Fabricação de grade de afinidade por estreptavidina para preparação de amostras de microscopia crio-eletrônica

Houve muitos avanços tecnológicos recentes em crio-EM, incluindo avanços no próprio hardware do microscópio que melhoram a qualidade geral das imagens, e também desenvolvimentos em softwares que são usados para processar as imagens crio-EM que podem começar a lidar com as grandes quantidades de heterogeneidade presentes em muitas das amostras. A preparação da amostra continua sendo um dos maiores gargalos na crio-EM. A quantidade de amostra pode ser limitante e as proteínas tendem a absorver a interface hidrofóbica ar-água durante a vitrificação.

Isso pode levar à desnaturação da amostra, à quebra de complexos proteicos maiores e às orientações de partículas preferidas que estão presentes nas imagens crio-EM. Essas grades aproveitam a interação de alta afinidade entre estreptavidina e biotina para amarrar amostras biotiniladas e protegê-las da interface hidrofóbica ar-água. Podemos trabalhar com quantidades de amostras muito baixas, e a elinação aleatória de biotina das amostras oferece uma estratégia para superar problemas de orientação preferencial que podem ser observados ao usar outras camadas de suporte.