Nosso protocolo pode ser útil nos sistemas e mecanismos. E as informações certas mostram o efeito do estresse físico e da massagem. Nosso sistema de conclusão cíclica local é muito mais simples.
Os métodos convencionais não são necessários para a inserção local. Aplique fita cirúrgica nos membros traseiros bilaterais na posição supina com as articulações do joelho estendidas e as articulações do tornozelo plantar flexionadas. Coloque um fio de alumínio no tronco no nível da coluna L4-5 e enrole o fio em uma configuração espiral ao redor dos membros traseiros com lacunas de cinco milímetros entre cada volta da espiral.
Para minimizar a possibilidade de fuga da fiação, ajuste manualmente a configuração do fio para imobilizar as articulações do quadril em uma posição de 90 graus de abdução. Em seguida, devolva o mouse para sua gaiola doméstica com monitoramento até a recuperação completa. Para medir a pressão muscular gastrocnemius intramuscular coloque o camundongo anestesiado na posição propensa e raspe, despilate e semi-esterilize a pele da panturrilha posterior.
Use um bisturi para fazer uma incisão de dois milímetros na pele desinfetada. E insira uma agulha de 20 medidores no músculo gastrocnemius em um ângulo de 150 a 170 graus à superfície da pele. Em seguida, usando a bainha de plástico da agulha como guia, coloque um sensor telemétrico de pressão arterial na barriga média do músculo gastrocnemius.
Inclua a pele com uma sutura de nylon 4-O. Em seguida, use vários pesos diferentes da unidade cilíndrica para aplicar a compressão cilíndrica local no músculo da panturrilha por um minuto. E monitorar a pressão intramuscular usando o software apropriado para análise de sinais biológicos.
Para o tratamento local de compressão cíclica desengate o rato anestesiado da fiação do membro traseiro. E coloque o animal na posição propensa. Ajuste os membros traseiros para que as articulações do joelho sejam estendidas e as articulações do tornozelo sejam plantar flexionadas com as panturrilhas voltadas para cima.
E mova verticalmente uma unidade de peso cilíndrico, coberta com uma almofada amortecida, sobre o músculo da panturrilha em um hertz por 30 minutos por dia durante sete dias. Após cada ataque diário de compressão religar os membros traseiros do rato antes de devolver o animal à gaiola. No final do experimento despito da superfície posterior da panturrilha e fazer uma incisão da pele para permitir a separação dos músculos gastrocnemius do osso tibiofibular.
Congele rapidamente o tecido muscular colhido em uma solução ótima de composto de temperatura de corte. E use um criostat para obter seções dos músculos gastrocnemius em lâminas de vidro. Para a rotulagem imunohistoquímica descongelar e desidratar as seções secando a temperatura ambiente antes de usar uma caneta hidrofóbica para desenhar um anel em torno das seções teciduais em cada lâmina.
Em seguida, coloque os slides na câmara de umidade. E adicione 100 microliters de tampão de bloqueio para cada lado. Após 30 minutos a temperatura ambiente enxague os slides com duas lavagens de 5 minutos em PBS-T, antes de rotular as seções com 100 microliters do anticorpo primário de interesse durante a noite à temperatura ambiente.
Na manhã seguinte, lave os slides 3 vezes em PBS-T por 5 minutos por lavagem. E rotule as amostras com um anticorpo secundário apropriado por 1 hora à temperatura ambiente, protegido da luz. No final da incubação, lave os slides 3 vezes em PBS-T fresco como demonstrado.
E manche os núcleos com 100 microliters de DAPI por três minutos à temperatura ambiente no escuro. Em seguida, lave o slide mais três vezes. E monte as amostras com um meio de montagem compatível e deslizes de cobertura.
Para análise histomorfométrica, coloque os slides no estágio de um microscópio de fluorescência e visualize as amostras sob um subjetivo de 20 X nos filtros apropriados. Em seguida, no software de análise de imagem medir a área transversal de cada miofibra e contar o número de células expressando os marcadores experimentais de interesse. A área transversal da miofibra gastrocnemius são significativamente diminuídas pela imobilização do membro traseiro.
Além disso, a análise de coloração imunofluorescente revela que as células que expressam MCP-1 e TNF-alfa são significativamente aumentadas nos tecidos musculares gastrocnemius de membros traseiros imobilizados. Em conjunto, com o aumento das células manchadas positivamente com F4/80, a imobilização do membro traseiro parece instigar atrofia muscular da panturrilha, envolvendo respostas inflamatórias locais, incluindo o acúmulo de macrófagos. Entre as várias diferentes magnitudes de compressão cíclica local testadas alterando o peso da unidade cilíndrica, a compressão correspondente a 50 mililitros de ondas de pressão intermuscular de mercúrio, parece aliviar mais eficientemente a diminuição induzida pela imobilização na área transversal do miofibra e aumentar o acúmulo de macrófago nos músculos gastrocnemius.
Uma compressão cíclica local de 66 gramas, aplicada a 1 hertz durante 30 minutos por dia durante 7 dias, alivia significativamente as reduções induzidas pela imobilização observada na área transversal do miofibra dos músculos gastrocnemius. Mais, a compressão cíclica local tempera parcialmente a imobilização induzida à diminuição da força de contração dos músculos tríceps surae. Além disso, a compressão cíclica local tempera o aumento em F4/80 positivo, TNF-alfa positivo, e MCP-1 uma célula positiva no tecido muscular gastrocnemius de membros traseiros imobilizados.
Nossa abordagem fornecerá uma base científica para o aumento muscular do paciente e nossa estratégia potencial para o procedimento preventivo. O rato encontrou a limitação da inatividade física. Usando nosso sistema, começamos a avaliar o maior número de pacientes que não têm músculos no paciente.
Uma maneira industrial local moderada de fazê-lo faz uma atrofiação muscular induzida por imobilização perfeita.
