pela manipulação física, aumentando a precisão desse modelo. Nossa pesquisa promove o conceito único de terapia em vez de neutralizar moléculas para diminuir os sintomas na esperança de que as células possam sobreviver e voltar ao normal.
Nós nos concentramos em mudar o comportamento das células envolvidas na doença. Essa abordagem tem um forte potencial para fornecer benefícios a longo prazo e resistência à recorrência de doenças crônicas, uma vez que a atividade celular normal é induzida. Nosso modelo ofereceu uma técnica refinada para estudar a lesão de isquemia-reperfusão no olho de camundongo.
E isso pode oferecer uma representação mais precisa de como as estruturas intraoculares responderiam a uma lesão por pressão intraocular prolongada ou por uma lesão de reperfusão. Para começar, prepare seringas de solução salina estéril de cloreto de sódio a 0,9% conectadas a uma linha de infusão e uma torneira com uma agulha de calibre 30 presa ao final da linha, uma para cada camundongo, e coloque-as 120 centímetros acima da superfície da bancada. Em seguida, lave todas as bolhas de ar da linha.
Em seguida, crie uma cama para estabilizar o mouse cortando uma depressão de aproximadamente seis por três centímetros em uma esponja e colocando-a com segurança em um poço de isopor ou outro recipiente plano. Depois de anestesiar o camundongo, dilate a íris com uma gota de tropicamida a 1% e aguarde cinco minutos para dilatação. Em seguida, coloque o mouse com segurança na cama de esponja sob o microscópio.
Aplique solução salina nos olhos para enxaguar quaisquer detritos ou pelos da superfície dos olhos. Usando uma pinça não dentada, segure suavemente um dos olhos. Em seguida, com a linha de infusão fechada, canule a câmara anterior com a agulha a aproximadamente dois milímetros do limbo.
Certifique-se de que a agulha perfura a córnea perpendicularmente à superfície periférica curva da córnea e, em seguida, ligeiramente achatada paralelamente ao plano da íris. Gire a torneira para executar a linha de infusão e verifique se não há vazamento através da ferida da córnea. Garanta uma distensão gradual da córnea à medida que a pressão intraocular aumenta.
Usando um tonômetro, verifique se a pressão intraocular aumentou para 90 a 100 milímetros de mercúrio. Prenda a linha de infusão com fita adesiva, garantindo que a agulha não mude de posição e comece a vazar. Agora, aplique uma pomada oftálmica, como bacitracina, no olho para evitar o ressecamento.
Coloque o mouse longe do microscópio sob uma lâmpada de aquecimento para manter a temperatura corporal normal por 60 minutos. Após 60 minutos, retorne o mouse ao microscópio. Abaixe a seringa de solução salina até o nível do camundongo para normalizar a pressão intraocular.
Meça a pressão intraocular com o tonômetro para verificar se está perto do normal, em torno de 20 milímetros de mercúrio. Uma vez normalizada, remova cuidadosamente a agulha, evitando danos à lente ou à íris. Cubra os olhos do rato com uma pomada antibacteriana oftálmica, como a pomada oftálmica veterinária bacitracina.
Monitore o mouse em uma superfície aquecida por uma a duas horas até que ele se recupere totalmente da anestesia. Depois de totalmente recuperado, retorne o mouse à sua gaiola. As retinas no sétimo dia mostraram maior dano e perda celular em comparação com o segundo dia, indicando degeneração retiniana mais grave ao longo do tempo após isquemia e reperfusão.
Os escores histopatológicos individuais foram mais altos na maioria das camadas da retina no sétimo dia em comparação com o segundo dia, mostrando alterações patológicas aumentadas ao longo do tempo. Os escores histológicos totais foram significativamente maiores no sétimo dia do que no segundo dia, indicando uma progressão acentuada no dano retiniano.
