Name: the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy and eeg monitoring using radiotelemetry system in mice
Uploaded: 2018-02-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice at JoVE.com

이 작품은 한국 정부 (NRF-2014R1A1A3049456)에 의해 투자 하는 한국 국립 연구 재단 (NRF) 그랜트와 한국 건강 기술 R & D 프로젝트 통해는 한국 보건 산업 개발 연구소 (진흥원), 부여에 의해 지원 되었다 보건 복지, 한국 공화국 (HI15C2854)에 의해 자금.

모든 실험 절차 가톨릭 대학교의 윤리 위원회에 의해 승인 및 관리 및 실험 동물 사용 (NIH 간행물 번호 80-23)에 대 한 국가 학회 건강 가이드에 따라 실시 했다.
1. SE 유도
<ol><li>8 주 오래 된 남성 C57BL/6NHsd 마우스를 구입 하 고 각 마우스 무게. 그런 다음 마커 펜을 사용 하 여 SE 유도 하는 동안 그들의 쉬운 id에 대 한 모든 쥐의 꼬리를 표시.</li>
	<li>마우스 무게에 따라 scopolamine 메 틸 브 로마 이드 (scopolamine; 2 mg/kg), terbutaline hemisulfate (terbutaline; 2 mg/kg), 및 pilocarpine 염 (pilocarpine; 280 mg/kg)의 양을 계산 하 고 식 염 수 (0.9 %NaCl, 10 mL/kg) 솔루션에 추가 합니다. 참고: 예를 들어 마우스의 무게는 25 g, 다음 금액 적용 됩니다: Scopolamine와 terbutaline: 2 mg/kg * (25 g/1000 g) = 0.05 mg, 염 분: 10 mL/kg * (25 g/1000 g) = 0.25 mL, Pilocarpine: 280 mg/kg * (25 g/1000 g) = 7 mg 염 분: 10 mL/kg * (25 g/1000 g) = 0.25 mL.</li>
	<li>30g 바늘 1 mL 주사기에 scopolamine와 terbutaline 혼합물을 로드 합니다. 각 마우스에 intraperitoneally 솔루션을 주입 하 고 그들의 감 금 소에는 마우스를 반환 합니다. Scopolamine와 terbutaline 관리 후 30 분 pilocarpine 솔루션 (i.p.; 1 mL 주사기 30 G 바늘) 각 마우스에 주사. Pilocarpine 주입 후 즉시 관찰에 대 한 인큐베이터 (28-30 ° C)에 쥐를 놓습니다.</li>
	<li>SE 유도 될 때까지 조심 스럽게 쥐의 동작을 모니터링 합니다. 변 모터 발작 무대 라신의 규모에 따라 3 이상에 해당 하는 검색 되 면 시간을 기록 하 고 발작이 더 자주 발생 하는지를 확인 하려면 마우스를 모니터링 합니다. 지속적인 모터 발작 2 분 이상 지속, 일단 마우스 실내 온도에 새로운 장에 놓고 그들의 경련 발작 계속 SE 유발 여부를 결정 하는 3 h에 대 한 모니터링을 계속 합니다. 마우스 입력 하지 못한 안락사 pilocarpine 주입 후 약 2 시간에 SE. 참고: 라신의 규모; 1 단계, 입, 얼굴 운동; 단계 2, 머리 끄 덕; 단계 3, forelimb clonus; 단계 4, forelimb clonus;와 양육 단계 5, 양육 및 forelimb clonus16. 마우스 SE 유도 후 실 온에서 감 금 소에 전송 되지 않습니다, 마우스는 고 열으로 인해 죽을 수 있다.</li>
	<li>다이아 제 팜 솔루션 (i.p., 10 mg/kg, 1 mL 주사기, 바늘 30 G)를 주입 하 여 SE 발병 후 3 h 행동 급성 발작을 종료 합니다. 염 분 (i.p., 10 mL/kg, 1 mL 주사기, 바늘 30 G)를 추가 하 여 10% polyoxyl 35 수 소화한 아주까리 기름에 다이아 제 팜 5 mg/mL를 diluting 하 여 다이아 제 팜 솔루션을 확인 합니다. 참고: 10% polyoxyl 35 수 소화한 아주까리 기름 솔루션: 1 mL polyoxyl 35 수 소화한 아주까리 기름 솔루션 + 9 mL 염 분. 실 온에서 솔루션을 저장 합니다. 예를 들어 마우스 몸 무게 25 g 인 경우에, 주입의 다이아 제 팜 솔루션 250 µ L: 50 µ L 5 mg/mL 다이아 제 팜 + 200 µ L 10% polyoxyl 35 수 소화한 아주까리 기름 솔루션 = 250 µ L 1 mg/mL 다이아 제 팜.</li>
	<li>가짜 쥐에 대 한 수행 scopolamine 메 틸 브 로마 이드와 terbutaline hemisulfate 혼합물의 i.p. 주사 (i.p.; 두 2 mg/kg, 10 mL/kg; 1 mL 주사기 30 G 바늘). 30 분 나중에, intraperitoneally는 식 염 수를 주사 (i.p., 10 mL/kg, 1 mL 주사기, 바늘 30 G). 참고: 경우 마우스 몸 무게는 25 g, 250 µ L pilocarpine 대신 식 염 수의 주입.</li>
	<li>다이아 제 팜 주사 (i.p.; 1 mL 주사기 30 G 바늘), 후 개별 마우스 (i.p.; 1 mL 주사기 26 G 바늘) 당 5% 포도 당 1 mL를 관리 합니다. 참고: 5% 포도 당 주사의 1 mL 에너지 소스 및 생존 율을 증가 시킬 수 있는 수 분을 제공 합니다.</li>
	<li>인큐베이터 (28-30 ° C)에서 사후 관리 하는 동안 타 액, 눈물, 배설물 등 과도 한 분 비 물을 닦아.</li>
	<li>SE 유도 후 1 일에서 쥐 무게 하 고 여분의 하루 동안 인큐베이터 (28-30 ° C)에서 그들을 유지. 하루 2, SE 유도 후, 무게를 쥐 고 케이지 그들의 가정 그들이 돌아갑니다. 그들의 회복을 촉진 하기 위하여 습 한 차를 제공 합니다. 참고: 이 실험에서 SE 종단 후 C57BL/6NHsd에 대 한 사망 율 평균 (35 마우스 테스트의 개 3) 8.57% 이었다.</li>
	<li>7 일 후 pilocarpine까지 동물의 체중을 매일 측정 하 고 5% 포도 당 (i.p.; 1 mL 주사기 26 G 바늘)와 쥐를 주사 때 몸 무게 증가 하지. 몸 무게 모니터링 쥐 몸 무게를 회복 하 고 pilocarpine 주사 후 2 일에서 어려움 없이 촉촉한 차 소비를 시작할 때 중지 합니다. 참고: 마우스의 몸 무게는 7 일 게시물 SE까지 증가 하지 않았다, 실험에서 마우스를 제외 하 고 이산화탄소로 안락사. 마우스의 배경에 따라 죽음 때때로 발생할 수 있습니다; 그러나, C57BL/6NHsd의 경우 쥐의 1% 미만이 실험에서 사망 했다. SE 유도 후 7 일 이상 생존, 생쥐는 거의 잠 기간 동안 죽을.</li>
</ol>2. 이식 수술 비디오-뇌 파 모니터링
<ol><li>뇌 파 모니터링을 위한 원격 주입을 수행 하기 위해 12 주 된 쥐 SE 유도 후 (4 주)을 준비 합니다. 참고: 이식의 타이밍은 실험적인 목적 및 마우스 긴장에 따라 수정할 수 있습니다.</li>
	<li>수술 전에 마 취 제 (50 mg/mL) 및 xylazine (23.3 mg/mL) 솔루션 (i.p.; 1 mL 주사기 26 G 바늘) 2.5 µ L/g 몸 무게의 복용량에 식 염 수에 용 해의 혼합물 (4:0.5)로 마우스를 anesthetize. 정기적으로 (최대 15 분 간격) 호흡 속도 마우스의 호흡 노력을 모니터링 하 고 페달 철수 반사에 의해 마 취의 깊이 평가.</li>
	<li>귀 바와 물린 접시 stereotaxic 프레임에 마우스를 놓고 두 눈을 실명을 피하기 위해 수 의사 연 고를 적용 합니다.</li>
	<li>수술 하는 동안 멸 균 상태를 유지, 면도날을 사용 하 여 외과 사이트를 면도. 외과 분야의 모피 오염을 방지 하기 위해 주의 해야 합니다. 면도 후, 70% 에탄올과 요오드 솔루션으로 피부 소독. 참고: 수술은 무 균 방식으로 입고 멸 균 장갑, 마스크, 소독된 장비 및 무 균 기술을 사용 하 여 수행 되어야 한다.</li>
	<li>마 취의 깊이 확인 한 후 두개골을 노출에 피부 절 개를 중간 확인 합니다. Anteroposterior 축 (AP)에 Bregma에서 좌표 stereotaxic 장치에 연결 된와 함께 두 개의 버 구멍 만들기: 0.1 m m, 입장 축 (ML): 0.1 m m (참조), 그리고 AP: −0.2 m m, ML: +0.22 mm (왼쪽된 정수 리 피 질)13.<ol>
<li>PBS-젖은 면 스왑, 70% 에탄올과 요오드 솔루션 다음으로 피부를 닦아냅니다. 람다 (은 화살 및 lambdoid 봉합이 만나는 지점), Bregma (화살 봉합 하 여 코로나 봉합의 교차 시점) 및 대상 위치를 폭로 위로 머리 중간 종 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>람다 및 Bregma 같은 해부학 적 랜드마크를 식별 합니다. 드릴 비트 위치 Bregma와 메모는 X, Y 좌표이 포인트.</li>
		<li>뇌 아틀라스도 서를 사용 하 여 또는 뇌 파 기록에 대 한 뇌 영역의 적절 한 좌표 결정에 대 한 참조를 출판. 그런 다음, 나사 (참조 및 기록)에 대 한 좌표 계산 단계 2.5.2에서 측정 Bregma 좌표를 사용 하 여.</li>
		<li>천천히 낮은 두개골 얇은 되는 지점에서 너무 멀리 드릴 비트를 삽입 되지 않도록 주의 하면서 버 구멍을 드릴 비트.</li>
	</ol>
</li>
	<li>단일 채널의 몸을 피하는 목의 목 덜 미 뒤에 뇌 파 송신기 무선 및 유연한 배치 삽입 두개골 근처 리드.</li>
	<li>스테인리스 스틸 스크류 (길이 2mm) 각 버 구멍에 핀셋으로 놓고 시계 방향으로 회전 하 여 나사 드라이버를 사용 하 여 그것을 강화 합니다. 나사 경질 또는 뇌 조직에 손상을 방지 하기 위해 나사 회전의 정도 조정 하 여 멀리 너무 깊이 삽입 되지 않도록 다는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>단 열 코트 리드의 끝에서 2mm를 벗기십시오 고 철사와 나사 사이 좋은 연결을 위한 스크류 샤프트를 철사를 충분히 스트레칭. 전면 나사와 정수 리 피 질에 나사를 녹음 리드를 참조 리드를 연결 합니다. 그런 다음, 치과 시멘트 금속 부분을 노출 하지 않고 장소에 전체 어셈블리를 보안에 적용 됩니다.</li>
	<li>치과 시멘트는 완전히 육안 검사에 의해 건조를 확인 한 후 피부를 봉합 하 고 시사 mupirocin 연 고를 적용 합니다. 장소는 마우스는 30 ° C 배양 기에서 혼자 수술 (약 30 분)에서 복구 될 때까지. 그런 다음, 지속적인 비디오-뇌 파 모니터링 시작 될 때까지 마우스 홈 케이지에 반환 합니다. 참고: 수술 후, 각 마우스 gentamicin (항생제)의 5 밀리 그램/kg과 ketoprofen (진통제)의 5 mg/kg (i.p.; 1 mL 주사기 30 G 바늘) 주입 됩니다. Ambulant 완전히 될 때까지 동물을 모니터링 해야 합니다. 송신기-이식 마우스 1 주 약의 복구 기간을가지고.</li>
</ol>3. 비디오 및 뇌 파 모니터링 및 분석
<ol><li>개별 장에 마우스를 놓고 패러데이 케이지 전기 신호는 컴퓨터, AC 라인, 및 인접 한 수신기를 포함 하 여 모든 소스에서 중단 되지 않도록 하려면 설치 되어 무선 수신기 접시 위에 케이지를 놓습니다. 참고: 제조업체에서 제공한 설명서를 참조 하십시오. 맹점을 피하기 위해 주의 해야 합니다.</li>
	<li>무선 비디오-뇌 파 원격 측정 시스템을 사용 하 여 전기 활동을 기록 합니다.<ol>
<li>비디오-뇌 파 기록 위한 소프트웨어를 엽니다. "하드웨어"를 클릭 하 고 "구성 편집"을 선택 합니다. 수신기와 송신기 각 마우스에 이식 일치. "채널 구성" 클릭 하 고 모든 채널은 활성 확인. 클릭 "비디오 구성" 뇌 파 데이터 (30.00의 40 x 480 및 프레임 속도의 해상도)와 비디오를 동기화 할. 참고: 밤에는 쥐의 미묘한 행동 변화를 식별할 수 있는 좋은 이미지 품질을 수집 하는 것이 중요 하는 경우에 높은 감도와 IP 카메라를 설치 합니다.</li>
		<li>"설치"를 클릭 하 여 "P3 설치" 입력된 개별 동물 정보, 일치 카메라, 그리고 그래프 설정.</li>
		<li>설치 샘플링 속도를 "수집", "A/D 샘플링 속도"를 클릭 하십시오. "데이터 집합 이름"을 클릭 하 여 각 실험을 지정. 참고: 뇌 파에 대 한 샘플링 속도 높은 500 Hz. 보다 큰 비디오 및 뇌 파 데이터 크기를 해야 것이 좋습니다만 세션 당 처리 되는 데이터의 24 시간 연속 2 주 녹화를 사용 하 여 하나의 파일로 보다. RAM 메모리 부족의 경우 h 8 또는 12 h 간격 데이터를 별도로 저장할 수 있습니다.</li>
		<li>"수집 시작"을 클릭 하 여 자석 바 송신기 비디오-뇌 파 기록 수집 하. 적어도 2 주 동안 마우스 비디오-뇌 파 시스템에 의해 지속적으로 모니터링 합니다. 참고: C57BL/6 마우스 SRS 마지막 약 5.2 일 및 발작-무료 기간의 기간 그건 약 6.7 일17클러스터에서 발생 하는 경향이 있다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수동 검사 분석 소프트웨어를 사용 하 여 발작 빈도 기간을 결정 합니다.<ol>
<li>SRS를 보여주는 영역을 표시 하 고 통계 분석을 위해 데이터를 내보냅니다. 머리를 긁 적 또는 씹는;에 의해 생성 될 수 있는 뇌 파 유물 제외 주의 이들은 비디오 데이터를 확인 하 여 제거할 수 있습니다. 참고: SRS는 반복적인 epileptiform 급상승 하는 활동의 갑작스런 발병으로 정의 (≥ 3 Hz)는 이상 10 미 경련 동작 활동 급상승의 버스트 자주 동반 될 수에 대 한 지속. 비 경련 발작 또한 경련 동작 없이 electrographic 스파이크 활동을 설명할 수 있다. 압류 해지는 때 발사 스파이크 초기 활동에 돌려보낼 때 발생로 정의 됩니다.</li>
		<li>발작 빈도의 분석에 대 한 각 개별 동물에 대 한 일의 총 수로 2 주 동안 탐지 SRS 경우의 총 수를 나눕니다.</li>
		<li>발작 기간의 분석을 위해 활동 급상승 하는 epileptiform의 끝에 발병에서 시간을 측정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>비디오-뇌 파 기록의 완성 후 transcardial 관류 하 여 두뇌 4 %paraformaldehyde 해결. 마우스를 anesthetize, 솔루션 (4:0.5) 케 타 민 (50 mg/mL) 및 xylazine (23.3 mg/mL)의 주입에 10 μ/g 몸 무게 (i.p.; 1 mL 주사기 26 G 바늘)의 복용량에 식 염 수에 녹. 마우스 깊은 취를 확인 transcardial 관류를 수행 합니다.</li>
	<li>쥐의 뇌를 분리 하기 전에 세 안 후 다시 마우스에서 송신기를 검색 합니다.<ol>
<li>집게를 사용 하 여 리드 주위 치과 시멘트를 제거 합니다.</li>
		<li>치과 시멘트 해산 될 때까지 100% 아세톤에 치과 시멘트와 리드의 끝에 담근 다.</li>
		<li>증류수로 헹 궈 서 송신기 주위 조직 오염 물질을 제거 합니다.</li>
		<li>린스 3 h 및 어 70% 에탄올과 송신기 스토리지에 대 한 그것을 건조. 다음 사용 직전 나사와 70% 에탄올, 증류수, 다음 송신기 린스 하 고 식 염 수에 넣어. 참고: 유연한 리드 너무 짧은 경우, 마우스를 목이, 다음 주입 고 비디오-뇌 파 기록에서 노이즈를 증가 시킬 수 있습니다 때 유연한 와이어를 절단 하지 않도록 주의 해야 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 없다.

이 작품에서는 SE 유도 및 만성 발작의 평가 대 한 실험 절차를 설명합니다.
여러 가지 요인 성공적인 SE 유도 영향을 수 있습니다. 라신 규모에 따라 정확한 행동 모니터링 하는 것이 SRS의 개발에 대 한 중요 합니다. 머리를 끄 덕, forelimb clonus, 양육, 그리고 떨어지는 하는 행동의 SE 단계4,16으로 급성 발작. 일단 첫 번째 모터 발작 감지 후 경련 발작 사이의 간격의 길이 들어가기 전에 감소 세. 또한, SE 행동 발작 다이아 제 팜5종료 하지 않는 한 적어도 6 h에 대 한 메시지를 지속 한다. 지적 연구원은 행동 발작 다이아 제 팜 주사로 가시고 것 비록 발작 활동 electrocorticograms를 통해 검출 될 수 있다 지속 가능성의 알고 있어야 가치가 있다. SE 유도 SE와 동물의 수를 크게 향상 시킬 수 있을 때까지 pilocarpine 주입 후 온도 증가. 그것은 또한 충분 일 분, 영양 지원, 및 무게5,18평균 약 70-80% 보다 더 높은 생존 율에 대 한 모니터링을 포함 한 집중 후 발작 치료를 제공 하는 것이 중요. 동물의 유전 배경, 따라 pilocarpine 민감성이 달라질 수 있습니다. 동물 높은 사망률과 심각한 급성 발작을 표시, pilocarpine 복용량, SE, 또는 증가 scopolamine 기간과 terbutaline의 감소 도움이 될 수 있습니다. 심한 SE는 높은 사망률과 SRS의 발생률이 높은 관련된으로 알려져 있지만 그것은 이러한 요소를 고려해 야 할 중요 한. Hippocampal 신경 죽음 SE 후 지속적으로 관찰 된다. 6 h 포스트-SE, hilar 수의 광범위 한 손실 보고19되었습니다. SE 후 7 일, 피라미드 뉴런 CA3 하위 필드에 일반적으로 죽을, 그리고 피라미드 세포 층에서 신경 손상의 정도 쥐에서 변수 SE 유도 후 6 주에 지속적으로 관찰 된다. 해 마의 CA1 하위 신경 손실 또한 관찰할 수 있습니다 자주. 흥미롭게도, 동물 입력 하지 않으면 여러 발작으로 SE 보여 거의 그대로 마 비슷한 가짜 그룹 나타내는 더 세포 죽음 충분히 심각한 급성 발작의 좋은 표시 될 수 있습니다.
세 후 약 4 주에서 모든 pilocarpine 취급 C57BL/6NHsd 쥐 간 질 고 보였다 SRS를 보여주는 주요 장점이 모델을 사용 하 여. 때문에 만성 발작 클러스터는 비디오-뇌 파 기록 되어야 합니다 지속적으로 보다 일시적으로, 적어도 2 주 동안 비록 녹음 기간 마우스 긴장 또는 실험적인 목적17에 따라 수정할 수 있습니다. 또한, TLE 자발적인 발작 일주 유사 늦은 오후20에 높은 SRS 주파수를 보여주는 있다. 실질적으로, 정확한 비디오-뇌 파 기록에 대 한 AC 라인, 컴퓨터, 카메라, 또는 인접 수신기에 마우스에 이식 하는 전송기를 포함 하 여 모든 소스를 차단 될 필요가 있다. 낮과 밤 동안 패러데이 케이지 및 높은 감도와 카메라의 설치 전기 소음을 점감 할 수 있다 하 고 식별 하는 데 도움이 일반적인 만성 발작, 각각. 마지막으로 때 그것은 잘못 된 뇌 파 데이터를 생성할 수 있습니다 나사 dura mater의 표면에 배치 되어 뇌 손상을 피하기 위해 매우 중요 하다. SRS 주파수 높은 했지만, 강제 나사 삽입 하 여 어떤 기계적 외피 부상 1 주일만에 경련 발작을 생성할 수 있습니다.
결론적으로, 모델링 및 수행을 깊이 있는 교육의 요구 사항에 대 한 제약 조건을 이식 수술과 뇌 파 분석 시간에도 불구 하 고 pilocarpine 유도 SE는 현재 사용할 수 있는 동물 중 만성 간 질 공부에 대 한 최고의 모델 중 하나 TLE의 모델입니다. 여기, 우리 pilocarpine 주입 및 만성 발작 무선 원격 비디오-뇌 파 시스템을 사용 하 여 평가 후 SE 유도 하는 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 만성 간 질 및 epileptogenesis 적절 한 동물 모델에 대 한 자세한 정보를 제공할 수 있습니다 믿습니다.

TLE 가장 일반적인 획득된 epilepsies1중 하나입니다. 간 질을 가진 사람들 뇌2,3에 비정상적인 신경 활동의 결과로 재발 성 발작을 경험합니다. TLE 자주 세공는, 간 질의 개발 기본 기본 메커니즘을 이해 하기 결정적 이다.
인간의 TLE의 주요 특징을 정리 할 수 있는 동물 모델의 TLE 이상, 우리가 쉽게 모니터링 하 고 epileptogenesis에 중요 한 요소를 조작 수 있도록 더 나은 감사를 제공할 수 있습니다. 그 중, chemoconvulsants 유도 SE 널리4,5되었습니다. 다른 간 질 모델을 보여주는 hippocampal sclerosis 없고 강력한 SRS6,7,의8, 전기 자극과 달리 chemoconvulsants의 조직의 주입 인간의 TLE의 임상 병을 모방 수 있습니다. 즉, 초기 뇌 손상, 잠재성 기간, 그리고 만성 간 질 무대 만들어 낸 SRS5,,910. 따라서,이 기술은 급성 뇌 손상, epileptogenesis, 또는 발작 억제의 메커니즘을 설명 하는 다양 한 연구에 활용할 수 있습니다. 또한, histopathological 변경 chemoconvulsants에 의해 유도 된 인간의 TLE, TLE 설치류 모델10,,1112의 사용에 대 한 추가 논리를 제공 본 그와 유사 하다. 특히, 해 마와 관련 된 구조적 손상 모두 kainic 산 및 pilocarpine-유도 SE 모델에 일관 되 게 재현 되어 있다. 그러나, kainic 산 주입에 비해 pilocarpine 모델 생산할 수 있는 쥐 유전자 변형 마우스 라인5, 의 넓은 가용성을 고려할 때 만성 간 질을 공부에 대 한 상당한 이점을 제공할 수 있는 보다 강력한 SRS 13 , 14 , 15. 게다가, 발작 진행 후 pilocarpine 주입은 일반적으로 보다 빠른 kainic 산 모델에서 간 질의 pilocarpine 모델의 효과적인 사용에 대 한 추가 증거를 제공 하.
여기, pilocarpine의 i.p. 주입 및 비디오 및 만성 간 질에서 뇌 파 모니터링을 수행 하 여 SE 유도 하는 방법을 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6</td><td>Envigo</td><td>C57BL/6NHsd</td><td></td></tr><tr><td>Scopolamine methyl nitrate</td><td>Sigma</td><td>S2250</td><td>Make 10X stock</td></tr><tr><td>Terbutaline hemisulfate salt</td><td>Sigma</td><td>T2528</td><td>Make 10X stock</td></tr><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Sigma</td><td>P6503</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Yuhan corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine hydrochloride</td><td>Bayer Korea</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diazepam</td><td>SAMJIN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castor oil (Kolliphor EL)</td><td>Sigma</td><td>C5135</td><td>Polyoxyl 35 hydrogenated castor oil</td></tr><tr><td>Saline</td><td>Daihan pharm. Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5% Dextrose</td><td>Daihan pharm. Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iodine solution (Povidin)</td><td>Firson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>vet ointment (Terramycin)</td><td>Pfizer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blue Nylon</td><td>AILEE</td><td>NB617</td><td></td></tr><tr><td>Mupirocin (Bearoban)</td><td>Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Samchundang Pharm. Co., Ltd</td><td></td><td>5 mg/kg</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Huons, Ltd.</td><td></td><td>5 mg/kg</td></tr><tr><td>1 mL syringe</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26 guage needle</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td>26 G * 13 mm (1/2&quot;)</td></tr><tr><td>30 guage needle</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td>30 G * 13 mm (1/2&quot;)</td></tr><tr><td>Razor blade</td><td>Dorco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drill</td><td>Saeshin precision Co., Ltd.</td><td></td><td>207A, 35K (speed)</td></tr><tr><td>Telemetry video/EEG system</td><td>Data sciences International. Inc.</td><td>Version 5.20-SP6</td><td></td></tr><tr><td>Implantable transmitter</td><td>Data sciences International. Inc.</td><td>ETA-F10</td><td></td></tr><tr><td>Screw</td><td>Sungho Steel</td><td></td><td>M1.4, 2 mm length stainless steel</td></tr><tr><td>Vertex dental material&amp;nbsp;</td><td>Dentimex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Duksan pure chemicals Co., Ltd.</td><td></td><td>CAS 67-64-1</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA)</td><td>millipore</td><td>1.04005.1000</td><td>4 %&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma</td><td>S9378</td><td>30 % solution in 0.01 M PBS</td></tr><tr><td>Cresyl violet acetate</td><td>Sigma</td><td>C5042</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>EMD Millipore Co.</td><td>UN1170</td><td></td></tr><tr><td>xylene</td><td>Duksan pure chemicals Co., Ltd.</td><td>UN1307</td><td></td></tr><tr><td>Acetic acid glacial</td><td>Junsei chemical</td><td>31010-0350</td><td></td></tr><tr><td>FSC33 Clear&amp;nbsp;</td><td>Leica biosystems</td><td></td><td>OCT compound for tissue freezing</td></tr><tr><td>DPX Mounting for histology</td><td>Sigma</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fine science tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Solco biomedical</td><td>02-2445</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic frame</td><td>David Kopf Instruments</td><td>E51070012</td><td></td></tr></tbody></table>

the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy and eeg monitoring using radiotelemetry system in mice

측 두 엽 간 질 (TLE) 성인에서 일반적인 신경학 적인 장애입니다. 만성 간 질의 변환 연구, pilocarpine 유도 상태 epilepticus (SE) 자발적인 재발 성 발작 (SRS) 정리를 자주 선택 됩니다. 여기 우리 pilocarpine의 복 (i.p.) 주입 및 무선 원격 비디오 및 뇌 파 (EEG) 시스템을 사용 하 여 라이브 동물에서 만성 반복 발작의 모니터링에 의해 SE 유도의 프로토콜을 제시. 우리 pilocarpine 주입 후에 7 일 그리고 6 주 후 pilocarpine hippocampal 신경 손실 그들의 상관 관계 주의 필요로 하는 주목할 만한 행동 변화를 설명 했다. 우리는 또한 비디오 및 뇌 파 기록을 위한 전극 이식의 실험 절차 및 주파수의 분석 및 만성 재발 성 발작의 기간을 설명합니다. 마지막으로, 우리는 가능한 이유 왜 예상된 결과 각 경우에 달성 하지 논의. 이 마우스 및 문제 해결에 대 한 지침에 만성 간 질 모델링의 기본적인 개요를 제공 합니다. 이 프로토콜은 만성 간 질 및 epileptogenesis의 적합 한 모델에 대 한 초기 계획으로 사용할 수 있습니다 생각 합니다.

성공적인 SE hippocampal 세포 죽음과 SRS (그림 1 및 그림 2)을 유도할 수 있다. 우리는 SE 발병 후 3 h에 다이아 제 팜 주사에 의해 행동 급성 발작을 종료 하 고 7 일 또는 6 주 후 쥐를 희생.
비디오-뇌 파 모니터링, 받은 쥐 SE, 후 4 주에 수술 임 플 란 트 및 SRS의 경우 SE 발병 후 5-7 주에서 2 주 동안 평가 했다.
그림 1 cresyl 보라색 얼룩에 의해 평가 하는 해 마에서 세포 죽음을 보여준다. SE 후 7 일, pyknotic 세포에서에서 발견 되었습니다.가 이랑 및 (그림 1Af), 해 마의 CA3 하위의 피라미드 세포 층 hilar 영역 (그림 1광고) 그대로 마 관찰 되었다 반면 가짜 동물 pilocarpine (그림 1Aa-c) 대신 식 염 수를 주입 합니다. 흥미롭게도, 여러 발작을 겪은 동물 하지만 입력 실패 SE, hilar 지역 또는 피라미드 셀 레이어 (그림 1Ag-i) 아무 세포 죽음을 보여주었다. SE 후 6 주, 표시 된 감소는 hilar 셀 (그림 1Bm)의 수에서 관찰 되었다. 또한, 신경 손실은 CA1에서 관찰 되었다 (그림 1억) 및 CA3 (그림 1보) 지역.
그림 2 는 가짜와 SE 그룹 (그림 2A)에서 대표적인 뇌 파 추적을 보여준다. 생리 적인 전기 활동을 보여주는 가짜 그룹에 비해, SE 그룹 때때로 epileptiform 방전 경련 동작 함께 보였다. 경 막 외 전극의 위치는 그림 2C에 설명 됩니다. 그림 2 B 는 인접 한 모니터에서 전기 소리의 예 고 신호 컬렉션의 오류를 보여 줍니다. 우리는 또한 비디오-뇌 파 기록 (그림 2E)의 2 주 동안 자발적인 발작 그리고 대뇌 피 질의 부상 관류, 아마도 지나치게 깊은 배치에서 파생에서 발견 가짜 조작 동물의 뇌 파 추적 시연 경 막 외 나사 (그림 2D)의
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56831/56831fig1.jpg"> 그림 1 : SE pilocarpine 유도 후 해 마에 있는 신경 죽음. 그룹 (A)의 7 일 및 (B) pilocarpine 또는 식 염 수 주입 후 6 주에서 대표 이미지. 확대 이미지 쇼 hilus(, j), CA1 하위 필드 (b, k), 그리고 염 분 처리 가짜 그룹의 CA3 하위 (c, l), hilus (d, m), CA1 하위 ( n,e) SE 그룹과 hilus (g)의 CA3 하위 (f, o), CA1 하위 필드 (h), 그리고 , g및 j 에 SE 블랙 화살표를 개발 하지 않는 쥐의 CA3 하위 (나) 일부 대표적인 hilar 셀 나타내고 화살촉 d 와 m 에 pyknotic 셀을 표시 합니다. 아래쪽에 눈금 막대 왼쪽 = 200 µ m, 대부분 열,에서 눈금 막대는 전체에 대 한 유효한 a 및 c = 20 µ m, 전체 중간 열과 오른쪽 열에 대 한 유효한. 이 그림에서 약어: CA1, CA3: 뿔 Ammonis hippocampal 하위; DG:가 이랑. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56831/56831fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56831/56831fig2.jpg"> 그림 2 : 비디오 및 EEG 기록 간 질 마우스에 자발적인 재발 성 발작을 보여줍니다. (A) 대표적인 뇌 파 추적에서 가짜-(맨 위) 및 SE 조작 동물 (아래). SE 대상이 동물 epileptiform 급상승 활동 표시 (≥ 3 Hz), 하지 가짜 동물에 의해 전시. (B) 전기 소음 및 신호 컬렉션의 실패의 대표 이미지. 높은 진폭 단극 스파이크와 전기 신호의 중단 note. 전극의 위치와 마우스 뇌의 그림 (C) 회로도 (D) 2 이미지 손상과 다친 뇌 경 막 외 나사의 지나치게 깊은 삽입으로 인해 대뇌 피 질에서 보여주는. 오른쪽 이미지에 검은색 화살표는 외피 손상의 사이트를 나타냅니다. 눈금 막대 = 250 µ m. (E) 대표적인 뇌 파의 흔적 가짜 조작 동물 또는 뇌 손상 없이. 대뇌 피 질의 부상으로 가짜 조작 동물 급격히 활동 및 경련 SRS를 생성 하는 것을 참고. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56831/56831fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

이 원고 조직의 pilocarpine 주입 상태 epilepticus를 유도 및 무선 원격 비디오 및 뇌 파 시스템을 사용 하 여 라이브 동물에 자발적인 재발 성 발작을 모니터링 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 만성 간 질, epileptogenesis, 그리고 급성 발작의 pathophysiologic 메커니즘을 공부에 대 한 이용하실 수 있습니다.

측 두 엽 간 질 및 뇌 파 마우스에 Radiotelemetry 시스템을 사용 하 여 모니터링 Pilocarpine 모델

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

19.5K 조회수.  The Catholic University of Korea. 이 원고 조직의 pilocarpine 주입 상태 epilepticus를 유도 및 무선 원격 비디오 및 뇌 파 시스템을 사용 하 여 라이브 동물에 자발적인 재발 성 발작을 모니터링 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 만성 간 질, epileptogenesis, 그리고 급성 발작의 pathophysiologic 메커니즘을 공부에 대 한 이용하실 수 있습니다.

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Simultaneous Video-EEG-ECG Monitoring to Identify Neurocardiac Dysfunction in Mouse Models of Epilepsy

In epilepsy, seizures can evoke cardiac rhythm disturbances such as heart rate changes, conduction blocks, asystoles, and arrhythmias, which can potentially increase risk of sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP). Electroencephalography (EEG) and electrocardiography (ECG) are widely used clinical diagnostic tools to monitor for abnormal brain and cardiac rhythms in patients. Here, a technique to simultaneously record video, EEG, and ECG in mice to measure behavior, brain, and cardiac activities, respectively, is described. The technique described herein utilizes a tethered (i.e., wired) recording configuration in which the implanted electrode on the head of the mouse is hard-wired to the recording equipment. Compared to wireless telemetry recording systems, the tethered arrangement possesses several technical advantages such as a greater possible number of channels for recording EEG or other biopotentials; lower electrode costs; and greater frequency bandwidth (i.e., sampling rate) of recordings. The basics of this technique can also be easily modified to accommodate recording other biosignals, such as electromyography (EMG) or plethysmography for assessment of muscle and respiratory activity, respectively. In addition to describing how to perform the EEG-ECG recordings, we also detail methods to quantify the resulting data for seizures, EEG spectral power, cardiac function, and heart rate variability, which we demonstrate in an example experiment using a mouse with epilepsy due to Kcna1 gene deletion. Video-EEG-ECG monitoring in mouse models of epilepsy or other neurological disease provides a powerful tool to identify dysfunction at the level of the brain, heart, or brain-heart interactions.

Here, we present a protocol to record brain and heart bio signals in mice using simultaneous video, electroencephalography (EEG), and electrocardiography (ECG). We also describe methods to analyze the resulting EEG-ECG recordings for seizures, EEG spectral power, cardiac function, and heart rate variability.

동시 비디오-뇌 파-ECG 모니터링 Neurocardiac 부전 간 질 마우스 모델에서을 식별 하

In epilepsy, seizures can evoke cardiac rhythm disturbances such as heart rate changes, conduction blocks, asystoles, and arrhythmias, which can ...

연구

유전학

Manipulation of Epileptiform Electrocorticograms (ECoGs) and Sleep in Rats and Mice by Acupuncture

Ancient Chinese literature has documented that acupuncture possesses efficient therapeutic effects on epilepsy and insomnia. There is, however, little research to reveal the possible mechanisms behind these effects. To investigate the effect of acupuncture on epilepsy and sleep, several issues need to be addressed. The first is to identify the acupoints, which correspond between humans, rats, and mice. Furthermore, the depth of insertion of the acupuncture needle, the degree of needle twist in manual needle acupuncture, and the stimulation parameters for electroacupuncture (EA) need to be determined. To evaluate the effects of acupuncture on epilepsy and sleep, a feasible model of epilepsy in rodents is required. We administer pilocarpine into the left central nucleus of the amygdala (CeA) to simulate focal temporal lobe epilepsy (TLE) in rats. Intraperitoneal (IP) injection of pilocarpine induces generalized epilepsy and status epilepticus (SE) in rats. Five IP injections of pentylenetetrazol (PTZ) with a one-day interval between each injection successfully induces spontaneous generalized epilepsy in mice. Recordings of electrocorticograms (ECoGs), electromyograms (EMGs), brain temperature, and locomotor activity are used for sleep analysis in rats, while ECoGs, EMGs, and locomotor activity are employed for sleep analysis in mice. ECoG electrodes are implanted into the frontal, parietal, and contralateral occipital cortices, and a thermistor is implanted above the cerebral cortex by stereotactic surgery. EMG electrodes are implanted into the neck muscles, and an infrared detector determines locomotor activity. The criteria for categorizing vigilance stages, including wakefulness, rapid eye movement (REM) sleep, and non-REM (NREM) sleep are based on information from ECoGs, EMGs, brain temperature, and locomotor activity. Detailed classification criteria are stated in the text.

Manipulation of Epileptiform Electrocorticograms ECoGs and Sleep in Rats and Mice by Acupuncture

This paper demonstrates the performance of acupuncture, epilepsy models, and the analysis of sleep in rodents. The acupuncture procedure and the identification of acupoints are described. Pilocarpine or pentylenetetrazol (PTZ) is used to induce epilepsy. Electrocorticogram (ECoG), electromyogram (EMG), brain temperature, and locomotor activity recordings are employed for sleep analysis.

침술에 의해 쥐와 마우스에서 간질 Electrocorticograms (ECoGs)의 조작 및 절전

Ancient Chinese literature has documented that acupuncture possesses efficient therapeutic effects on epilepsy and insomnia. There is, however, little ...

행동분석학

Use of a Wireless Video-EEG System to Monitor Epileptiform Discharges Following Lateral Fluid-Percussion Induced Traumatic Brain Injury

The lateral fluid percussion injury (FPI) model is well established and has been used to study TBI and post-traumatic epilepsy (PTE). However, considerable variability has been reported for the specific parameters used in different studies that have employed this model, making it difficult to harmonize and interpret the results between laboratories. For example, variability has been reported regarding the size and location of the craniectomy, how the Luer lock hub is placed relative to the craniectomy, the atmospheric pressure applied to the dura and the duration of the pressure pulse. Each of these parameters can impact injury severity, which directly correlates with the incidence of PTE. This has been manifested as a wide range of mortality rates, righting reflex times and incidence of convulsive seizures reported. Here we provide a detailed protocol for the method we have used to help facilitate harmonization between studies. We used FPI in combination with a wireless EEG telemetry system to continuously monitor for electrographic changes and detect seizure activity.&#160; FPI is induced by creating a 5 mm craniectomy over the left hemisphere, between the Bregma and Lambda and adjacent to the lateral ridge. A Luer lock hub is secured onto the skull over the craniectomy. This hub is connected to the FPI device, and a 20-millisecond pressure pulse is delivered directly to the intact dura through pressure tubing connected to the hub via a twist lock connector. Following recovery, rats are re-anesthetized to remove the hub. Five 0.5 mm, stainless steel EEG electrode screws are placed in contact with the dura through the skull and serve as four recording electrodes and one reference electrode. The electrode wires are collected into a pedestal connector which is secured into place with bone cement. Continuous video/EEG recordings are collected for up to 4 weeks post TBI.

Here we present a protocol to induce severe TBI with the lateral fluid percussion injury (FPI) model in adult, male Wistar rats. We also demonstrate the use of a wireless telemetry system to collect continuous video-EEG recordings and monitor for epileptiform discharges consistent with post-traumatic epileptogenesis.&#160;

무선 비디오-EEG 시스템 사용으로 측면 유체-타악기 유도 외상성 뇌 손상 다음 간질 방전 모니터링

The lateral fluid percussion injury (FPI) model is well established and has been used to study TBI and post-traumatic epilepsy (PTE). However, ...

Inducing Post-Traumatic Epilepsy in a Mouse Model of Repetitive Diffuse Traumatic Brain Injury

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of acquired epilepsy. TBI can result in a focal or diffuse brain injury. Focal injury is a result of direct mechanical forces, sometimes penetrating through the cranium, creating a direct lesion in the brain tissue. These are visible during brain imaging as areas with contusion, laceration, and hemorrhage. Focal lesions induce neuronal death and glial scar formation and are present in 20%&minus;25% of all people who incur a TBI. However, in the majority of TBI cases, injury is caused by acceleration-deceleration forces and subsequent tissue shearing, resulting in nonfocal, diffuse damage. A subpopulation of TBI patients continues to develop post-traumatic epilepsy (PTE) after a latency period of months or years. Currently, it is impossible to predict which patients will develop PTE, and seizures in PTE patients are challenging to control, necessitating further research. Until recently, the field was limited to only two animal/rodent models with validated spontaneous post-traumatic seizures, both presenting with large focal lesions with massive tissue loss in the cortex and sometimes subcortical structures. In contrast to these approaches, it was determined that diffuse TBI induced using a modified weight drop model is sufficient to initiate development of spontaneous convulsive and non-convulsive seizures, even in the absence of focal lesions or tissue loss. Similar to human patients with acquired post-traumatic epilepsy, this model presents with a latency period after injury before seizure onset. In this protocol, the community will be provided with a new model of post-traumatic epilepsy, detailing how to induce diffuse non-lesional TBI followed by continuous long-term video-electroencephalographic animal monitoring over the course of several months. This protocol will detail animal handling, the weight drop procedure, the electrode placement for two acquisition systems, and the frequent challenges encountered during each of the steps of surgery, postoperative monitoring, and data acquisition.

This systematic protocol describes a new animal model of post-traumatic epilepsy after repetitive mild traumatic brain injury. The first part details steps for traumatic brain injury induction using a modified weight drop model. The second part provides instructions on the surgical approach for single- and multi-channel electroencephalographic data acquisition systems.

반복적 확산 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 외상 후 간질 유도

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of acquired epilepsy. TBI can result in a focal or diffuse brain injury. Focal injury is a result of ...

Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System

Many progressive neurologic diseases in humans, such as epilepsy, require pre-clinical animal models that slowly develop the disease in order to test interventions at various stages of the disease process. These animal models are particularly difficult to implement in immature rodents, a classic model organism for laboratory study of these disorders. Recording continuous EEG in young animal models of seizures and other neurological disorders presents a technical challenge due to the small physical size of young rodents and their dependence on the dam prior to weaning. Therefore, there is not only a clear need for improving pre-clinical research that will better identify those therapies suitable for translation to the clinic but also a need for new devices capable of recording continuous EEG in immature rodents. Here, we describe the technology behind and demonstrate the use of a novel miniature telemetry system, specifically engineered for use in immature rats or mice, which is also effective for use in adult animals.

Here we demonstrate the use of a wireless enabling technology for electroencephalogram (EEG) in neonatal rodent models of human disease. With telemetry, there are no encumbering connections, thus allowing natural behaviors.

신기원 무선 송신기 시스템을 사용하여 인간의 질병의 작은 설치류 모델에서 장기 연속 뇌파 모니터링

Many progressive neurologic diseases in humans, such as epilepsy, require pre-clinical animal models that slowly develop the disease in order to test ...

신경과학

Non-restraining EEG Radiotelemetry: Epidural and Deep Intracerebral Stereotaxic EEG Electrode Placement

Implantable EEG radiotelemetry is of central relevance in the neurological characterization of transgenic mouse models of neuropsychiatric and neurodegenerative diseases as well as epilepsies. This powerful technique does not only provide valuable insights into the underlying pathophysiological mechanisms, i.e., the etiopathogenesis of CNS related diseases, it also facilitates the development of new translational, i.e., therapeutic approaches. Whereas competing techniques that make use of recorder systems used in jackets or tethered systems suffer from their unphysiological restraining to semi-restraining character, radiotelemetric EEG recordings overcome these disadvantages. Technically, implantable EEG radiotelemetry allows for precise and highly sensitive measurement of epidural and deep, intracerebral EEGs under various physiological and pathophysiological conditions. First, we present a detailed protocol of a straight forward, successful, quick and efficient technique for epidural (surface) EEG recordings resulting in high-quality electrocorticograms. Second, we demonstrate how to implant deep, intracerebral EEG electrodes, e.g., in the hippocampus (electrohippocampogram). For both approaches, a computerized 3D stereotaxic electrode implantation system is used. The radiofrequency transmitter itself is implanted into a subcutaneous pouch in both mice and rats. Special attention also has to be paid to pre-, peri- and postoperative treatment of the experimental animals. Preoperative preparation of mice and rats, suitable anesthesia as well as postoperative treatment and pain management are described in detail.

Non-restraining EEG radiotelemetry is a valuable methodological approach to record in vivo long-term electroencephalograms from freely moving rodents. This detailed protocol describes stereotaxic epidural and deep intracerebral electrode placement in different brain regions in order to obtain reliable recordings of CNS rhythmicity and CNS related behavioral stages.

비 금지 EEG Radiotelemetry : 경막 외 및 깊은 뇌내 정위 EEG 전극 위치

Implantable EEG radiotelemetry is of central relevance in the neurological characterization of transgenic mouse models of neuropsychiatric and ...

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain interstitial space with the behavior and/or with the specific outcome of a pathology (e.g., seizures for epilepsy). When studying epilepsy, the microdialysis technique is often combined with short-term or even long-term video-electroencephalography (EEG) monitoring to assess spontaneous seizure frequency, severity, progression and clustering. The combined microdialysis-EEG is based on the use of several methods and instruments. Here, we performed in vivo microdialysis and continuous video-EEG recording to monitor glutamate and aspartate outflow over time, in different phases of the natural history of epilepsy in a rat model. This combined approach allows the pairing of changes in the neurotransmitter release with specific stages of the disease development and progression. The amino acid concentration in the dialysate was determined by liquid chromatography. Here, we describe the methods and outline the principal precautionary measures one should take during in vivo microdialysis-EEG, with particular attention to the stereotaxic surgery, basal and high potassium stimulation during microdialysis, depth electrode EEG recording and high-performance liquid chromatography analysis of aspartate and glutamate in the dialysate. This approach may be adapted to test a variety of drug or disease induced changes of the physiological concentrations of aspartate and glutamate in the brain. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, it may be further used to test different soluble molecules when employing EEG recording at the same time.

Here, we describe a method for in vivo microdialysis to analyze aspartate and glutamate release in the ventral hippocampus of epileptic and non-epileptic rats, in combination with EEG recordings. Extracellular concentrations of aspartate and glutamate may be correlated with the different phases of the disease.

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique VGAT-Cre mice were used in developing spontaneous recurring seizures (SRS) after kindling and a likely mechanism - insertion of Cre into the VGAT gene - disrupted its expression and reduced GABAergic tone. The present study extends these observations to a larger cohort of mice, focusing on key issues such as how long the SRS continues after kindling and the effect of the animal's sex and age. This report describes the protocols for the following key steps: making headsets with hippocampal depth electrodes for electrical stimulation and for reading the electroencephalogram; surgery to affix the headset securely on the mouse's skull so that it does not fall off; and key details of the electrical kindling protocol such as duration of the pulse, frequency of train, duration of train, and amount of current injected. The kindling protocol is robust in that it reliably leads to epilepsy in most VGAT-Cre mice, providing a new model to test for novel antiepileptogenic drugs.

This report describes the methods to generate a model of temporal lobe epilepsy based on the electrical kindling of transgenic VGAT-Cre mice. Kindled VGAT-Cre mice may be useful in determining what causes epilepsy and for screening novel therapies.

측두엽 간질에 대한 모델을 생성하기 위해 전기적으로 점화되는 VGAT-Cre 마우스를 위한 전극의 준비 및 이식

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few studies have described the experimental protocol in detail. This paper illustrates the whole process of amygdala electrical kindling epilepsy model making, with the introduction of a method of bipolar electrode fabrication. This electrode can both stimulate and record, reducing brain injury caused by implanting separate electrodes for stimulation and recording. For long-term electroencephalogram (EEG) recording purposes, slip rings were used to eliminate the record interruption caused by cable tangles and falling off.
After periodic stimulation (60 Hz, 1 s every 15 min) of the basolateral amygdala (AP: 1.67 mm, L: 2.7 mm, V: 4.9 mm) for 19.83 &plusmn; 5.742 times, full kindling was observed in six mice (defined as induction of three continuous grade V episodes classified by Racine's scale). An intracranial EEG was recorded throughout the entire kindling process, and an epileptic discharge in the amygdala lasting 20-70 s was observed after kindling. Therefore, this is a robust protocol for modeling epilepsy originating from the amygdala, and the method is suitable for revealing the role of the amygdala in temporal lobe epilepsy. This research contributes to future studies on the mechanisms of mesial temporal lobe epilepsy and novel antiepileptogenic drugs.

The amygdala plays a key role in temporal lobe epilepsy, which originates in and propagates from this structure. This article provides a detailed description of the fabrication of deep brain electrodes with both recording and stimulating functions. It introduces a model of medial temporal lobe epilepsy originating from the amygdala.

양극성 전극을 사용하여 편도체의 전기적 점화에 의한 측두엽 간질 마우스 모델 생성

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Systemic Pilocarpine Treatment: Mouse Model of Temporal Lobe Epilepsy

Source: Kim, J. E. and Cho, K. O. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/video/56831/the-pilocarpine-model-temporal-lobe-epilepsy-eeg-monitoring-using">The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice</a>. J. Vis. Exp. (2018).
This video presents the procedure for inducing status epilepticus (SE) in mice by systemic administration of pilocarpine to model temporal lobe epilepsy.

전신 필로카르핀 치료: 측두엽 간질의 마우스 모델

Source: Kim, J. E. and Cho, K. O. The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice. J. Vis. Exp. ...