이 실험의 주요 목표는 토끼의 복강경 배아 전달 절차를 모델로 설명하는 것입니다. 이 기술의 주요 장점은이 사람이 쉽고 최소 침습기술을 사용하여 배아를 옮기기 위해 작용한다는 것입니다. 더욱이, 여기서 설명된 효과적인 배아 냉동 보존 프로토콜은 또한 토끼 배아를 장기간 저장하여 시간 유연한 물류 능력과 시료를 수송하는 능력을 제공한다.
우리가 알다시피, 보조 생식 기술은 결과를 개선하고 관련 위험을 줄이기 위해 지속적인 평가에 있습니다. 따라서 두 기술을 모두 사용하여 토끼는 자손에 대한 체외 배아 조작의 효과와 같은 이 분야의 주요 질문에 답하기 위해 인간 번식의 이상적인 동물 모델로 사용될 수 있다. 이 문제의 시각적 데모는 배아 전달 단계가 배우기 어렵기 때문에 기술의 성공을 보장하기 위해 매우 정밀하게 수행해야하기 때문에 중요합니다.
배아 진동을 위해 배아를 2분 동안 평형 솔루션에 담그고, 진동 용액에서 1분 잠복이 발생합니다. 인큐베이션이 끝나면 배아를 125 마이크로리터 플라스틱 미니 짚에 넣고 미니 짚의 닫힌 끝을 적절한 1 밀리리터 마이크로 디스펜더와 결합합니다. 빨대 길이의 1/3까지 의 1/3까지 의 흡인 베이스 중간, 작은 기포가 뒤따릅니다.
다음으로, 스테레오마이크로코프를 사용하여 40마이크로리터의 진동용 마이크로리터로 배아를 흡인시키고, 또 다른 작은 기포와 충분한 기본 매체를 사용하여 첫 번째 액체 분획을 미니 짚의 면까지 이동시합니다. 그런 다음 미니 짚의 열린 끝을 밀짚 플러그로 닫고 미니 짚을 액체 질소에 직접 떨어 뜨고 유리화를 달성하고 미니 짚을 액체 질소 데워에 보관하십시오. 배아를 전동용으로 해동하려면 액체 질소 증기로부터 10cm 의 미니 짚을 수평으로 20 내지 30초 간 배치합니다.
결정화 과정이 미니 짚 내부에서 시작되면 10~15초 동안 25도의 수조에 미니 짚을 담급니다. 즉시 미니 짚과 면 플러그를 제거하고 결합 된 마이크로 디스펜더를 사용하여 5 분 동안 배아가 있어야하는 0.33 대구 용액으로 보충 된 섭씨 25도 베이스 매체가 들어있는 접시에 미니 밀짚 내용을 추방합니다. 그런 다음 배아를 신선한 베이스 배지 의 접시에 5 분 배양하여 전달합니다.
배아의 나이가 옮겨지기까지 며칠 전, 성적으로 성숙한 4.5개월 된 암컷 토끼의 외음부의 터기와 색을 관찰하고, 체중에 관계없이 1마이크로그램의 단일 근육 주사로 수용동물의 배란을 유도한다. 이송 당일, 스테레오현미경으로 37도의 상량 의 기초 배지로 신선하거나 해동된 배아를 헹구고, 적절하게 구성된 17게이지 경막외 카테터를 1밀리리터 주사기에 부착한다. 카테터에 기본 매체의 1 센티미터를 흡인하고, 작은 기포가 뒤따릅니다.
그런 다음 5~7개의 배아와 10개의 미루기 매체를 흡인하고, 또 다른 작은 기포와 최종 1센티미터의 기본 배지를 흡입한다. 배아가 적재되면 마취된 받는 토끼를 온난화 단계에 케이지에 넣고 동물의 눈에 연고를 바릅니다. 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 복부에서 모피를 면도, 클로르헨시딘 글루코네이트 비누로 수술 영역을 청소하고, 나머지 머리를 제거.
수술 부위에 구멍이 있는 멸균 드레이프로 부위를 덮고, 내시경 트로카 1대를 복강내로 5센티미터, zyphoid 과정에 2센티미터 의 소달을 삽입하고, 복막 구멍을 팽창시키기 위해 기계식 인수프플레이터를 조절하는 압력을 사용합니다. 내시경 카메라를 내시경 트로카를 통해 삽입하고 17 게이지 경막외 바늘을 인구부위에 삽입하여 인펀디불룸에서 2~3cm 떨어진 곳에 삽입합니다. 경막외 바늘을 통해 하중 카테터를 복부에 삽입하고 암풀라의 자금 을 통해 경막외 카테터의 1 ~ 2 센티미터를 삽입하십시오.
카테터 플런저를 부드럽게 우울하여 배아를 배아를 oviduct로 방출합니다. 두 기포는 카테터에서 빠져나와야 합니다. 배아가 방출된 직후 카테터를 제거하고, 배아의 부재를 확인하기 위해 나머지 배지를 흡인하고 방출한다.
배아의 성공적인 전달을 확인한 후 경막외 바늘과 내시경 카메라를 제거하고 내시경 트로카를 통해 복부 이산화탄소를 방출한다. 클로르헤시딘 용액으로 트로카 절개를 청소하고 미크로니즈 알루미늄과 플라스틱 드레싱으로 상처를 닫습니다. 그런 다음 동물을 적절한 항생제와 진통제로 치료하고 완전히 회복 될 때까지 동물을 모니터링하십시오.
최소 침습복면 배아 전달은 새끼의 결과로 전송된 신선한 태아의 높은 백분율로 생식 연구를 위한 제일 동물 모형 중 토끼를 둡시합니다. 특히, 신선한 배아 전이가 초기 또는 소형 모룰라단계에서 배아로 수행될 때 더 높은 값을 달성한다. 유사한 결과는 토끼에 있는 신선한 유리화 배아를 전송하기 위한 이 기술의 효험 그리고 신뢰성을 확인하는, 특히 컴팩트한 morulae를 가진 조기 및 압축된 유리생물 모룰라 전송 후에 관찰됩니다.
이 절차에 따라, 조건부 보조 생식 기술과 같은 다른 방법은 나중에 진통 효과에서 밀도의 추가가 발생할 수있는 방법과 같은 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다. 최근 개발 후,이 기술은 토끼와 인간 사이의 가까운 물리 유전 적 거리에 따라 인간에서이 효과를 탐구하는 재생산 분야의 과학자를위한 길을 열어줍니다. 따라서, 이 기술은 다른 포유류 종뿐만 아니라 인간 임상 의학으로 쉽게 전달 가능한 결과를 제공할 수 있다.
우리의 방법은 실험 동물의 인간 치료를 개선하기위한 목적으로, 동물 복지, 교체, 감소 및 정제의 세 R의 개념에 부합하는 몇 가지 위생적, 경제적 이점을 제공한다는 것을 잊지 마십시오.
