Name: induction of drug-induced, autoimmune hepatitis in balb/c mice for the study of its pathogenic mechanisms
Uploaded: 2020-05-29T12:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms at JoVE.com

Njoku 박사는이 모델의 공식화를 초래 한 그의 지침과 통찰력있는 토론에 대해 Dr. Noel R. Rose, MD PhD를 인정하고 싶습니다.

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	<li>Castiella, A., Zapata, E., Lucena, M. I., Andrade, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-induced+autoimmune+liver+disease:+A+diagnostic+dilemma+of+an+increasingly+reported+disease.">Drug-induced autoimmune liver disease: A diagnostic dilemma of an increasingly reported disease.</a> World J. Hepatology. 6 (4), 160-168 (2014).</li><li>Bjornsson, E. S., Bergmann, O. M., Bjornsson, H. K., Kvaran, R. B., Olafsson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+presentation,+and+outcomes+in+patients+with+drug-induced+liver+injury+in+the+general+population+of+Iceland.">Incidence, presentation, and outcomes in patients with drug-induced liver injury in the general population of Iceland.</a> Gastroenterology. 144 (7), 1419-1425 (2013).</li><li>Castiella, A., Lucena, M. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+drug-induced,+immune-mediated+hepatitis,+interleukin-33+reduces+hepatitis+and+improves+survival+independently+and+as+a+consequence+of+FoxP3++T-cell+activity.">In drug-induced, immune-mediated hepatitis, interleukin-33 reduces hepatitis and improves survival independently and as a consequence of FoxP3+ T-cell activity.</a> Cellular and Molecular Immunology. , (2018).</li><li>Lohse, A. W., Manns, M., Dienes, H. P., Meyer zum Buschenfelde, K. H., Cohen, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+hepatitis:+disease+induction,+time+course+and+T-cell+reactivity.">Experimental autoimmune hepatitis: disease induction, time course and T-cell reactivity.</a> Hepatology. 11 (1), 24-30 (1991).</li><li>McCarthy, E. K., Vakos, A., Cottagiri, M., Mantilla, J. J., Santhanam, L., Thomas, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+Shared+Cytochrome+p4502E1+Epitope+Found+in+Anesthetic+Drug-Induced+and+Viral+Hepatitis.">Identification of a Shared Cytochrome p4502E1 Epitope Found in Anesthetic Drug-Induced and Viral Hepatitis.</a> mSphere. 3 (5), (2018).</li><li>Cho, J., Kim, L., Li, Z., Rose, N. R., Talor, M. V., Njoku, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+bias+in+experimental+immune-mediated,+drug-induced+liver+injury+in+BALB/c+mice:+suggested+roles+for+Tregs,+estrogen,+and+IL-6.">Sex bias in experimental immune-mediated, drug-induced liver injury in BALB/c mice: suggested roles for Tregs, estrogen, and IL-6.</a> PLoS. One. 8 (4), 61186 (2013).</li><li>Satoh, H., Gillette, J. R., Takemura, T., Ferrans, V. J., Jelenich, S. E., Kenna, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+immunological+basis+of+halothane-induced+hepatotoxicity.">Investigation of the immunological basis of halothane-induced hepatotoxicity.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 197, 657-673 (1986).</li><li>Eliasson, E., Kenna, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+P450+2E1+is+a+cell+surface+autoantigen+in+halothane+hepatitis.">Cytochrome P450 2E1 is a cell surface autoantigen in halothane hepatitis.</a> Molecular Pharmacology. 50 (3), 573-582 (1996).</li><li>Bourdi, M., Chen, W., Peter, R. M., Martin, J. L., Buters, J. T., Nelson, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cytochrome+P450+2E1+is+a+major+autoantigen+associated+with+halothane+hepatitis.">Human cytochrome P450 2E1 is a major autoantigen associated with halothane hepatitis.</a> Chemical Research in Toxicology. 9 (7), 1159-1166 (1996).</li><li>Njoku, D. B., Li, Z., Washington, N. D., Mellerson, J. L., Talor, M. V., Sharma, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppressive+and+pro-inflammatory+roles+for+IL-4+in+the+pathogenesis+of+experimental+drug-induced+liver+injury.">Suppressive and pro-inflammatory roles for IL-4 in the pathogenesis of experimental drug-induced liver injury.</a> European Journal of Immunology. 39 (6), 1652-1663 (2009).</li><li>Aithal, G. P., Ramsay, L., Daly, A. K., Sonchit, N., Leathart, J. 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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+free+amino+groups+in+proteins+by+trinitrobenzenesulfonic+acid.">Determination of free amino groups in proteins by trinitrobenzenesulfonic acid.</a> Analytical Biochemistry. 14 (3), 328-336 (1966).</li><li>Christen, U., Burgin, M., Gut, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Halothane+metabolism:+immunochemical+evidence+for+molecular+mimicry+of+trifluoroacetylated+liver+protein+adducts+by+constitutive+polypeptides.">Halothane metabolism: immunochemical evidence for molecular mimicry of trifluoroacetylated liver protein adducts by constitutive polypeptides.</a> Molecular Pharmacology. 40 (3), 390-400 (1991).</li><li>Christen, U., Quinn, J., Yeaman, S. J., Kenna, J. G., Clarke, J. B., Gandolfi, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+dihydrolipoamide+acetyltransferase+subunit+of+the+human+pyruvate+dehydrogenase+complex+as+an+autoantigen+in+halothane+hepatitis.+Molecular+mimicry+of+trifluoroacetyl-lysine+by+lipoic+acid.">Identification of the dihydrolipoamide acetyltransferase subunit of the human pyruvate dehydrogenase complex as an autoantigen in halothane hepatitis. Molecular mimicry of trifluoroacetyl-lysine by lipoic acid.</a> European Journal of Biochemistry. 223 (3), 1035-1047 (1994).</li></ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

이 프로토콜의 강점은 재현성에 있습니다. 따라서 제안 된 단계를 준수하는 것이 중요합니다. 면역원의 제형은 일부에 대한 장벽이 될 수 있고; 그러나 우리는 문서에 설명 된 에피토프를 사용하여 모델을 재현하여 간장의 S100 분획을 분리 할 필요가 없습니다. 추가적인 에피토프 또는 단백질이 변경되어 면역화 후 간염을 유발할 수 있을 가능성이 높습니다. 그러나 우리는 신뢰할 수있는 결과와 함께 사용한 단백질을 설명합니다. 몇몇 단백질은 할로겐화 마취제 노출시 트리플루오로아세틸화되는 것으로 입증되었다. 에피토프 확산으로 인해 가장 가능성이 높으며, 이들 단백질 중 일부는 또한 그들의 천연, 비트리플루오로아세틸화 상태에서 자가항체의 표적이 된다. 일례로서, 피루베이트 데하이드로게나제 복합체 (PDH-E2)의 E2 서브유닛은 TFA-부가물 내의 TFA-모이어티에 대한 구조적 유사성을 갖는 에피토프 (리포산 보철 그룹)를 운반한다. 할로탄 간염 환자에서 생성된 항체는 TFA-단백질 및 PDH-E2 20,21에 교차 반응성인 것으로 입증되었다.
우리의 DIH 모델은 마우스의 뒤쪽을 따라 CFA에서 유화되는 두 가지 예방 접종이 필요합니다. 우리는 CFA를 사용한 풋패드 주사가 마우스의 통증과 고통과 관련이 있다는 것을 알고 있습니다. 따라서 실험 DIH 모델의 개발에는 몇 가지 실험 시험이 포함되었습니다. CFA를 사용하여 하나의 면역화를 사용하여 모델을 평가했을 때, 두 번째 면역원과 함께 불완전한 프로인트의 보조제 (IFA) 또는 IFA를 사용하여 두 번째 면역화로 두 번째 면역화했을 때, 간 염증은 발생하지 않았다. 대조적으로, 우리가 CFA로 두 번의 면역화를 사용하여 면역원으로 마우스를 면역화했을 때, 상당한 간 염증이 존재하였다. 자가 면역 간염의 또 다른 모델에 대한 원래의 설명에는 우리와 유사한 연구가 포함되었으며 상당한 간 염증을 입증하기 위해 CFA로 두 번의 예방 접종이 필요했습니다 8. 그럼에도 불구하고, 우리는 CFA없이 염증을 최적화하려고 시도하기 위해 문헌 검색을 사용하여 보조제를 지속적으로 재평가합니다. 예로서, B 세포 반응을 증강시킬 수 있는 잘 알려진 아쥬번트 타이터맥스가 있다; 그러나 항체가 DIH의 구성 요소이지만, 우리와 다른 사람들은 모델14에서 T 세포 반응에 중요한 역할을 입증했습니다.
신뢰할 수있는 모델의 개발은 DIH의 병인에 대한 조사를 용이하게합니다. 우리는 간 조직학 및 면역 세포가이 모델의 다양한 단계에서 안정적으로 평가 될 수 있음을 보여줍니다. 우리는 DIH의 개발을 연구하는 데 활용 될 수있는 항원 특이적 T 세포, 혈청 항체 및 조직 사이토 카인의 확인을 입증합니다. 우리는 염증이있는 간에서 세포를 분리하는 방법을 시연하고 헤파린의 사용을 제안합니다. 그러나 우리는 헤파린없이이 기술을 수행했으며 결과는 구별 할 수 없었습니다. 추가적으로, 조직 파괴의 현재 방법은 또한 간에서 세포를 방출 할 수있다.
최근에는 차세대 시퀀싱 및 정량적 PCR과 같은 현대적인 도구를 활용하고 재현 가능한 결과를 경험했습니다. 우리는 ILLB/c 마우스를 대조군 마우스로 활용할 수 있도록 ILLB/c 배경에서 모두 파생된 IL-4, IL-4 수용체, IL-6, IL-6 수용체 IL-33 및 ST2 결핍 마우스를 사용한 DIH에 관한 결과를 발표했습니다. DIH의 이러한 모델의 향후 응용은 DIH의 병인에 대한 책임이 있는 이전에 인식되지 않았던 메카니즘을 밝히기 위해 CRISPR 기술의 활용 이외에 마우스에서 노크의 개발을 포함할 것이다.

이 방법의 목적은 생체 내에서 발생하는 약물 유도 자가면역 간염의 마우스 모델을 기술하고이 질병의 분자적, 면역 학적 및 유전 적 기초를 조사하는 데 어떻게 활용 될 수 있는지 입증하는 것입니다. 우리 연구의 장기적인 목적은 감수성 환자에서 DIH를 연구함으로써 만성 간 염증 및 부상의 발달을 담당하는 메커니즘을 밝히는 것입니다. 간 질환과 간경변은 25 세에서 64 세 사이의 성인에서 여섯 번째로 흔한 사망 원인을 구성합니다. 약물 유발 자가면역 간염(DIH)이라고도 하는 특발성 DILI는 미국에서 급성 간 기능 부전의 세 번째로 흔한 원인입니다. DIH는 자가면역간염 1형 간염 환자의 약 9~12%에서 관찰되는 가장 흔한 간 약물-유도성 과민증 과정이다. DIH 환자의 압도적 인 대다수는 여성 2,3,4입니다. DIH의 유형은 이소플루란, 세보플루란, 데스플루란 또는 할로탄과 같은 할로겐화 휘발성 마취제를 투여한 후 감수성이 있는 개체에서 발생합니다. 이러한 마취제는 신진 대사의 반응성 산물과 간 단백질에 공유적으로 결합하여 알레르기 또는 자가면역 반응을 유도 할 수있는 새로운 자기 항원을 만듭니다5.
마취제 및 DIH의 모든 형태의 개발에 관련된 병원성 메커니즘에 대한 연구는 이전에 인간 질병의 유도를 밀접하게 모방하는 동물 모델의 부족으로 인해 방해 받았다. 우리는 환자에서 면역 매개 DILI와 유사한 기능을 가진 DIH의 실험적 뮤린 모델을 개발했습니다. 간염은 시토크롬 P450 2E1(CYP2E1)5 효소에 의해 마취제의 산화 대사 후 형성되는 트리플루오로아세틸 클로라이드(TFA) 대사산물에 의해 공유적으로 변형된 두 개의 자가항원 중 하나로 면역화에 의해 유도된다. 하나의 자가항원은 여러 단백질6의 혼합물인 간 세포질 S100 간 분획이고, 두 번째 자가항원은 마취성 면역 매개 DILI7을 갖는 환자로부터 혈청에 의해 인식되는 CYP2E1의 에피토프이다. 실험적 자가면역간염에 비교적 내성이 있는 BALB/c 마우스를 사용하여 C57Bl/6J 마우스8의 자가면역간염의 S100 유도 면역화 모델과 모델을 구별합니다.
다양한 임상 프리젠 테이션 때문에 DIH는 환자에서 연구하기가 어렵습니다. 번역 실험 모델은 생체내 및 시험관 내에서 질병의 발병기전을 평가하는 능력을 제공한다. 현재, DIH를 유도하기 위한 다른 대안적인 방법은 동물의 사용 없이 생체내 또는 시험관내 적응성 또는 선천적 면역 반응을 완전히 검사하는 것이 아니다. 더욱이, S-100 또는 CYP2E1 에피토프의 트리플루오로아세틸화는 자극성 면역원을 생성하는 것으로 보이지 않으며, 우리는 TFA 변경된 단백질로 면역화함으로써 DIH를 유도하고 있기 때문에, 이들 동물은 면역화 또는 다른 절차 전에 에테르, 할로겐화 마취제, 바르비투레이트 또는 알코올을 투여받지 않을 것이며, 이러한 제제가 우리가 연구하고있는 파라미터를 바꿀 수 있다는 점을 고려한다. 그럼에도 불구하고, 우리는 컴퓨터 시뮬레이션을 활용하여 발견 된 CYP2E1 에피토프9 의 결합 선호도를 확인하고 여성 BALB / c 마우스가 더 심한 DIH10을 개발한다는 것을 보여줌으로써 여성의 성별을 암시하는 인간 DIH를 미러링함으로써 마우스 사용을 줄였습니다.
환자에서 DIH의 다양한 제시와 임상 질환 연구의 도전에도 불구하고, 반응성 약물 대사 산물에 의한 천연 단백질의 번역 후 변형은 할로겐화 마취제11을 따르는 DIH 병인에서 받아 들여지는 핵심 메커니즘입니다. 조사관들은 또한 CYP2E1이 이 과정12,13에서 주요 자가항원이라는 것을 받아들인다. 번역 후 변형된 CYP2E1 및 기타 간 단백질을 인식하는 인터루킨(IL)-4-상향조절된 CD4+T 세포의 역할은 호중구, 호산구 및 비만 세포를 간(14)으로 유인함으로써 마취 DIH의 수용된 개시제이며, 이 기전은 DIH15,16의 여러 형태에서 확인되었다. 유도된 FoxP3-발현 CD4+CD25+T 세포 (Tregs)는 DIH의 중증도를 감소시키고, 비장에서 이들 세포의 상대적 결핍은 DIH 10,7을 악화시킨다. 따라서, DIH를 이해하는 진보의 대부분은 생체내 및 시험관내 DIH의 유전적, 대사적 및 면역학적 메카니즘을 평가하기 위해 생체내 마우스 모델을 활용함으로써 가능하게 되었다.
우리와 다른 연구자들이 다른 마우스 모델을 사용하여 DIH를 개시하는 과정에서 IL-4, 호중구 및 호산구에 대한 역할을 밝혀 냈기 때문에이 관찰은 사용 된 DIH 모델에 관계없이 간염 및 부상이 IL-4에 의해 유도된다는 우리의 주장을 뒷받침한다고 믿습니다. 우리의 프로토콜의 강점은 수컷 및 암컷 마우스 모두의 생체 내 방법론의 활용과 조직학, CD4+ T 세포 증식 분석 및 사이토카인의 반복에 있습니다. 시험관 내 연구의 우리의 사용의 강점은 DIH를 유도하는 세포 상호 작용을 분리하는 방법론을 제공하면서 필요한 생쥐의 수를 줄인다는 것입니다. 우리는 수컷과 암컷 마우스의 사용을 권장하는데, 이는 결과의 해석에서 무의식적 편향의 가능성을 줄이고 DIH의 발생률, 유병률 및 중증도가 여성17에서 더 높기 때문에 우리 연구의 번역 잠재력을 강화하기 때문입니다. 마우스는 단일 공급 업체에서 얻는 것이 좋습니다. 그러나 이것이 가능하지 않다면 유전자 변형 마우스와 동일한 공급 업체로부터 깔짚 메이트 대조군 또는 야생형 마우스를 얻으십시오.

<table><tbody><tr><td>0.1% 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS)</td><td>ThermoFisher</td><td>28997</td><td></td></tr><tr><td>AKP Substrate Kit</td><td>BioRad</td><td>172-1063</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c mice</td><td>Jackson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CellTrace&amp;trade; CFSE Cell Proliferation Kit</td><td>ThermoFisher</td><td>C34554</td><td></td></tr><tr><td>CFA H37Ra</td><td>Becton Dickinson (Difco Bacto)</td><td>231131</td><td></td></tr><tr><td>FcR Blocking reagent</td><td>Milteyi</td><td>130-092-575</td><td></td></tr><tr><td>General supplement</td><td>ThermoFisher</td><td>HPRG770</td><td></td></tr><tr><td>HepaRG&amp;trade; cells cryopreserved</td><td>ThermoFisher</td><td>HPR GC10</td><td></td></tr><tr><td>Live/Dead Fixable Aqua Dead Cell stain kit&amp;nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>L34965</td><td></td></tr><tr><td>NaHC03</td><td>Millipore Sigma</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Percoll&amp;reg;</td><td>Millipore Sigma</td><td>P1644-1L</td><td></td></tr><tr><td>Pertussis Toxin</td><td>List Biologicals</td><td>180</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline pH 7.4</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pierce&amp;trade; Protease Inhibitor Mini Tablets, EDTA Free</td><td>ThermoFisher</td><td>88666</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Hydroxide</td><td>JT Baker</td><td>3140-01</td><td></td></tr><tr><td>S-ethyltrifluorothioacetate (S-ETFA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>177474</td><td></td></tr><tr><td>Slide-a-lyzer dialysis cassettes (10 K, 12 ml)</td><td>ThermoFisher</td><td>66810</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure&amp;trade; SDS Solution, 10%</td><td>ThermoFisher</td><td>24730020</td><td></td></tr><tr><td>Williams Media E, no phenol red</td><td>ThermoFisher</td><td>A1217601</td><td></td></tr></tbody></table>

induction of drug-induced, autoimmune hepatitis in balb/c mice for the study of its pathogenic mechanisms

약물-유도성 자가면역간염(DIH)은 자가면역간염 환자의 약 9~12%에서 관찰되는 가장 흔한 간약물 유도성 과민화 과정이다. DIH 환자의 압도적 인 대다수는 여성입니다. 유병률에서 이러한 성별 차이의 근본적인 메커니즘은 인간의 질병을 모방 한 동물 모델의 소박함 때문에 명확하지 않습니다. 그럼에도 불구하고, 근본적인 메카니즘은 인간 백혈구 항원 일배체형 및 성 호르몬과 관련되는 것으로 널리 믿어지고 있다. 대조적으로, DIH 마우스 모델을 사용하여, 우리는 IL-4 개시 CD4+ T 세포가 시토크롬 P450 2E1의 에피토프에 대해 지시된 것을 밝혀냈고, 이는 여성 BALB/c 마우스의 간으로의 호중구, 대식세포 및 비만 세포의 유입을 유도한다. 이 모델을 사용하여, 우리는 또한 IL-33-유도된 FoxP3+조절 T 세포가 암컷 및 수컷 마우스에서 DIH에 대한 보호를 부여한다는 것을 보여주었다. 이 DIH 모델은 DIH와 관련된 약물 대사 산물과 공유적으로 변경된 CYP2E1의 에피토프로 마우스를 면역화함으로써 유도된다. 이러한 에피토프는 DIH 환자에 의해 인식된다. 우리의 방법은 DIH의 발병 기전을 연구하는 데 활용할 수있는 강력하고 재현 가능한 간염 및 자가항체를 유도합니다. 생체내 연구가 부적절하게 행해질 때 마우스에서 과도한 통증과 고통을 야기할 수 있지만, 생체내 모델의 장점은 다수의 마우스에서 질병의 발병기전을 평가할 수 있다는 것이다. 또한, 변경된 간 단백질의 생물학적 효과는 침습적 인 절차를 사용하여 연구 할 수 있습니다. 시험관 내 연구를 실험 설계에 추가하면 세포 수준에서 신속한 반복 및 기계론적 분석이 가능합니다. 따라서, 우리는 우리의 모델 프로토콜과 DIH의 생체 내 및 시험관 내 메커니즘을 연구하는 데 어떻게 활용 될 수 있는지 입증 할 것입니다.

도 1에 도시된 DIH를 유도하기 위해 활용된 면역화 스케쥴은 목의 기저부(제0일제)와 꼬리의 기저부(제7일제)에서 요구되는 두 개의 면역화를 나타낸다. 도 2는 마취제의 CYP2E1, JHDN5, CYP2E1 에피토프 및 트리플루오로아세틸(TFA) 대사산물에 반응하여 CFSE를 사용하여 14일째에 수득된 대표적인 증식 데이터를 보여준다. 도 3은 14일째에 수득된 유도된 CD4+CD25+FoxP3+ Tregs의 게이팅 전략 및 대표적인 유세포 분석 분석을 보여준다. 도 4는 대표적인 헤마톡실린 및 에오신 염색된 슬라이드를 나타내며 21일째 6일째에 간염의 진화를 입증한다. 도 5는 대표적인 헤마톡실린 및 에오신 염색된 슬라이드가 이들 간10에서 비교 세포 함량 이외에 21일째 수컷과 비교했을 때 암컷 BALB/c 마우스에서 더 심한 간염을 입증하는 것을 보여준다. 도 6은 마우스 IgG와 미토콘드리아의 공동-국소화의 부재를 입증하는 대표적인 공초점 현미경 슬라이드를 보여준다. 도 7은 JHDN5 IgG와 미토콘드리아의 공동-국소화를 입증하는 대표적인 공초점 현미경을 보여준다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59174/59174fig1.jpg"> 도 1: 간염을 유발하는 마우스의 면역화. DIH는 암컷 BALB/c 마우스(예로서)에서 완전한 프로인트 보조제(CFA)에서 유화된 TFA-JHDN5(100 μg)를 목 기저부의 피하(s.c.) 및 0일째에 뒷다리에서 근육내(즉)로 백일해 독소 50ng으로 면역화함으로써 유도될 수 있다(단계 1). 7일째에, BALB/c 마우스는 꼬리의 배에서 CFA(s.c.)로 유화된 TFA-JHDN5(100μg)로 면역화될 수 있다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/59174/59174fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59174/59174fig2.jpg"> 도 2: 유세포 분석기를 사용하여 전체 자가단백질, 자가단백질의 에피토프 또는 TFA 합텐에 대한 CD4+ T 세포 면역 반응의 결정. 초기 면역화 후 14일째에 단리된 6 – 8주령의 BALB/c 마우스로부터의 비장세포의 단일 세포 현탁액을 CFSE로 표지하고, TFA-OVA, CYP2E1 또는 JHDN5 (10 μg/mL)로 자극하여 5% CO2, 95% 공기 (가습)에서 37°C에서72시간 동안 자극하고, CD4-APC로 염색하고, 유세포 분석기에 의해 분석하였다. 항원(media)이 없는 웰을 대조군으로 사용하였다. BALB/c 마우스는 배지와 비교했을 때 JHDN5가 아닌 OVA-TFA 및 CYP2E1에 반응하여 증식을 일으켰다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/59174/59174fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59174/59174fig3.jpg"> 도 3: 2.3.7에 기재된 방법을 사용하여 CD4+CD25+FoxP3+ 유도 Tregs의 확인을 위한 게이팅 전략. 첫 번째 게이트는 살아있는 세포를 식별합니다. 면역 세포를 검출하기 위해, CD45+ 세포를 초기에 게이팅하였다. 다음에, CD4+ T 세포를 동정하고, 게이팅하고, 이어서 CD4+ T 세포 집단 내의 CD25+FoxP3+ 세포를 동정하였다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/59174/59174fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59174/59174fig4.jpg"> 그림 4: 간염에 대한 간 조직의 조직학적 분석. CFA 면역화된 마우스(상부 패널)를 비히클 대조군으로 사용하였다. S100-면역화된 마우스(중간 패널)는 동일한 스케줄로 면역화된 후 평가하였다. 21일째에, 마우스를 안락사시키고, 간을 포르말린에 고정시켰다. 5 μm 두께의 절편을 만들고 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색하였다. 최소 간 염증 (청색 세포)은 CFA (상단) 및 S100 (중간) 예방 접종 및 TFA-S100으로 예방 접종 한 후 다량의 염증에 따라 입증됩니다. (H&E, 배율 64X). 이 그림은 권한6과 함께 사용됩니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/59174/59174fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59174/59174fig5.jpg"> 그림 5: 암컷 BALB/c 마우스는 수컷 BALB/c 마우스와 비교했을 때 더 많은 DIH를 발달시킨다. (A) 암컷 마우스(n=8)는 TFA-S100/CFA 면역화 후 3주 후에 수컷(n=7/군)보다 유의하게 더 심한 간염을 앓았다. (B) 암컷과 수컷 마우스로부터의 대표적인 간 절편(H&E, 배율 64X). (C) 간 CD4+, CD8+, NK+ 및 NKT+ 세포의 수는 남성에서보다 암컷에서 유의하게 더 높았다. 평균 ± SEM. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001. 이 그림은 권한10과 함께 사용됩니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/59174/59174fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59174/59174fig6.jpg"> 도 6: 마우스 IgG는 미토콘드리아와 공동-국소화하지 않는다. 녹색 형광 (488nm) 표지 된 마우스 IgG (1 : 100) (녹색) 이외에 적색 형광 (594) - 표지 된 Mitotracker Red (1 : 100)으로 염색 된 말단 분화 된 간 세포의 공초점 이미지. 녹색 형광 (488nm)-표지된 마우스 IgG는 미토트래커 레드 (63X 배율)와 공동-국소화되지 않는다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/59174/59174fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59174/59174fig7.jpg"> 도 7: JHDN5 IgG는 미토콘드리아와 공동-국소화한다. 녹색 형광 (488)-표지 된 JHDN-5 IgG (1 : 100) 이외에 적색 형광 (594) - 표지 된 Mitotracker Red (1 : 100)으로 염색 된 말단 분화 된 간 전구 세포의 공초점 이미지. 녹색 형광 (488nm) - 표지 된 JHDN-5 IgG는 Mito-tracker Red와 공동 국소화되며, 대표 이미지 (63X 배율)에서 노란색 색조로 입증됩니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/59174/59174fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

우리는이 질병에서 볼 수있는 성별 차이를 포함하여 약물 유발 자가면역 간염의 발병 기전을 연구하는 데 활용할 수있는 BALB / c 마우스의 생체 내 예방 접종, 번역 형 간염 모델을 설명합니다. 우리는이 모델이 생체 내 및 시험관 내 실험 기술을 사용하여 재현 가능한 분석을 시연하는 방법을 설명 할 것입니다.

병원성 메커니즘 연구를위한 BALB / c 마우스에서 약물 유도,자가 면역 간염의 유도

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

2.9K 조회수.  Johns Hopkins University. 우리는이 질병에서 볼 수있는 성별 차이를 포함하여 약물 유발 자가면역 간염의 발병 기전을 연구하는 데 활용할 수있는 BALB / c 마우스의 생체 내 예방 접종, 번역 형 간염 모델을 설명합니다. 우리는이 모델이 생체 내 및 시험관 내 실험 기술을 사용하여 재현 가능한 분석을 시연하는 방법을 설명 할 것입니다.

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Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1. It has traditionally been considered a rare disease but reporting has increased markedly in recent years. Hypophysitis, in fact, develops not uncommonly as a "side effect" in cancer patients treated with antibodies that block inhibitory receptors expressed on T lymphocytes, such as CTLA-42 and PD-1 receptors. Autoimmune hypophysitis can be induced experimentally by injecting mice with pituitary proteins mixed with an adjuvant3. In this video article we demonstrate how to extract proteins from mouse pituitary glands and how to prepare them in a form suitable for inducing autoimmune hypophysitis in SJL mice.

Autoimmune hypophysitis can be reproduced in mice by injecting an extract of mouse pituitary proteins.

실험 면역 Hypophysitis의 유도를위한 마우스 뇌하수체 Immunogen의 준비

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

연구

면역학 및 감염병학

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to generate an animal model that reflects the characteristics of the human disease 3-5. However, in various models the induction of disease was rather complex and often hepatitis was only transient3-5. Therefore, we have developed a straightforward mouse model that uses the major human autoantigen in type 2 autoimmune hepatitis (AIH-2), namely hCYP2D6, as a trigger6. Type 1 liver-kidney microsomal antibodies (LKM-1) antibodies recognizing hCYP2D6 are the hallmark of AIH-27,8. Delivery of hCYP2D6 into wildtype FVB or C57BL/6 mice was by an Adenovirus construct (Ad-2D6) that ensures a direct delivery of the triggering antigen to the liver. Thus, the ensuing local inflammation generates a fertile field9 for the subsequent development of autoimmunity. A combination of intravenous and intraperitoneal injection of Ad-2D6 is the most effective route to induce a long-lasting autoimmune damage to the liver (section 1). Here we provide a detailed protocol on how autoimmune liver disease is induced in the CYP2D6 model and how the different aspects of liver damage can be assessed. First, the serum levels of markers indicating hepatocyte destruction, such as aminotransferases, as well as the titers of hCYP2D6 antibodies are determined by sampling blood retroorbitaly (section 2). Second, the hCYP2D6-specific T cell response is characterized by collecting lymphocytes from the spleen and the liver. In order to obtain pure liver lymphocytes, the livers are perfused by PBS via the portal vein (section 3), digested in collagen and purified over a Percoll gradient (section 4). The frequency of hCYP2D6-specific T cells is analyzed by stimulation with hCYP2D6 peptides and identification of IFN&gamma;-producing cells by flow cytometry (section 5). Third, cellular infiltration and fibrosis is determined by immunohistochemistry of liver sections (section 6). Such analysis regimen has to be conducted at several times after initiation of the disease in order to prove the chronic nature of the model. The magnitude of the immune response characterized by the frequency and activity of hCYP2D6-specific T and/or B cells and the degree of the liver damage and fibrosis have to be assessed for a subsequent evaluation of possible treatments to prevent, delay or abrogate the autodestructive process of the liver.

Infection of mice with an Adenovirus expressing the major human autoantigen cytochrome P450 2D6 (hCYP2D6) recognized by sera of patients suffering from type 2 autoimmune hepatitis results in a persistent form of autoimmune-mediated liver disease characterized by extensive hepatitis, fibrosis and generation of a CYP2D6-specific immune response.

CYP2D6 동물 모델 : 마우스에 면역 간염을 유발하는 방법

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

의학

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the uremic milieu, oxidative stress, endotoxemia and the decreased clearance of circulating proinflammatory cytokines by producing a large number of acute-phase reactants. Experimental tools to study inflammation and the underlying role of hepatocytes are crucial to understand the regulation and contribution of hepatic cytokines to a systemic acute phase response and a prolonged pro-inflammatory scenario, especially in an intricate setting such as chronic kidney disease. Since studying complex mechanisms of inflammation in vivo remains challenging, resource-intensive and usually requires the usage of transgenic animals, primary isolated hepatocytes provide a robust tool to gain mechanistic insights into the hepatic acute-phase response. Since this in vitro technique features moderate costs, high reproducibility and common technical knowledge, primary isolated hepatocytes can also be easily used as a screening approach. Here, we describe an enzymatic-based method to isolate primary murine hepatocytes, and we describe the assessment of an inflammatory response in these cells using ELISA and quantitative real-time PCR.

Here, we show an enzymatic approach to isolate primary hepatocytes from adult mice, and we describe the quantification of an inflammatory response using ELISA and real-time PCR.

마우스에서 차 간세포 문화에 염증 반응의 유도

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model

In recent years, Hashimoto's thyroiditis (HT) has become the most common autoimmune thyroid disease. It is characterized by lymphocyte infiltration and the detection of specific serum autoantibodies. Although the potential mechanism is still not clear, the risk of Hashimoto's thyroiditis is related to genetic and environmental factors. At present, there are several types of models of autoimmune thyroiditis, including experimental autoimmune thyroiditis (EAT) and spontaneous autoimmune thyroiditis (SAT).
EAT in mice is a common model for HT, which is immunized with lipopolysaccharide (LPS) combined with thyroglobulin (Tg) or supplemented with complete Freund's adjuvant (CFA). The EAT mouse model is widely established in many types of mice. However, the disease progression is more likely associated with the Tg antibody response, which may vary in different experiments.
SAT is also widely used in the study of HT in the NOD.H-2h4 mouse. The NOD.H2h4 mouse is a new strain obtained from the cross of the nonobese diabetic (NOD) mouse with the B10.A(4R), which is significantly induced for HT with or without feeding iodine. During the induction, the NOD.H-2h4 mouse has a high level of TgAb accompanied by lymphocyte infiltration in the thyroid follicular tissue. However, for this type of mouse model, there are few studies to comprehensively evaluate the pathological process during the induction of iodine.
A SAT mouse model for HT research is established in this study, and the pathologic changing process is evaluated after a long period of iodine induction. Through this model, researchers can better understand the pathological development of HT and screen new treatment methods for HT.

Several types of animal models of Hashimoto's thyroiditis have been established, as has spontaneous autoimmune thyroiditis in the NOD mouse. H-2h4 mice are a simple and reliable model for HT induction. This article describes this approach and evaluates the pathological process for a better understanding of the SAT murine model.

마우스 자발성 자가면역 갑상선염 모델 생성

In recent years, Hashimoto's thyroiditis (HT) has become the most common autoimmune thyroid disease. It is characterized by lymphocyte infiltration and ...

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable health and financial burden on individuals and society. Therefore, it is critical to investigate the mechanisms underlying the pathogenesis and development of IBD. Here, a gut microbiota antigen-specific T cell transfer colitis model is described. CBir1 flagellin has been recognized as the immunodominant gut bacterial antigen in experimental colitis and patients with Crohn&#39;s disease. CBir1 TCR transgenic na&#970;ve CD4+ T cells, specific to CBir1 flagellin, can induce chronic colitis after adoptive transfer into immune-deficient Rag1-/- mice. The disease severity is assessed by histopathology. The CD4+ T cell phenotypes in colonic lamina propria are also determined. This model closely resembles the development of IBD, which provides an ideal murine model for investigating the mechanisms driving the pathogenesis of IBD and testing the potential drugs for treating IBD.

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

In this protocol, a gut microbiota antigen-specific T cell adoptive transfer colitis model is described. CD4+ T cells are isolated from CBir1 TCR transgenic mice. These are specific for an immunodominant gut microbiota antigen CBir1 flagellin, which is transferred into recipient Rag1-/- mice, leading to intestinal inflammation.

CBir1 TCR 형질 전환 CD4+ T 세포의 입양 전달에 의한 장 염증유도

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

Induction and Evaluation of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mouse(마우스에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 평가)

Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple Sclerosis (MS) is a chronic autoimmune inflammatory disease affecting the central nervous system (CNS). It is characterized by different prevalence in the sexes, affecting more women than men, and different outcomes, showing more aggressive forms in men than in women. Furthermore, MS is highly heterogeneous in terms of clinical aspects, radiological, and pathological features. Thus, it is necessary to take advantage of experimental animal models that allow the investigation of as many aspects of the pathology as possible. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) represents one of the most used models of MS in mice, modeling different disease features, from the activation of the immune system to CNS damage. Here we describe a protocol for the induction of EAE in both male and female C57BL/6J mice using myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55 (MOG35-55) immunization, which leads to the development of a chronic form of the disease. We also report the evaluation of the daily clinical score and motor performance of these mice for 28 days post immunization (28 dpi). Lastly, we illustrate some basic histological analysis at the CNS level, focusing on the spinal cord as the primary site of disease-induced damage.

저자 스포트라이트: 수컷과 암컷 마우스 모두에 적합한 다재다능한 실험적 자가면역 뇌척수염 모델 만들기 

Experimental autoimmune encephalomyelitis is one of the most widely used murine models of multiple sclerosis. In the current protocol, C57BL/6J mice of both sexes are immunized with myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide, resulting mainly in ascending paresis of the tail and limbs. Here we discuss the protocol of EAE induction and evaluation.

병원성 메커니즘 연구를위한 BALB / c 마우스에서 약물 유도,자가 면역 간염의 유도

요약

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이 비디오의 챕터

실험 면역 Hypophysitis의 유도를위한 마우스 뇌하수체 Immunogen의 준비

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

CYP2D6 동물 모델 : 마우스에 면역 간염을 유발하는 방법

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

마우스에서 차 간세포 문화에 염증 반응의 유도

C57BL / 6 마우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

마우스 자발성 자가면역 갑상선염 모델 생성

CBir1 TCR 형질 전환 CD4⁺ T 세포의 입양 전달에 의한 장 염증유도

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG_35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

병원성 메커니즘 연구를위한 BALB / c 마우스에서 약물 유도,자가 면역 간염의 유도

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C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

마우스 자발성 자가면역 갑상선염 모델 생성

CBir1 TCR 형질 전환 CD4+ T 세포의 입양 전달에 의한 장 염증유도

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

C57BL / 6 마우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

CBir1 TCR 형질 전환 CD4⁺ T 세포의 입양 전달에 의한 장 염증유도

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG_35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염