Name: novel object recognition test for the investigation of learning and memory in mice
Uploaded: 2017-08-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
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Trabalhos citados e anteriormente publicados pelo autor foi apoiado por uma concessão do Instituto Nacional de Saúde Mental (MH088480). O autor gostaria de agradecer o seu antigo mentor, Dr. James O'Donnell pelo seu apoio nesse projeto. Esta publicação é suportada por uma concessão do Instituto Nacional de saúde (T32 DA007135).

todos os procedimentos realizados aqui foram apresentados ao aprovado pelo cuidado do Animal e usar o Comité e realizaram-se seguindo as diretrizes do NIH.
 1. seleção de objetos e configuração Experimental <ol><li>Selecione os objetos que são diferentes o suficiente para ser facilmente discriminados por ratos, mas tem um grau de complexidade (textura, forma, a padronização de cor e brilho, similar etc.) a fim de minimizar qualquer potencial induzido por preferência de objeto que pode influenciar os resultados (ver Ennaceur 2010 para obter uma descrição detalhada do objeto escolha 7).
	<ol><li>Teste de preferência inata e discriminação (consulte as etapas 2 &#38; 3).</li>
		<li>Objetos de uso que são tamanho de rato ou apenas ligeiramente maior para incentivar a exploração ( Figura 1). Para reduzir a preferência induzida, certifique-se de que os ratos são capazes de subir em objetos ou em nenhum objeto, embora a habilidade de subir em um objeto pode aumentar o interesse na exploração (tempo gasto sentado sobre um objeto não é contado para tempo de exploração.)</li>
		<li>Tem pelo menos 2 cópias de cada objeto. No entanto, para minimizar possíveis pistas de odor durante o teste, ter pelo menos 3 de cada objeto, duplicatas para treinamento e outro para teste.</li>
		<li>Usar objetos feitos de material não-quebrável, como perda de um objeto devidos a danos durante a experimentação podem interferir com a continuidade de testes e potencialmente causar danos ou ferimentos ao animal.</li>
		<li>Limpe cuidadosamente os objetos antes e entre uso (etanol a 70% vol/vol é apropriado).</li>
	</ol></li> <li>Para minimizar o stress de iluminação brilhante, use iluminação difusa, baixa, com o centro do labirinto iluminado por volta de 20 lux. Use uma temperatura e umidade semelhante às condições de habitação regular. Se os ratos estão sendo movidos de uma sala de habitação para um quarto diferente para o experimento, aclimatar ratos para sua nova sala pelo menos 1 h antes da utilização de cada dia.</li>
	<li>Pega ratos bem antes do treinamento. Porque o teste baseia-se na tendência natural de roedores para explorar a novidade, reduza qualquer stress ou ansiedade de manipulação que pode interferir com o seu desejo de explorar a arena e, posteriormente, os objetos. Idealmente, lidar com ratos 1 - 2 vezes / dia durante pelo menos 1 min, 1 a 2 semanas antes do teste de 15 , 29.</li>
	<li>Para a arena principal, usar uma câmara quadrada (cerca 40 x 40 cm x 40 cm) feitos de branco ou preto, plástico não-porosas, contrastava com a cor do mouse. Como alternativa, usar uma arena redonda Ed. especificamente, quando usando ratos ansiosos que podem sentar-se nos cantos de um quadrado arena, uma arena redonda pode ser preferível para encorajar o comportamento exploratório 18 , 30.
	<ol><li>Em dia de treinamento, coloque 2 objetos idênticos na diagonal (ou seja, um no canto do nanowatt e um no canto sudeste). Se os objetos são muito leves e podem ser movidos pelo mouse, fixá-las no chão. Removível montagem massa funciona bem.</li>
		<li>Para dia de teste, use a cópia de 3 rd de cada objeto para colocar um objeto familiar e um novo objeto na mesma diagonal como o dia de treinamento ( Figura 2).</li>
		<li>Contrabalançar o uso de cada conjunto de objetos para que cada objeto é usado igualmente como um objeto familiar e como um objeto de romance. Além disso, contrabalançar a localização do objeto romance a cada um dos 4 cantos da arena. Certifique-se de observar qual diagonal é usado para qual animal para que a diagonal usado sobre o dia de treinamento é o mesmo usado no teste dia, para cada rato.</li>
		<li>Limpe cuidadosamente o aparelho e objetos para remover pistas de odor antes e entre uso (etanol a 70% vol/vol é apropriado).</li>
	</ol></li> <li>Coloque a câmara aérea diretamente do aparelho para a exibição ideal de exploração. Só uso software com deteção de nariz-ponto para análise precisa. Se utilizar o software, capture uma imagem de fundo com os objetos no lugar antes de começar. No software, definir a área de exploração para ser aproximadamente 2-3 cm ao redor do objeto.</li>
	<li>Para reduzir a interferência do experimentador, gravar o julgamento e marcá-lo mais tarde. Cega o marcador para as condições experimentais. Se manualmente marcando durante o experimento, certifique-se de que o experimentador é mais de 1 metro da arena e não é visível para o mouse. 
	Nota: Quando o mouse passa sentado no objeto sem ativo vibrissae varrendo ou cheirando não conta como tempo de exploração.</li>
	Exploração de <li>definir como quando o mouse &#39; ruído s está apontado para o objeto e dentro de 2 a 3 cm do objeto, com ativo vibrissae varrendo ou cheirando. Não contam qualquer hora sentado no objeto sem indicação de exploração activa.</li>
</ol> 2. Necessário experiências piloto <ol><li>teste de preferência induzida <ol><li>para habituação, remover o mouse de sua gaiola em casa e colocá-lo no meio da arena aberta. Permitir que o mouse para explorar livremente por 5 min.</li>
		<li>No dia de treinamento (T1), coloque 2 objetos diferentes em quadrantes opostos do aparelho, (i.e., NW e SE cantos). Remova o mouse de sua gaiola em casa e colocá-lo no meio da arena aberta. Permitir a livre exploração de 10 min.</li>
		<li>Calcular o índice de discriminação. Se não houver nenhuma preferência induzida, o índice de discriminação deve ser em ou perto de zero. Quaisquer objetos que mostram a preferência não devem ser usados para ORT.</li>
	</ol></li> <li>Testes para capacidade de discriminação <ol><li>para habituação, remover o rato de sua gaiola em casa e colocá-lo no meio da arena aberta. Permitir que o mouse para explorar livremente por 5 min.</li>
		<li>Na sessão de treino (T1), coloque 2 objetos idênticos em quadrantes opostos. Coloque o mouse no centro da arena e permitir que o mouse para explorar durante 10 min.</li>
		<li>Em teste sessão (T2), lugar de objeto usado durante T1 e um objeto romance em quadrantes opostos (i.e., NW e SE cantos). Sessenta minutos após T1, posicione o mouse no centro da arena e permitir a livre exploração de 10 min.</li>
		<li>Calcular o índice de discriminação. Em um intervalo de retenção de 60 min, o índice de discriminação deve ser acima de 0,25.</li>
	</ol></li></ol> 3. Procedimento experimental <ol><li>habituação <ol><li>remover o mouse de sua gaiola em casa e colocá-lo no meio da arena aberta e vazia. Permita a livre exploração da arena por 5 min. Uma vez que a gaiola em casa está vazia, salvá-lo para uso como uma gaiola de exploração no dia seguinte.</li>
		<li>No final de 5 min, retire o mouse e coloque em uma gaiola de exploração. Não devolva o rato da gaiola original, ou isso pode afetar o comportamento dos ratos restantes a serem testadas.</li>
		<li>Limpe cuidadosamente o aparelho entre ratos usando etanol a 70% vol/vol. 
		Nota: Durante a habituação, comportamento de ansiedade pode ser avaliado calculando o tempo gasto no centro (ver Prut &#38; Belzung 2003 31). Esta é uma métrica útil ao considerar o comprimento de tempo para T1. Ratos de ansiedade mais elevados podem exigir uma sessão de 10 min para alcançar o critério mínimo de exploração.</li>
	</ol></li> <li>Formação (T1) <ol><li>Coloque dois objetos idênticos em quadrantes opostos da arena (i.e., canto NE e canto SW).</li>
		<li>24 h após a habituação, remover o mouse de sua gaiola em casa e coloque-o no centro da arena, equidistante de 2 objetos idênticos.</li>
		<li>Permitir a livre exploração por um período mínimo de 5 min. Se usando uma cepa de ratos que são conhecidos por terem baixa atividade locomotora ou exploração, (ou seja, maioria dos ratos não atingir um mínimo de 20 exploração de s dos dois objetos por 5 min, conforme observado em experiências piloto ou literatura), estender o julgamento de 10 min para todos mic e na coorte.</li>
		<li>No final do julgamento, retire o mouse e coloque na gaiola exploração. Uma vez que a gaiola em casa está vazia, salvá-lo para uso como a gaiola de exploração em testes dia.</li>
		<li>Limpe cuidadosamente o aparelho e objetos entre ratos usando etanol a 70% vol/vol.</li>
	</ol></li> <li>Testing (T2) <ol><li>Coloque um objeto usado durante T1 (ou seja, o objeto familiar) e um objeto romance em quadrantes opostos da arena. Usar os mesmos locais como usado durante T1 para cada mouse.</li>
		<li>Em the T1 para T2 intervalo de escolha, remover o rato de sua gaiola em casa e colocá-lo na arena central, equidistante do objeto familiar e o romance objeto. 
		Nota: Em um intervalo de retenção de 24 h, a maioria dos ratos não será capazes de discriminar entre o objeto familiar e romance (geralmente-0.2 &#60; d2 &#60; 0.2, em comparação com um positivo controle 32). Se testando efeitos nootropic, use este ponto de tempo de investigação para o realce da memória. Para sondar para déficits de memória, use um intervalo de retenção mais curto de algum lugar entre 20 min para 4h, dependendo da cepa de rato.</li>
		<li>Permitir a exploração livre por 10 min. No final do julgamento, retire o mouse e coloque na gaiola exploração.</li>
	</ol></li> <li>Para T1 e T2, marcar o primeiro 5 min. Se o mouse não satisfaz o tempo mínimo de exploração de 20 s para ambos os objetos, continuar marcando passado 5 min até exploração total for superior a 20 s.</li>
</ol> 4. Análise de dados <ol><li>Os critérios de exclusão <ol><li>durante ambos treinamento (T1) e teste (T2), calcular o tempo de exploração total para os dois objetos para cada sessão (e1 e e2). A maioria dos ratos devem alcançar uma exploração mínima total para ambos os objetos de 20 s por 5 min.</li>
		<li>Tempo estender T1 e T2, a 10 min para cepas de ratos que têm baixa exploração e não satisfazem este critério mínimo por 5 min, como observado durante o teste piloto.</li>
		<li>Marcar o comportamento por 5 min ou para além de 5 min até atingirem o critério mínimo 20 de s.</li>
		<li>Se ratos não atingir um mínimo de s 20 da prospecção para ambos os objetos ou T1 ou T2 em 10 min, excluir da análise, como não pode ser confirmado gastaram bastante tempo explorando para aprender/discriminar.</li>
	</ol></li> <li>Absolutos vs análise relativa Nota: fórmulas diferentes para análise e sua relação com o outro podem ser vistas na tabela 1.
	E1 <ol><li>calcular o tempo de exploração total durante o treino de 2 objetos idênticos, onde a1 e a2 são os objetos idênticos. 
		e1 = a1 + a2</li>
		E2 <li>calcular como o tempo total de exploração durante o teste para o objeto familiar (a) e o romance objeto b. 
		e2 = a + b</li>
		<li>Calcular d1 simplesmente como o tempo gasto explorando o romance objeto menos tempo a explorar o objeto familiar. A medida de discriminação absoluta (d1) não leva em conta as diferenças em vez de exploração entre os ratos ou tratamento grupos, embora em determinadas circunstâncias, pode ser uma medida mais sensível 2. 
		d1 = b-a</li>
		<li>Calcular d2 como o tempo passado a explorar o objeto novo menos o tempo a explorar o objeto familiar dividido pelo tempo total exploração. A medida mais comumente usada é um valor de discriminação relativa, muitas vezes referido como o índice de discriminação (d2), que não é influenciado pelas diferenças no tempo de exploração. Isto significa que todos os valores vão cair entre -1 e + 1. 
		d2 = d1/e2</li>
		<li>, Alternativamente, calcular o índice (d3) de reconhecimento ou preferência 3. Este é o tempo gasto a explorar o novo objeto dividido pelo tempo total. Isto significa que todos os valores cairão entre 0 e 1. Muitas vezes é multiplicado por 100 e usado como valor de percentagem. 
		d3 = b/e2 * 100</li>
	</ol></li> <li>Análise estatística <ol><li>usando os valores de discriminação média para cada grupo, determinar o desempenho da memória usando o One-Way ANOVA. Para posterior análise, fazer comparações bidirecional post hoc com os grupos de controle positivo/negativo e condição do veículo Tratado vs.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Ennaceur, A., Meliani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats+III.+Spatial+vs.+non-spatial+working+memory.">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats III. Spatial vs. non-spatial working memory.</a> Behav. Brain Res. 51 (1), 83-92 (1988).</li><li>Akkerman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+recognition+testing:+methodological+considerations+on+exploration+and+discrimination+measures.">Object recognition testing: methodological considerations on exploration and discrimination measures.</a> Behav. 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F., Psychobiologie, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+open+field+as+a+paradigm+to+measure+the+effects+of+drugs+on+anxiety-like+behaviors+a+review.">The open field as a paradigm to measure the effects of drugs on anxiety-like behaviors a review.</a> Eur. J. Pharmacol. 463, 3-33 (2003).</li><li>Akkerman, S., Prickaerts, J., Steinbusch, H. W. M., Blokland, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+recognition+testing:+statistical+considerations.">Object recognition testing: statistical considerations.</a> Behav. Brain Res. 232 (2), 317-322 (2012).</li><li>Balderas, I., Rodriguez-Ortiz, C. J., Bermudez-Rattoni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieval+and+reconsolidation+of+object+recognition+memory+are+independent+processes+in+the+perirhinal+cortex.">Retrieval and reconsolidation of object recognition memory are independent processes in the perirhinal cortex.</a> Neuroscience. 253, 398-405 (2013).</li><li>de curtis, M., Pare, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rhinal+cortices:+a+wall+of+inhibition+between+the+neocortex+and+the+hippocampus.">The rhinal cortices: a wall of inhibition between the neocortex and the hippocampus.</a> Prog. Neurobiol. 74 (2), 101-110 (2004).</li><li>Brown, M. W., Barker, G. R. I., Aggleton, J. P., Warburton, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+pharmacological+interventions+indicate+concerning+the+role+of+the+perirhinal+cortex+in+recognition+memory.">What pharmacological interventions indicate concerning the role of the perirhinal cortex in recognition memory.</a> Neuropsychologia. 50 (13), 3122-3140 (2012).</li><li>Moore, S. J., Deshpande, K., Stinnett, G. S., Seasholtz, A. F., Murphy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+short-term+to+long-term+memory+in+the+novel+object+recognition+paradigm.">Conversion of short-term to long-term memory in the novel object recognition paradigm.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 105, 174-185 (2013).</li><li>Suzuki, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomy,+physiology+and+functions+of+the+perirhinal+cortex.">The anatomy, physiology and functions of the perirhinal cortex.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 6, 179-186 (1996).</li><li>Wan, H., Aggleton, J. P., Brown, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+contributions+of+the+hippocampus+and+perirhinal+cortex+to+recognition+memory.">Different contributions of the hippocampus and perirhinal cortex to recognition memory.</a> J. Neurosci. 19 (3), 1142-1148 (1999).</li><li>Warburton, E. C., Brown, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Findings+from+animals+concerning+when+interactions+between+perirhinal+cortex,+hippocampus+and+medial+prefrontal+cortex+are+necessary+for+recognition+memory.">Findings from animals concerning when interactions between perirhinal cortex, hippocampus and medial prefrontal cortex are necessary for recognition memory.</a> Neuropsychologia. 48 (8), 2262-2272 (2010).</li></ol>

O autor não tem nada para divulgar.

A ORT é um método eficiente e flexível para estudar aprendizagem e memória em camundongos. Ao configurar um experimento, é importante considerar uma série de variáveis que podem afetar o resultado. Conforme discutido nos resultados representativos, a cepa de rato afetará ambos intervalo de tempo e de retenção de exploração. Uma diminuição no tempo de exploração pode inclinar ou máscara resulta em uma discriminação absoluta análise2,3,</su...

O teste de reconhecimento de objeto (ORT), também conhecido como o teste de reconhecimento objeto romance (NOR), é um meio relativamente rápido e eficiente para testar as diferentes fases da aprendizagem e memória em camundongos. Foi originalmente descrita por Ennaceur e Delacour em 1988 e usado principalmente em ratos1; no entanto, desde então, tem sido adaptado com sucesso para uso em camundongos2,3,4,5,6,7. O teste baseia-se em apenas três sessões: uma habituação sessão, sessão de um treinamento e teste de uma sessão. Treinamento envolve simplesmente a exploração visual de dois objetos idênticos, enquanto a sessão de teste envolve substituindo um dos objetos anteriormente explorados com um novo objeto. Porque os roedores têm uma preferência inata por novidade, um roedor que lembra o objeto familiar vai gastar mais tempo explorando o objeto romance7,8,9.
A principal vantagem da ORT sobre outros testes de memória roedores é que baseia-se na tendência natural dos roedores para explorar novidade8. Portanto, não há nenhuma necessidade de inúmeras sessões de treinamento ou qualquer reforço positivo ou negativo para motivar o comportamento. Isso significa que a ORT é muito menos estressante, em relação a outros testes10,11,12,13,14,15e requer significativamente testes de menos tempo para executar do que outros usados com memória, como o labirinto de água Morris ou labirinto de Barnes, que pode levar até uma semana ou mais. Consequentemente, as condições da ORT mais se assemelham aqueles usados no estudo de cognição humana, aumentando a validade ecológica do teste sobre muitos outros testes de memória de roedores. Da mesma forma, porque ORT é uma tarefa simples recordação visual, tem sido adaptado com sucesso para uso em numerosas espécies, incluindo os seres humanos e primatas não-humanos, para avaliar aspectos entre espécies diferentes de memória declarativa 2,16 ,17. Finalmente, o ORT pode ser facilmente modificado para examinar as diferentes fases da aprendizagem e memória (ou seja, aquisição, consolidação ou recordação), para avaliar diferentes tipos de memória (por exemplo, memória espacial), ou para a avaliação de retenção diferente intervalos (ou seja, memória de longo prazo curto prazo vs ).
A versatilidade da ORT oferece uma plataforma para inúmeras aplicações. Estudos podem fazer uso de agentes farmacológicos para interromper ou melhorar a memória. Variar o tempo de administração de drogas antes ou depois do treino ou antes do teste pode dica no neural subjacente mecanismos que levam à interrompido ou reforçada memória6,18,19, 20. de forma semelhante, a tecnologia de optogenetic pode ser usado para estes mesmo vários pontos de tempo para examinar a ativação/inibição neural que contribui para as diferentes fases de aprendizagem e memória. A ORT é também adequado para avaliar as diferenças em animais transgénicos, em estudos de lesão, modelos neurodegenerativas ou no envelhecimento estudos21,22,23,24, 25 , 26 , 27 , 28. o tempo entre o treinamento e teste, conhecido como o intervalo de retenção, pode ser alterado para avaliar qualquer uma dessas alterações na memória de curto e longo prazo26. Em última análise, a ORT pode ser usado como uma ferramenta para estudar alterações farmacológicas, genéticas e neurológicas de aprendizagem e memória, ou estas ferramentas podem ser usadas para estudar a base do aprendizado e memória no ORT.

<table><tbody><tr><td>Open Field Box</td><td>Panlab/Harvard Apparatus</td><td>LE800SC</td><td>Available in grey, white, or black</td></tr><tr><td>ANY-maze</td><td>Stoelting Co.</td><td>60000</td><td>Behavior tracking system</td></tr><tr><td>EthoVisionXT 12</td><td>Noldus</td><td></td><td>Behavior tracking system; requires 3 point tracking</td></tr><tr><td>Video Camera</td><td>Any</td><td></td><td>Video camera should be mounted directly overhead of the apparatus</td></tr><tr><td>70% Ethanol&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>Prior to starting testing and in between trials, each object should be carefully cleaned. The floor and walls of the apparatus should also be cleaned.&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

novel object recognition test for the investigation of learning and memory in mice

O teste de reconhecimento de objeto (ORT) é um ensaio comportamental comumente utilizado para a investigação de vários aspectos da aprendizagem e memória em camundongos. A ORT é bastante simples e pode ser concluída em 3 dias: dia de habituação, dia de treinamento e teste de dia. Durante o treinamento, o mouse é permitido explorar 2 objetos idênticos. No dia do teste, um dos objetos de treinamento é substituído com um novo objeto. Porque os ratos têm uma preferência inata por novidade, se o mouse reconhece o objeto familiar, ele passará a maior parte de seu tempo no romance objeto. Devido a esta preferência inata, não há nenhuma necessidade para reforço positivo ou negativo ou tempo horários de treinamento. Além disso, o ORT também pode ser modificada para numerosas aplicações. O intervalo de retenção pode ser encurtado para examinar a memória de curto prazo, ou alongado para sondar a memória de longo prazo. Intervenção farmacológica pode ser usada em vários momentos antes do treinamento, após o treinamento, ou antes da recordação para investigar as diferentes fases da aprendizagem (ou seja, aquisição, cedo ou tarde consolidação ou recordação). Em geral, a ORT é um teste relativamente baixo-stress, eficiente para a memória em ratos e é apropriado para a detecção de alterações neuropsicológicos após manipulação farmacológica, biológica ou genética.

Uma configuração geral e experimental para a ORT é mostrada na Figura 2. Na habituação ratos dia (T0) são colocados na arena vazia por 5 min. de vinte e quatro horas depois, os ratos são colocados de volta na câmara com 2 objetos idênticos e permitiu explorar livremente por até 10 min (T1). Em testes dia (T2), os ratos são novamente colocados na arena, mas com um objeto familiar e um objeto de romance e permitiu explorar para até 10 min. O interva...

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Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

O teste de reconhecimento de objeto (ORT) é um ensaio simples e eficiente para a avaliação da aprendizagem e memória em camundongos. A metodologia é descrita abaixo.

Teste de reconhecimento de objeto romance para a investigação da aprendizagem e memória em ratos

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

novel-object-recognition-test-for-investigation-learning-memory

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Behavior

72.1K visualizações.  Icahn School of Medicine at Mount Sinai. O teste de reconhecimento de objeto (ORT) é um ensaio simples e eficiente para a avaliação da aprendizagem e memória em camundongos. A metodologia é descrita abaixo.

Vídeo: Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

Study Motor Skill Learning by Single-pellet Reaching Tasks in Mice

Reaching for and retrieving objects require precise and coordinated motor movements in the forelimb. When mice are repeatedly trained to grasp and retrieve food rewards positioned at a specific location, their motor performance (defined as accuracy and speed) improves progressively over time, and plateaus after persistent training. Once such reaching skill is mastered, its further maintenance does not require constant practice. Here we introduce a single-pellet reaching task to study the acquisition and maintenance of skilled forelimb movements in mice. In this video, we first describe the behaviors of mice that are commonly encountered in this learning and memory paradigm, and then discuss how to categorize these behaviors and quantify the observed results. Combined with mouse genetics, this paradigm can be utilized as a behavioral platform to explore the anatomical underpinnings, physiological properties, and molecular mechanisms of learning and memory.

Persistent practice improves the precision of coordinated movements.&#160;Here we introduce a single-pellet reaching task, which is designed to assess the learning and memory of forelimb skill in mice.&#160;

Estudo Motor Habilidade Aprendizagem por Single-pelota Tarefas atingindo em Ratos

Reaching for and retrieving objects require precise and coordinated motor movements in the forelimb. When mice are repeatedly trained to grasp and ...

Comportamento

Novel Object Exploration as a Potential Assay for Higher Order Repetitive Behaviors in Mice

Restricted, repetitive behaviors (RRBs) are a core feature of autism spectrum disorder (ASD) and disrupt the lives of affected individuals. RRBs are commonly split into lower-order and higher-order components, with lower order RRBs consisting of motor stereotypies and higher order RRBs consisting of perseverative and sequencing behaviors. Higher order RRBs are challenging to model in mice. Current assays for RRBs in mice focus primarily on the lower order components, making basic biomedical research into potential treatments or interventions for higher-order RRBs difficult. Here we describe a new assay, novel object exploration. This assay uses a basic open-field arena with four novel objects placed around the perimeter. The test mouse is allowed to freely explore the arena and the order in which the mouse investigates the novel objects is recorded. From these data, patterned sequences of exploration can be identified, as can the most preferred object for each mouse. The representative data shared here and past results using the novel object exploration assay illustrate that inbred mouse strains do demonstrate different behavior in this assay and that strains with elevated lower order RRBs also show elevated patterned behavior. As such, the novel object exploration assay appears to possess good face validity for higher order RRBs in humans and may be a valuable assay for future studies investigating novel therapeutics for ASD.

Higher order restricted, repetitive behaviors (RRBs) disrupt the lives of affected individuals. These behaviors are challenging to model in rodents, making basic biomedical research into potential treatments or interventions for RRBs difficult. Here we describe novel object exploration as a potential assay for higher order RRBs in mice.

Exploração objeto romance como um ensaio de Potencial de ordem superior comportamentos repetitivos em Ratos

Restricted, repetitive behaviors (RRBs) are a core feature of autism spectrum disorder (ASD) and disrupt the lives of affected individuals.  RRBs are ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in rodents. In our laboratory, we evaluated the two types of memory in more than 30 strains of genetically engineered mice using the automated version of this apparatus. Here, we present the modified T-maze apparatus operated by a computer with a video-tracking system and our protocols in a movie format. The T-maze apparatus consists of runways partitioned off by sliding doors that can automatically open downward, each with a start box, a T-shaped alley, two boxes with automatic pellet dispensers at one side of the box, and two L-shaped alleys. Each L-shaped alley is connected to the start box so that mice can return to the start box, which excludes the effects of experimenter handling on mouse behavior. This apparatus also has an advantage that in vivo microdialysis, in vivo electrophysiology, and optogenetics techniques can be performed during T-maze performance because the doors are designed to go down into the floor. In this movie article, we describe T-maze tasks using the automated apparatus and the T-maze performance of &alpha;-CaMKII+/- mice, which are reported to show working memory deficits in the eight-arm radial maze task. Our data indicated that &alpha;-CaMKII+/- mice showed a working memory deficit, but no impairment of reference memory, and are consistent with previous findings using the eight-arm radial maze task, which supports the validity of our protocol. In addition, our data indicate that mutants tended to exhibit reversal learning deficits, suggesting that &alpha;-CaMKII deficiency causes reduced behavioral flexibility. Thus, the T-maze test using the modified automatic apparatus is useful for assessing working and reference memory and behavioral flexibility in mice.

This article presents the protocol of T-maze tests using a modified automated apparatus for assessing the learning and memory functions in mice.

T-maze Alternância forçado e Tarefas esquerda-direita para a Avaliação da Discriminação de Trabalho e Memória de Referência em Ratos

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Neurociência

Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various physiological or pathological changes. The object location task (OLT) and the novel object recognition task (NORT) are two effective behavioral tasks commonly used to reveal the function and relative health of specific brain regions involved in memory. While both of these tests exploit the inherent preference of mice for the novelty to reveal memory for previously encountered objects, the OLT primarily evaluates spatial learning, which relies heavily on hippocampal activity. The NORT, in contrast, evaluates non-spatial learning of object identity, which relies on multiple brain regions. Both tasks require an open-field-testing arena, objects with equivalent intrinsic value to mice, appropriate environmental cues, and video recording equipment and the software. Commercially available systems, while convenient, can be costly. This manuscript details a simple, cost-effective method for building the arenas and setting up the equipment necessary to perform the OLT and NORT. Furthermore, the manuscript describes an efficient testing protocol that incorporates both OLT and NORT and provides typical methods for data acquisition and analysis, as well as representative results. Successful completion of these tests can provide valuable insight into the memory function of various mouse model systems and appraise the underlying neural regions that support these functions.

Here we provide a protocol which includes comprehensive instructions for the economical establishment of murine object location and novel object recognition behavioral testing, including the design, cost, and construction of required equipment as well as execution of behavioral testing, data collection, and analysis.

Reconhecimento de objetos novos e localização de objeto comportamental testes em ratos em um orçamento

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various ...

A Behavioral Test Battery for the Repeated Assessment of Motor Skills, Mood, and Cognition in Mice

Pharmacological and toxicological studies in neurodegeneration require comprehensive behavioral analysis in mice because motor dysfunctions and dysfunctions in mood and cognition are common and often shared symptoms in neurodegenerative diseases. Shown here is a behavioral test battery for motor, mood, and cognition, which can be repeatedly tested in a longitudinal study. This battery assesses the overall behavioral phenotype in mice by examining each domain of behavior with at least two independent well-accepted tests (i.e., open-field test and rotarod test for motor function, social interaction test, elevated plus maze test, and forced swim test for emotional function, and Morris water maze test and novel object recognition test for cognitive function). Therefore, this sensitive and comprehensive test battery is a powerful tool for the study of behavioral alternation in neurodegeneration.

A comprehensive behavioral test battery of motor skills, mood&#8212;including social interaction, depression, and anxiety&#8212;and cognition is designed for the repeated assessment of neurodegeneration-related behavioral changes in mice.

Uma bateria de testes comportamentais para a avaliação repetida das habilidades motoras, humor e cognição em ratos

Pharmacological and toxicological studies in neurodegeneration require comprehensive behavioral analysis in mice because motor dysfunctions and ...

Assessment of Memory Function in Pilocarpine-induced Epileptic Mice

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal model of epilepsy, we generated pilocarpine-treated chronic epileptic mice. We present a protocol for three different behavioral tests using these epileptic mice: novel object location (NL), novel object recognition (NO), and pattern separation (PS) tests to evaluate learning and memory for places, objects, and contexts, respectively. We explain how to set the behavioral apparatus and provide experimental procedures for the NL, NO, and PS tests following an open field test that measures the animals&#8217; basal locomotor activities. We also describe the technical advantages of the NL, NO, and PS tests with respect to other behavioral tests for assessing memory function in epileptic mice. Finally, we discuss possible causes and solutions for epileptic mice failing to make 30 s of good contact with the objects during the familiarization sessions, which is a critical step for successful memory tests. Thus, this protocol provides detailed information about how to assess epilepsy-associated memory impairments using mice. The NL, NO, and PS tests are simple, efficient assays that are appropriate for the evaluation of different kinds of memory in epileptic mice.

This article presents experimental procedures for assessing memory impairments in pilocarpine-induced epileptic mice. This protocol can be used to study the pathophysiologic mechanisms of epilepsy-associated cognitive decline, which is one of the most common comorbidities in epilepsy.

Avaliação da função de memória em camundongos epilépticos induzidos por pilocarpina

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal ...

Simultaneous Monitoring of Wireless Electrophysiology and Memory Behavioral Test as a Tool to Study Hippocampal Neurogenesis

Brainwaves amplitude obtained from electroencephalography (EEG) has been well-recognized as a basis for cognitive capacity, memory, and learning on animals and humans. Adult neurogenesis mechanism is also linked to memory and learning improvement. Traditionally, researchers used to assess learning and memory parameters in rodent models by behavioral tasks. Therefore, the simultaneous monitoring of behavioral changes and EEG is particularly interesting in correlating data between brain activity and task-related behaviors. However, most of the equipment required to perform both studies are either complex, expensive, or uses a wired setup network that hinders the natural animals&#8217; movement. In this study, EEG was recorded with a wireless electrophysiology device along with the execution of a novel object recognition task (NORT). The animal&#8217;s behavior was monitored simultaneously by a video tracking system. Both recordings were analyzed offline by their timestamps which were synched to link EEG signals with the animal&#8217;s actions. Subjects consist of adult Wistar rats after medium-term environmental enrichment treatment. Six skull screw electrodes were fixed in pairs on both hemispheres over frontal, central, and parietal regions and were referenced to an electrode located posterior of the nasal bone. NORT protocol consists of exposing the animal to two identical objects for 10 min. After 2 h and 24 h, one of the objects was replaced with a novel one. Exploration time for each object was monitored by a behavioral tracking software (BTS) and EEG data recording. The analysis of the EEG synced with behavioral data consists of estimations of alpha and beta relative band power and comparisons between novel object recognition versus familiar object exploration, between three experimental stages. In this manuscript, we have discussed electrodes manufacturing process, epidural electrodes implantation surgery, environmental enrichment protocol, NORT protocol, BTS setup, EEG &#8211; BTS coupling for simultaneous monitoring in real-time, and EEG data analysis based on automatic events detection.

The protocol presented here provides information on the simultaneous electroencephalography (EEG) and behavioral assessment in real-time. We have discussed all steps involved in this protocol as an attractive solution for researchers in many fields of neuroscience, particularly in learning and memory areas.

Monitoramento Simultâneo da Eletrofisiologia Wireless e Teste Comportamental de Memória como Ferramenta para Estudo da Neurogênese do Hipocampo

Brainwaves amplitude obtained from electroencephalography (EEG) has been well-recognized as a basis for cognitive capacity, memory, and learning on ...

A Within-Subject Experimental Design using an Object Location Task in Rats

Object place recognition is a prominent method used to investigate spatial memory in rodents. This object place recognition memory forms the basis of the object location task. This paper provides an extensive protocol to guide the establishment of an object location task with the option of up to four repetitions using the same cohort of rats. Both weak and strong encoding protocols can be used to study short- and long-term spatial memories of varying strength and to enable the implementation of relevant memory-inhibiting or -enhancing manipulations. In addition, repetition of the test with the counterbalancing presented here allows the combination of results from two or more tests for within-subject comparison to reduce variability between rats. This method helps to increase statistical power and is strongly recommended, particularly when running experiments that produce high variation in individual behavior. This directly refines the study by increasing the data obtained from each animal and reducing the overall number of animals needed.&#160;Finally, implementation of the repeated object location task increases the efficiency of studies that involve surgical procedures by saving time and labor.

This protocol provides detailed steps for an object location task with four repetitions using the same cohort of rats. Weak and strong encoding can produce short- and long-term memories. The flexibility of the protocol with repetition can be beneficial for studies involving surgical operations by saving time and labor.

Um design experimental de sujeito interno usando uma tarefa de localização de objetos em ratos

Object place recognition is a prominent method used to investigate spatial memory in rodents. This object place recognition memory forms the basis of the ...

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-&#946; and Tau Neuropathology

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. The paradigm includes tests for spontaneous alternation in a Y-maze, novel object recognition, and limb clasping. These tests were selected because they: 1) interrogate function of cognitive or motor domains and the correlate neural circuitry relevant to the human disease state, 2) have clearly defined endpoints, 3) have easily implementable quality control checks, 4) can be run in a moderate throughput format, and 5) require little intervention by the investigator. These methods are designed for investigators looking to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks, or functional motor behaviors associated with Alzheimer's disease mouse models. The methods described here use behavioral tests that engage a number of different brain regions including hippocampus and various cortical areas. Investigators that desire cognitive tests that specifically assess cognition mediated by a single brain region could use these techniques to supplement other behavioral tests.

Described here is a staged, behavioral screening approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. These methods are optimized to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks.

Avaliação de Alternância Espontânea, Reconhecimento de Objetos Novos e Clasping de Membros em Modelos de Rato Transgênico de Neuropatologia Amilóide-β e Tau

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional ...

Medicina

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.