이 연구는 기초 과학 연구 프로그램에 의해 지원 되었다 (프로젝트 번호: 2016R1A2B4013467)를 통해 국립 연구 재단의 한국 (NRF) 사역의 과학, ICT 및 미래 계획 2016에 의해 투자 하 고 또한 한국 기초 과학 지원 연구소 연구 프로그램 (프로젝트 번호: C36707).

1입니다. DMMTAV 의 합성
<ol><li>
화학 준비 및 어 금 니 비율 혼합 DMAV, 나2, S 및 H2이렇게4 참고: DMAV: 없음2S:H2이렇게4 = 1:1.6:1.6<ol>
<li>5.24 g DMAV 40 mL 이온된과 N2의 분해-제거 (적어도 30 분 동안 제거) 50 mL 원심 분리기 튜브에 물.</li>
		<li>나2S·9H2O 50 ml 이온과 N2의 14.41 g을 용 해 하 여 Na2S 시 약 준비-250 mL 플라스 크에 물 제거.</li>
		<li>그래서4 시 약 40 mL에 집중된 한 황산 (96%)의 3.3 mL를 추가 하 여 이온 H2와 N2준비-50 mL 원심 분리기 튜브에서 물 제거. 참고: DMAV의 마지막 어 금 니 비율: 없음2S:H2등4 = 1:1.6:1.6 1,,34,,815.</li>
		<li>250 mL 플라스 크 (1.1.2 단계)에 포함 된 없음2S 솔루션 50 mL를 DMAV 솔루션 (1.1.1 단계)의 준비 40 mL를 추가 합니다. DMAV 제거 물 10 mL와 함께 들어 있는 튜브를 헹 구 고 뿐만 아니라 250 mL 플라스 크에 이것을 추가.</li>
		<li>유리 튜브 장착 3 홀 고무 마 개와 함께 플라스 크를 닫습니다. 유리를 사용 하 여 튜브 N2 가스 유입, 유출, 변조 및 H2이렇게4 솔루션 입구, 각각. 즉시 플라스 크를 닫은 후 플라스 크에 N2 가스 흐름을 허용 합니다. 참고: 가스 압력 없이 튀는 반응 솔루션의 표면 흐름 유지 되어야 한다.</li>
		<li>산 성 저항 튜빙 H2의 유리 튜브 등4 솔루션 입구 그래서 H2의 준비 된 40 mL를 추가 하려면 50 mL 주사기와 연결4 솔루션 (1.1.3 단계). 그래서 H2의 40 mL를 추가4 솔루션, 천천히 그리고 stepwise 방식에서. 주의: 황산, 추가 시 흰색 가스 생성 됩니다; 환기가 연기 후드를 사용 합니다.</li>
		<li>정기적으로 황산을 추가 하는 동안 플라스 크에서 반응 혼합물의 색상 변화를 모니터링 합니다. 그래서 H2의 상품 4-5 mL의 간격 유지4. 혼합물은 흰색 흐린 솔루션 이어야 한다. 참고: 즉각적인 노란색 강 수 집중된 한 황산의 빠른 추가 인해 나타날 수 있습니다.</li>
		<li>반응 솔루션 단계 1.1.4의 시작 이후 1 시간 서 있다 확인 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DMMTAV 추출 액체-액체 추출 방법을 사용 하 여
	<ol>
<li>1 시간 후 반응 솔루션을 diethyl 에테르의 약 200 mL를 포함 하는 separatory 깔때기에 붓는 다.</li>
		<li>자 지를 전환 하 여 여러 번 가스를 방출 하는 5-10 분에 대 한 퍼 널을 흔들어. 참고: 합성된 DMMTAV diethyl 에테르 (0.713 g·mL-1)의 상위 계층에 전송 됩니다. 주의: Diethyl 에테르 가스 해로울 수 있습니다; 환기가 연기 후드를 사용 합니다.</li>
		<li>비 커에 반응 솔루션을 수집 하 고 별도로 수집 diethyl 에테르 DMMTAV 병에 포함 된. 다시 동일한 separatory 깔때기에에서 반응 솔루션을 놓고 신선한 diethyl 에테르 reshaking의 약 200 mL를 추가 합니다. 단계 1.2.2-1.2.3 세 번 반복 합니다.</li>
		<li>다시, 동일한 separatory 깔때기로 1.2.3 단계에서 수집 된 diethyl 에테르를 부 어 고 추가 약 100 mL N2-이온된 수를 제거. 5-10 분 동안 흔들어 하 고 N2를 삭제-이온된 수와 순수성을 위해 diethyl 에테르의 몇 mL를 제거. (최소 내경 160 m m) 및 50 mm의 최소 높이 유리 페 트리 접시에 나머지 diethyl 에테르를 수집 합니다.</li>
		<li>종 변화를 방지 하기 위해 N2 분위기 장갑 상자에 유리 페 트리 접시를 전송 합니다. 주의: 용 매는 통과 상자의 콘센트를 통해 진공 펌프에 뽑아 하지 있는지 확인 합니다.</li>
		<li>Dimethylmonothioarsinate의 백색 침전까지 건조 (crystalized DMMTAV) 유리 페 트리 접시에 형성 된다. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
합성된 DMMTAV 및 스토리지의 확인
	<ol>
<li>받아 crystalized DMMTAV의 백색 침전 및 측정 하 고 그것의 총 무게를 기록. 주의: 황화 수소 가스의 흡입을 방지 하기 위해 통풍이 잘 연기 후드 나 글로브 박스를 사용 합니다.</li>
		<li>디졸브 crystalized DMMTAV N2의 50 ml-이온된 수를 제거 하 고 노란색 침전 0.2 µ m 주사기 필터를 통해 필터링.</li>
		<li>가정 사용된 DMAV 로 총 DMMTAV, 즉≈9, 649 mg As·로 변환 됩니다 L-1 ≈1 mg· DMMTAV 재고 솔루션을 희석 L-1 과 ≈40 µg· L-1 분무 이온화를 사용 하 여 검증 분석에 대 한 질량 Spectromtery (ESI-석사)와 HPLC-ICP-MS, 각각.</li>
		<li>DMMTAV 긍정적인 이온 모드에서 m/z 155 또는 부정적인 이온 모드 (표 1)에서 m/z 153 ESI MS11,16 와 조각을 사용 하 여의 m/z 를 분석 합니다. 참고: m/z (표 1)의 참조 값을 참조 합니다.</li>
		<li>HPLC-ICP-MS11,,1617 를 사용 하 여 적절 한 eluent 조건 재고 솔루션에서 DMMTAV 의 크로마를 분석 하 고 확인 하는 주요 피크에 설명 된 보존 기간에서 발견 되는 문학입니다. 참고: 합성된 DMMTAV 의 순 결 해야 계산 단계 1.3.5에서에서 분석 결과 사용 하 여.</li>
		<li>산 성 소화11 후 ICP-MS를 사용 하 여 총 비소 농도 분석 하 고 희석 요인 및 다음 방정식에서 순도 사용 하 여 합성된 DMMTAV 재고 솔루션에 진정한 DMMTAV 농도 계산: 농도 (µg·로 분석 된 총 L-1) · 희석 비율 · 순도 (%) = DMMTAV 재고 솔루션 (µg·에서에서 진정한 DMMTAV 농도 L-1)</li>
		<li>추가 양적 speciation 분석18어둠 속에서 4 ° C에서 DMMTAV 재고 솔루션을 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2입니다. DMDTAV 의 합성
<ol><li>
화학 준비 및 어 금 니 비율 혼합 DMAV , 나2, S 및 H2이렇게4 참고: DMAV: 없음2S:H2이렇게4 = 1:7.5:7.5<ol>
<li>1.38 g 40 이온된 물 50 mL 원심 분리기 튜브에서에 DMAV 의 분해.</li>
		<li>나2S·9H2O 250 mL 플라스 크에 물 50 mL 이온된의 18.01 g을 용 해 하 여 Na2S 시 약을 준비 합니다.</li>
		<li>그래서 이온된 물 40 mL에 집중된 한 황산 (96%)의 4 개 mL를 추가 하 여4 시 약 50 mL 원심 분리기 튜브에 포함 된 H2를 준비 합니다. 참고: DMAV의 마지막 어 금 니 비율: 없음2S:H2등4 = 1:7.5:7.51,,34,,815.</li>
		<li>250 mL 플라스 크 (단계 2.1.2)에 포함 된 없음2S 솔루션 50 mL를 DMAV 솔루션 (2.1.1 단계)의 준비 40 mL를 추가 합니다. 이온된 수 10 mL와 DMAV 를 포함 하는 튜브를 헹 구 고 뿐만 아니라 250 mL 플라스 크에 이것을 추가.</li>
		<li>그래서 H2의 준비 된 40 mL를 추가4 솔루션 (2.1.3 단계) 천천히 그리고 플라스 크에 stepwise 방식에서.</li>
		<li>정기적으로 황산을 추가 하는 동안 플라스 크에서 반응 혼합물의 색상 변화를 모니터링 합니다. 그래서 H2의 상품 4-5 mL의 간격 유지4. 혼합 백색/황색 흐린 솔루션 이어야 한다. 참고: 즉각적인 노란색 강 수 집중된 한 황산의 빠른 추가 인해 나타날 수 있습니다. 주의: 황산, 추가 시 흰색 가스 생성 됩니다; 통풍이 잘 연기 후드를 사용 합니다.</li>
		<li>덮 음 없이 하룻밤 플라스 크에서 반응 솔루션을 유지 관리 합니다. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
고체 상 추출 (SPE) 메서드를 사용 하 여 DMDTAV 추출
	<ol>
<li>밤새 서 반응 후 반응 솔루션 C18 주사기를 사용 하 여 트랩 하려면 실리 카 기반 SPE를 입력 필터 합성 수 지에 DMDTAV . 주의: 환기가 연기 후드를 사용 합니다.</li>
		<li>0.77 g 염화 아세테이트 이온 물 1 L에 용 해 하 여 10 m m 염화 아세테이트 (pH 6.3)을 준비 합니다. C18 주사기 (단계 2.2.1) 추출 흡착된 DMDTAV를 통해 충분 한 양의 10 m m 염화 아세테이트 elute. 필터링 된 암모늄 아세테이트 페 트리 접시 (최소 내경 160 m m)와 최소 높이 50 m m의 유리에서를 수집 합니다.</li>
		<li>종 변화를 방지 하기 위해 N2 분위기 장갑 상자에 유리 페 트리 접시를 전송 합니다. 주의: 용 매는 통과 상자의 콘센트를 통해 진공 펌프에 뽑아 하지 있는지 확인 합니다.</li>
		<li>Dimethyldithioarsinate의 백색 침전 될 때까지 건조 (crystalized DMDTAV) 유리 페 트리 접시에 형성. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
합성된 DMDTAV 및 스토리지의 확인
	<ol>
<li>Crystalized DMDTAV의 백색 침전을 측정 기록의 총 무게를 측정. 주의: 황화 수소 가스의 흡입을 방지 하기 위해 통풍이 잘되는 증기 두건 또는 장갑 상자를 사용 합니다.</li>
		<li>디졸브 crystalized DMDTAV N2의 50 ml-제거 이온된 물 50 mL 튜브, 원심 및 어떤 침전 0.2 µ m 주사기 필터를 통해 필터링.</li>
		<li>가정 사용된 DMAV 로 총 DMDTAV, 즉≈2, 539 mg As·로 변환 됩니다 L-1 ≈1 mg· DMDTAV 재고 솔루션을 희석 L-1 과 ≈40 µg· ESI-MS와 HPLC-ICP-MS, 각각 사용 하 여 확인 분석을 위해 L-1</li>
		<li>M/z DMDTAV 사용 하 여 ESI MS11,16 조각 긍정적인 이온 모드에서 m/z 171 또는 부정적인 이온 모드 (표 1)에서 m/z 169의 분석. 참고: m/z (표 1)의 참조 값을 참조 합니다.</li>
		<li>HPLC-ICP-MS11,,1617 를 사용 하 여 적절 한 eluent 조건 재고 솔루션에서 DMDTAV 의 크로마를 분석 하 고 피크에 설명 된 보존 기간에서 발견 된다 확인 문학입니다. 참고: 합성된 DMDTAV 의 순 결 해야 계산 단계 2.3.5에서에서 분석 결과 사용 하 여.</li>
		<li>산 성 소화11 후 ICP-MS를 사용 하 여 총 비소 농도 분석 하 고 다음 방정식으로 희석 요인 및 순도 사용 하 여 합성된 DMDTAV 재고 솔루션에 진정한 DMDTAV 농도 계산: 농도 (µg·로 분석 된 총 L-1) · 희석 비율 · 순도 (%) = 재고 솔루션 (µg· DMDTAV 의 진정한 DMDTAV 농도 L-1)</li>
		<li>추가 양적 speciation 분석18어둠 속에서 4 ° C에서 DMDTAV 재고 솔루션을 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Suzuki, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethylthioarsenicals+as+arsenic+metabolites+and+their+chemical+preparation.">Dimethylthioarsenicals as arsenic metabolites and their chemical preparation.</a> Chem. Res. Toxicol. 17, 914-921 (2004).</li><li>Kuroda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+metabolite+of+dimethylarsinic+acid+is+highly+toxic+and+genotoxic.">Microbial metabolite of dimethylarsinic acid is highly toxic and genotoxic.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 198, 345-353 (2004).</li><li>Naranmandura, H., Iwata, K., Suzuki, K. T., Ogra, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+metabolism+of+four+different+dimethylated+arsenicals+in+hamsters.">Distribution and metabolism of four different dimethylated arsenicals in hamsters.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 245, 67-75 (2010).</li><li>Naranmandura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+toxicity+of+arsenic+metabolites+in+human+bladder+cancer+EJ-1+cells.">Comparative toxicity of arsenic metabolites in human bladder cancer EJ-1 cells.</a> Chem. Res. Toxicol. 24, 1586-1596 (2011).</li><li>Wallschlager, D., London, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+methylated+arsenic-sulfur+compounds+in+groundwater.">Determination of methylated arsenic-sulfur compounds in groundwater.</a> Environ. Sci. Technol. 42, 228-234 (2008).</li><li>Zhang, J., Kim, H., Townsend, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+for+assessing+thioarsenic+formation+potential+in+sulfidic+landfill+environments.">Methodology for assessing thioarsenic formation potential in sulfidic landfill environments.</a> Chemosphere. 107, 311-318 (2014).</li><li>Shimoda, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proposal+for+novel+metabolic+pathway+of+highly+toxic+dimethylated+arsenics+accompanied+by+enzymatic+sulfuration,+desulfuration+and+oxidation.">Proposal for novel metabolic pathway of highly toxic dimethylated arsenics accompanied by enzymatic sulfuration, desulfuration and oxidation.</a> Trace Elem. Med. Biol. 30, 129-136 (2015).</li><li>Naranmandura, H., Suzuki, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+dimethylthioarsenicals+in+red+blood+cells.">Formation of dimethylthioarsenicals in red blood cells.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 227, 390-399 (2008).</li><li>Leffers, L., Ebert, F., Taleshi, S. M., Francesconi, A. K., Schwerdtle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+toxicological+characterization+of+two+arsenosugars+and+their+metabolites.">In vitro toxicological characterization of two arsenosugars and their metabolites.</a> Mol. Nutr. Food Res. 57, 1270-1282 (2013).</li><li>Wang, Q. Q., Thomas, J. D., Naranmandura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Important+of+being+thiomethylated:+Formation,+Fate+and+Effects+of+methylated+thioarsenicals.">Important of being thiomethylated: Formation, Fate and Effects of methylated thioarsenicals.</a> Chem. Res. Toxicol. 25, 281-289 (2015).</li><li>Kim, Y. T., Lee, H., Yoon, H. O., Woo, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+dimethylated+thioarsenicals+and+the+formation+of+highly+toxic+dimethylmonothioarsinic+acid+in+environment.">Kinetics of dimethylated thioarsenicals and the formation of highly toxic dimethylmonothioarsinic acid in environment.</a> Environ. Sci. Technol. 50, 11637-11645 (2016).</li><li>Cullen, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylated+and+thiolated+arsenic+species+for+environmental+and+health+research+-+A+review+on+synthesis+and+characterization.">Methylated and thiolated arsenic species for environmental and health research - A review on synthesis and characterization.</a> J. Environ. Sci. 49, 7-27 (2016).</li><li>Fricke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatographic+separation+and+identification+of+products+form+the+reaction+of+dimethylarsinic+acid+with+hydrogen+sulfide.">Chromatographic separation and identification of products form the reaction of dimethylarsinic acid with hydrogen sulfide.</a> Chem. Res. Toxicol. 18, 1821-1829 (2005).</li><li>Fricke, M., Zeller, M., Cullen, W., Witkowski, M., Creed, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethylthioarsinic+anhydride:+a+standard+for+arsenic+speciation.">Dimethylthioarsinic anhydride: a standard for arsenic speciation.</a> Anal. Chim. Acta. 583, 78-83 (2007).</li><li>Suzuki, K. T., Iwata, K., Naranmandura, H., Suzuki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+differences+between+twon+dimethylthioarsenicals+in+rats.">Metabolic differences between twon dimethylthioarsenicals in rats.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 218, 166-173 (2007).</li><li>Jeong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+simultaneous+analytical+method+to+determine+arsenic+speciation+using+HPLC-ICP-MS:+Arsenate,+arsenite,+monomethylarsonic+acid,+dimethylarsinic+acid,+dimethyldithioarsinic+acid,+and+dimethylmonothioarsinic+acid.">Development of a simultaneous analytical method to determine arsenic speciation using HPLC-ICP-MS: Arsenate, arsenite, monomethylarsonic acid, dimethylarsinic acid, dimethyldithioarsinic acid, and dimethylmonothioarsinic acid.</a> Microchem. J. 134, 295-300 (2017).</li><li>Li, Y., Low, C. -. K., Scott, A. J., Amal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arsenic+speciation+in+municipal+landfill+leachate.">Arsenic speciation in municipal landfill leachate.</a> Chemosphere. 79, 794-801 (2010).</li><li>Conklin, D. S., Fricke, W. M., Creed, A. P., Creed, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+pH+effects+on+the+formation+of+methylated+thio-arsenicals,+and+the+effects+of+pH+and+temperature+on+their+stability.">Investigation of the pH effects on the formation of methylated thio-arsenicals, and the effects of pH and temperature on their stability.</a> J. Anal. At. Spectrom. 23, 711-716 (2008).</li><li>Hansen, H. R., Raab, A., Jaspara, M., Milne, F. B., Feldmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfur-containing+arsenical+mistaken+for+dimethylarsinous+acid+[DMA(III)]+and+identified+as+a+natural+metabolite+in+urine:+major+implications+for+studies+on+arsenic+metabolism+and+toxicity.">Sulfur-containing arsenical mistaken for dimethylarsinous acid [DMA(III)] and identified as a natural metabolite in urine: major implications for studies on arsenic metabolism and toxicity.</a> Chem. Res. Toxicol. 17, 1086-1091 (2004).</li><li>Mandal, B. K., Suzuki, K. T., Anzai, K., Yamaguchi, K., Sei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+SEC-HPLC-ICP-MS+hyphenated+technique+for+identification+of+sulfur-containing+arsenic+metabolites+in+biological+samples.">A SEC-HPLC-ICP-MS hyphenated technique for identification of sulfur-containing arsenic metabolites in biological samples.</a> J. Chromatogr. B. 874, 64-76 (2008).</li><li>Bartel, M., Ebert, F., Leffers, L., Karst, U., Schwerdtle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicological+characterization+of+the+inorganic+and+organic+arsenic+metabolite+thio-DMAV+in+cultured+human+lung+cells.">Toxicological characterization of the inorganic and organic arsenic metabolite thio-DMAV in cultured human lung cells.</a> J. Toxicol. 2011, (2011).</li><li>An, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+dimethyldithioarsinic+acid+in+a+simulated+landfill+leachate+in+relation+to+hydrosulfide+concentration.">Formation of dimethyldithioarsinic acid in a simulated landfill leachate in relation to hydrosulfide concentration.</a> Environ. Geochem. Health. 38, 255-263 (2016).</li><li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arsenic+speciation+in+the+blood+of+arsenite-treated+F344+rats.">Arsenic speciation in the blood of arsenite-treated F344 rats.</a> Chem. Res. Toxicol. 26, 952-962 (2013).</li><li>Alava, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HPLC-ICP-MS+method+development+to+monitor+arsenic+speciation+changes+by+human+gut+microbiota.">HPLC-ICP-MS method development to monitor arsenic speciation changes by human gut microbiota.</a> Biomed. Chromatogr. 26, 524-533 (2012).</li><li>Kurosawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+metabolic+activation+associated+with+glutathione+in+dimethylmonoarsinic+acid+(DMMTAV)-induced+toxicity+obtained+from+in+vitro+reaction+of+DMMTAV+with+glutathione.">A novel metabolic activation associated with glutathione in dimethylmonoarsinic acid (DMMTAV)-induced toxicity obtained from in vitro reaction of DMMTAV with glutathione.</a> J. trace Elem. Med. Biol. 33, 87-94 (2016).</li></ol>

저자는 공개 없다.

개발된 프로토콜은 중요 한 단계는 이전 연구1,,34,,815 생략 또는 약식, 수 있다 이끌어 어려움 또는 중 오류를 명확히 DMMTAV 및 DMDTAV 합성. 화학 시 약의 합성에 대 한 N2를 사용 하 여 준비 DMMTAV 는 산화에 민감한1,<sup c...

때문에 dimethylarsinic 산 (DMAV) 급성 독성 및 메 틸 화 및 섭취1,2시 thiolation 인 genotoxicity 입증 되었습니다, 비소 thiolation의 대사 경로 되어 집중적으로 공부 하는 생체 외에서 그리고 vivo에서3,4 도 환경 미디어 (예: 매 립 지 침 출 수)5,6. 모두 감소 하 고 생활에 DMAV 의 thiolated 아날로그 세포, 예를 들어, dimethylarsinous 산 (DMAIII), dimethylmonothioarsinic 산 (DMMTAV), 및 dimethyldithioarsinic 산 (이전 연구 발견 DMDTAV)7,,89, dimethylated thioarsenicals DMMTAV 무기 또는 유기 arsenicals10알려진 다른 것 보다 더 큰 독성을 전시 등으로. 매우 독성 thioarsenicals의 풍부한이 있다 심각한 환경 영향, 그들은 인간과 매우 sulfidic 조건11환경에 위험을 초래할 수 있기 때문. 그러나, DMMTAV DMDTAV (트랜스) 형성 및 환경 미디어에 그들의 운명을의 메커니즘은 여전히 추가 연구가 필요합니다. 따라서, thioarsenicals의 정량 분석 DMMTAV 및 DMDTAV의 환경에 미치는 영향의 이해를 개선 하기 위해 필요 합니다.
DMMTAV 및 DMDTAV 의 기준은 다른 종으로 종 변환의 높은 위험 때문에 이전 연구를 복제 하 여 얻기 어려운 표준 화학 물질은 정량 분석에 대 한 주요 요구 사항, 그리고 unstandardized 합성 절차12. 또한, 참조 하는 방법 제한이 표준 화학 물질 합성 및 정량 분석에 실질적인 어려움을 이어질 수 있습니다. DMMTAV 및 DMDTAV 는 일반적으로 특정 어 금 니 비율1 또는 버블링 H2S4 의 DMAV 13,14의솔루션을 통해 가스 그래서 DMAV, 나2S, 그리고 H2를 혼합 하 여 준비 됩니다. 버블링 메서드 기능 대체 황 H2S 가스는 매우 독성 하 고 미숙한 사용자에 대 한 제어 하기 어려운의 직접적인 공급을 사용 하 여 산소의. 반대로, 위의 혼합 방법1, DMMTAV 및 환경 sudies5,DMDTAV 6,12, 질적 분석을 위해 널리 이용 되는 thiolation의 특징 DMAV H2S4 와 DMMTAV 및 DMDTAV,으로 대상 화학 물질을 생산 하는 화학 량 론 제어 쉽게 수 있도록 생산 하 고 직접에 비해 너무 나2S와 H2를 혼합 하 여 생성 된 사용 하 여 H2S 가스의.
일부 발생할 수 있습니다 그들의 중요 한 실험 단계에서이 연구 전시 한계에 언급 된 방법 절차1,3,4,,815 혼합 참조 실험적 오류입니다. 예를 들어 특정 용 매 (즉, 이온을 제거 된 물) 준비 및 추출의 세부 사항 및 합성된 arsenicals의 결정 화-약식 또는 충분 한 세부 사항에 설명 되지 않은. 이러한 분산 및 절차 단계에 대 한 제한 된 정보 thioarsenicals 및 신뢰할 수 없는 정량화 분석의 일관성 형성으로 이어질 수 있습니다. 따라서, 본 개발 수정된 프로토콜 DMMTAV 및 DMDTAV 재고 솔루션 양적 종 분리 분석의 종합을 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>Cacodylic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20835-10G-F</td><td></td></tr><tr><td>Sodium sulfide nonahydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2006-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sulfuric acid 96%</td><td>J.T.Baker</td><td>0000011478</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium acetate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7262-500G</td><td></td></tr><tr><td>Formic acid 98%</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd.</td><td>066-00461</td><td></td></tr><tr><td>Diethyl ether (Extra Pure)</td><td>Junsei Chemical</td><td>33475-0380</td><td></td></tr><tr><td>Adapter cap for 60 mL Bond Elut catridges</td><td>Agilent Technologies</td><td>12131004</td><td>Syringe type of SPE</td></tr><tr><td>Bond Elut C18 cartridge</td><td>Agilent Technologies</td><td>14256031</td><td>Syringe type of SPE</td></tr><tr><td>HyPURITY C-18</td><td>Thermo Scientific</td><td>22105-254630</td><td>5 um, 125 x 4.6 mm</td></tr><tr><td>Glovebox</td><td>Chungae-chun, Rep. of Korea</td><td></td><td>Customized&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC</td><td>Agilent Technologies</td><td>DEAB600252, DEACH00245</td><td></td></tr><tr><td>Agilent Technologies 7700 Series ICP-MS</td><td>Agilent Technologies</td><td>JP12031510</td><td></td></tr><tr><td>Finnigan LCQ Deca XP MAX Mass Spectrometer System</td><td>Thermo Electron Corporation</td><td>LDM10627</td><td></td></tr></tbody></table>

preparation of dmmtav and dmdtav using dmav for environmental applications: synthesis, purification, and confirmation

Dimethylmonothioarsinic 산 (DMMTAV) 등 Dimethylated thioarsenicals 및 dimethyldithioarsinic 산 (VDMDTA), dimethylarsinic 산 (DMAV) thiolation의 대사 경로 의해 생산, 최근 되었습니다. 환경 뿐만 아니라 인간 장기에서 발견. DMMTAV 및 DMDTAV dimethylated thioarsenicals 및 환경 미디어에서 그들의 안정성의 생태 효과 결정 하기 위해 측정할 수 있습니다. 이 화합물에 대 한 합성 방법은 표준화 된, 이전의 연구 도전 복제 만들기입니다. 또한, 스토리지 기술, 종 변환 없이 화합물의 스토리지를 포함 하 여에 대 한 정보의 부족이 이다. 또한, 합성 방법에 대 한 제한 된 정보만 사용할 수 있기 때문에, 표준 화학 물질 합성 및 정량 분석 실험 어려움이 있을 수 있습니다. 여기에 소개 하는 프로토콜 dimethylated thioarsenicals, DMMTAV 및 DMDTAV, 실질적으로 수정 된 합성 방법을 제공 하 고 고성능 액체를 사용 하 여 종 분리 분석의 정량화에 도움이 될 것입니다. 유도 결합된 플라즈마 질량 분석 (HPLC-ICP-MS)와 함께에서 착 색 인쇄기. 이 절차의 실험 단계 화학 시 약, 여과 방법, 및 스토리지의 준비에 집중 하 여 수정 되었습니다.

DMMTAV 실수로 DMAIII 합성 방법19준비 되었습니다, 합성된 DMMTAV 및 DMDTAV 의 확인 이므로 합성 및 추출 및 이상적인 표준 결정에 대 한 중요 한 단계 화학 재료입니다. 합성된 화학 물질 피크의 DMMTAV (MW 154 g·mol-1) 및 DMDTAV (MW 170 g·mol-1) 질량 대 전 비 (m/z) 분무 이온화 질량의 포지티브 또?...

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Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

DMMTAV 및 환경 응용 프로그램에 대 한 DMAV 를 사용 하 여 DMDTAV 의 준비: 합성, 정화, 및 확인

이 문서에서는 dimethylmonothioarsinic 산 (DMMTAV)에 대 한 수정된 실험 프로토콜 제공 및 dimethyldithioarsinic 산 (DMDTAV) 합성을 유도 하는 DMAV의 혼합을 통해 dimethylarsinic 산 (DMAV) thiolation , 나2S, 그리고 H2이렇게4. 수정된 프로토콜 합성 단계 정량 분석에서 실험 오류 발생 수의 한계를 극복 함으로써 실험 지침을 제공 합니다.

Dimethylated thioarsenicals such as dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV), which are produced by the metabolic ...

preparation-dmmtav-dmdtav-using-dmav-for-environmental-applications

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Research

JoVE Journal

Environment

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

5.5K 조회수.  Korea Basic Science Institute, Seoul Center. 이 문서에서는 dimethylmonothioarsinic 산 (DMMTAV)에 대 한 수정된 실험 프로토콜 제공 및 dimethyldithioarsinic 산 (DMDTAV) 합성을 유도 하는 DMAV의 혼합을 통해 dimethylarsinic 산 (DMAV) thiolation , 나2S, 그리고 H2이렇게4. 수정된 프로토콜 합성 단계 정량 분석에서 실험 오류 발생 수의 한계를 극복 함으로써 실험 지침을 제...

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Unraveling the Unseen Players in the Ocean - A Field Guide to Water Chemistry and Marine Microbiology

Here we introduce a series of thoroughly tested and well standardized research protocols adapted for use in remote marine environments. The sampling protocols include the assessment of resources available to the microbial community (dissolved organic carbon, particulate organic matter, inorganic nutrients), and a comprehensive description of the viral and bacterial communities (via direct viral and microbial counts, enumeration of autofluorescent microbes, and construction of viral and microbial metagenomes). We use a combination of methods, which represent a dispersed field of scientific disciplines comprising already established protocols and some of the most recent techniques developed. Especially metagenomic sequencing techniques used for viral and bacterial community characterization, have been established only in recent years, and are thus still subjected to constant improvement. This has led to a variety of sampling and sample processing procedures currently in use. The set of methods presented here provides an up to date approach to collect and process environmental samples. Parameters addressed with these protocols yield the minimum on information essential to characterize and understand the underlying mechanisms of viral and microbial community dynamics. It gives easy to follow guidelines to conduct comprehensive surveys and discusses critical steps and potential caveats pertinent to each technique.

Here, we present a comprehensive protocol to assess the organic and inorganic nutrient availability and the abundance and structure of microbial and viral communities in remote marine environments.

물 화학 및 해양 미생물에 필드 가이드 - 바다에서 보이지 않는 선수를 해명

Here we introduce a series of thoroughly tested and well standardized research protocols adapted for use in remote marine environments. The sampling ...

연구

환경과학

In vitro tRNA Methylation Assay with the Entamoeba histolytica DNA and tRNA Methyltransferase Dnmt2 (Ehmeth) Enzyme

Protozoan parasites are among the most devastating infectious agents of humans responsible for a variety of diseases including amebiasis, which is one of the three most common causes of death from parasitic disease. The agent of amebiasis is the amoeba parasite Entamoeba histolytica that exists under two stages: the infective cyst found in food or water and the invasive trophozoite living in the intestine. The clinical manifestations of amebiasis range from being asymptomatic to colitis, dysentery or liver abscesses. E. histolytica is one of the rare unicellular parasite with 5-methylcytosine (5mC) in its genome. 1, 2 It contains a single DNA methyltransferase, Ehmeth, that belongs to the Dnmt2 family. 2 A role for Dnmt2 in the control of repetitive elements has been established in E. histolytica, 3 Dictyostelium discoideum 4,5 and Drosophila. 6 Our recent work has shown that Ehmeth methylates tRNAAsp, and this finding indicates that this enzyme has a dual DNA/tRNAAsp methyltransferase activity. 7 This observation is in agreement with the dual activity that has been reported for D. discoideum and D. melanogaster. 8 The functional significance of the DNA/tRNA specificity of Dnmt2 enzymes is still unknown. To address this question, a method to determine the tRNA methyltransferase activity of Dnmt2 proteins was established. In this video, we describe a straightforward approach to prepare an adequate tRNA substrate for Dnmt2 and a method to measure its tRNA methyltransferase activity.

In vitro tRNA Methylation Assay with the Entamoeba histolytica DNA and tRNA Methyltransferase Dnmt2 Ehmeth Enzyme

This protocol describes the preparation of a synthetic tRNA substrate for the Entamoeba histolytica DNA/tRNA methyltransferase 2 (Dnmt2) homolog Ehmeth and the measure of its methyltransferase activity. This experimental approach can be used for investigating the activity of other Dnmt2 proteins.

Entamoeba histolytica DNA와 tRNA Methyltransferase Dnmt2 (Ehmeth) 효소를 체외 tRNA의 Methylation 분석에서

Protozoan parasites are among the most devastating infectious agents of humans responsible for a variety of diseases including amebiasis, which is one of ...

면역학 및 감염병학

Biochemical Measurement of Neonatal Hypoxia

Neonatal hypoxia ischemia is characterized by inadequate blood perfusion of a tissue or a systemic lack of oxygen. This condition is thought to cause/exacerbate well documented neonatal disorders including neurological impairment 1-3. Decreased adenosine triphosphate production occurs due to a lack of oxidative phosphorylation. To compensate for this energy deprived state molecules containing high energy phosphate bonds are degraded 2. This leads to increased levels of adenosine which is subsequently degraded to inosine, hypoxanthine, xanthine, and finally to uric acid. The final two steps in this degradation process are performed by xanthine oxidoreductase. This enzyme exists in the form of xanthine dehydrogenase under normoxic conditions but is converted to xanthine oxidase (XO) under hypoxia-reperfusion circumstances 4, 5. Unlike xanthine dehydrogenase, XO generates hydrogen peroxide as a byproduct of purine degradation 4, 6. This hydrogen peroxide in combination with other reactive oxygen species (ROS) produced during hypoxia, oxidizes uric acid to form allantoin and reacts with lipid membranes to generate malondialdehyde (MDA) 7-9. Most mammals, humans exempted, possess the enzyme uricase, which converts uric acid to allantoin. In humans, however, allantoin can only be formed by ROS-mediated oxidation of uric acid. Because of this, allantoin is considered to be a marker of oxidative stress in humans, but not in the mammals that have uricase.
We describe methods employing high pressure liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography mass spectrometry (GCMS) to measure biochemical markers of neonatal hypoxia ischemia. Human blood is used for most tests. Animal blood may also be used while recognizing the potential for uricase-generated allantoin. Purine metabolites were linked to hypoxia as early as 1963 and the reliability of hypoxanthine, xanthine, and uric acid as biochemical indicators of neonatal hypoxia was validated by several investigators 10-13. The HPLC method used for the quantification of purine compounds is fast, reliable, and reproducible. The GC/MS method used for the quantification of allantoin, a relatively new marker of oxidative stress, was adapted from Gruber et al 7. This method avoids certain artifacts and requires low volumes of sample. Methods used for synthesis of MMDA were described elsewhere 14, 15. GC/MS based quantification of MDA was adapted from Paroni et al. and Cighetti et al. 16, 17. Xanthine oxidase activity was measured by HPLC by quantifying the conversion of pterin to isoxanthopterin 18. This approach proved to be sufficiently sensitive and reproducible.

A method is described to measure biochemical markers of neonatal hypoxia-ischemia. The approach utilizes high pressure liquid chromatography (HPLC) and Gas Chromatography Mass Spectrometry (GC/MS).

신생아 Hypoxia의 생화 학적 측정

Neonatal hypoxia ischemia is characterized by inadequate blood perfusion of a tissue or a systemic lack of oxygen. This condition is thought to ...

의학

Cost-effective Method for Microbial Source Tracking Using Specific Human and Animal Viruses

Microbial contamination of the environment represents a significant health risk. Classical bacterial fecal indicators have shown to have significant limitations, viruses are more resistant to many inactivation processes and standard fecal indicators do not inform on the source of contamination. The development of cost-effective methods for the concentration of viruses from water and molecular assays facilitates the applicability of viruses as indicators of fecal contamination and as microbial source tracking (MST) tools. Adenoviruses and polyomaviruses are DNA viruses infecting specific vertebrate species including humans and are persistently excreted in feces and/or urine in all geographical areas studied. In previous studies, we suggested the quantification of human adenoviruses (HAdV) and JC polyomaviruses (JCPyV) by quantitative PCR (qPCR) as an index of human fecal contamination. Recently, we have developed qPCR assays for the specific quantification of porcine adenoviruses (PAdV) and bovine polyomaviruses (BPyV) as animal fecal markers of contamination with sensitivities of 1-10 genome copies per test tube. In this study, we present the procedure to be followed to identify the source of contamination in water samples using these tools. As example of representative results, analysis of viruses in ground water presenting high levels of nitrates is shown.
Detection of viruses in low or moderately polluted waters requires the concentration of the viruses from at least several liters of water into a much smaller volume, a procedure that usually includes two concentration steps in series. This somewhat cumbersome procedure and the variability observed in viral recoveries significantly hamper the simultaneous processing of a large number of water samples.
In order to eliminate the bottleneck caused by the two-step procedures we have applied a one-step protocol developed in previous studies and applicable to a diversity of water matrices. The procedure includes: acidification of ten-liter water samples, flocculation by skimmed milk, gravity sedimentation of the flocculated materials, collection of the precipitate and centrifugation, resuspension of the precipitate in 10 ml phosphate buffer. The viral concentrate is used for the extraction of viral nucleic acids and the specific adenoviruses and polyomaviruses of interest are quantified by qPCR. High number of samples may be simultaneously analyzed using this low-cost concentration method.
The procedure has been applied to the analysis of bathing waters, seawater and river water and in this study, we present results analyzing groundwater samples. This high-throughput quantitative method is reliable, straightforward, and cost-effective.

The study describes a cost-effective method for the identification of the source of fecal/urine contamination or contamination by nitrates in water using qPCR for the specific quantification of human/porcine/bovine DNA viruses, adenoviruses and polyomaviruses, proposed as MST tools.

특정 인간과 동물 바이러스를 사용하여 미생물 소스 추적을위한 비용 효율적인 방법

Microbial contamination of the environment represents a significant health risk. Classical bacterial fecal indicators have shown to have significant ...

Isolation and Genome Analysis of Single Virions using 'Single Virus Genomics'

Whole genome amplification and sequencing of single microbial cells enables genomic characterization without the need of cultivation 1-3. Viruses, which are ubiquitous and the most numerous entities on our planet 4 and important in all environments 5, have yet to be revealed via similar approaches. Here we describe an approach for isolating and characterizing the genomes of single virions called 'Single Virus Genomics' (SVG). SVG utilizes flow cytometry to isolate individual viruses and whole genome amplification to obtain high molecular weight genomic DNA (gDNA) that can be used in subsequent sequencing reactions.

Single Virus Genomics (SVG) is a method to isolate and amplify the genomes of single virons. Viral suspensions of a mixed assemblage are sorted using flow cytometry onto a microscope slide with discrete wells containing agarose, thereby capturing the virion and reducing genome shearing during downstream processing. Whole genome amplification is achieved using multiple displacement amplification (MDA) resulting in genomic material that is suitable for sequencing.

&#39;단일 바이러스 게놈&#39;을 사용하여 단일 비리의 분리 및 유전체 분석

Whole genome amplification and sequencing of single microbial cells enables genomic characterization without the need of cultivation 1-3. Viruses, which ...

Development and Testing of Species-specific Quantitative PCR Assays for Environmental DNA Applications

New, non-invasive methods for detecting and monitoring species presence are being developed to aid in fisheries and wildlife conservation management. The use of environmental DNA (eDNA) samples for detecting macrobiota is one such group of methods that is rapidly becoming popular and being implemented in national management programs. Here we focus on the development of species-specific targeted assays for probe-based quantitative PCR (qPCR) applications. Using probe-based qPCR offers greater specificity than is possible with primers alone. Furthermore, the ability to quantify the amount of DNA in a sample can be useful in our understanding of the ecology of eDNA and the interpretation of eDNA detection patterns in the field. Careful consideration is needed in the development and testing of these assays to ensure the sensitivity and specificity of detecting the target species from an environmental sample. In this protocol we will delineate the steps needed to design and test probe-based assays for the detection of a target species; including creation of sequence databases, assay design, assay selection and optimization, testing assay performance, and field validation. Following these steps will help achieve an efficient, sensitive, and specific assay that can be used with confidence. We demonstrate this process with our assay designed for populations of the mucket (Actinonaias ligamentina), a freshwater mussel species found in the Clinch River, USA.

Environmental DNA assays require rigorous design, testing, optimization and validation before the collection of field data can begin. Here, we present a protocol to take users through each step of designing a species-specific, probe-based qPCR assay for the detection and quantification of a target species DNA from environmental samples.

환경 DNA 응용을 위한 종별 정량PCR 분석의 개발 및 시험

New, non-invasive methods for detecting and monitoring species presence are being developed to aid in fisheries and wildlife conservation management. The ...

Probing RNA Structure with Dimethyl Sulfate Mutational Profiling with Sequencing In Vitro and in Cells

The role of RNA structure in virtually any biological process has become increasingly evident, especially in the past decade. However, classical approaches to solving RNA structure, such as RNA crystallography or cryo-EM, have failed to keep up with the rapidly evolving field and the need for high-throughput solutions. Mutational profiling with sequencing using dimethyl sulfate (DMS) MaPseq is a sequencing-based approach to infer the RNA structure from a base&#39;s reactivity with DMS. DMS methylates the N1 nitrogen in adenosines and the N3 in cytosines at their Watson-Crick face when the base is unpaired. Reverse-transcribing the modified RNA with the thermostable group II intron reverse transcriptase (TGIRT-III) leads to the methylated bases being incorporated as mutations into the cDNA. When sequencing the resulting cDNA and mapping it back to a reference transcript, the relative mutation rates for each base are indicative of the base&#39;s &#34;status&#34; as paired or unpaired. Even though DMS reactivities have a high signal-to-noise ratio both in vitro and in cells, this method is sensitive to bias in the handling procedures. To reduce this bias, this paper provides a protocol for RNA treatment with DMS in cells and with in vitro transcribed RNA.

Probing RNA Structure with Dimethyl Sulfate Mutational Profiling with Sequencing In Vitro and in Cells

The protocol provides instruction for modifying RNA with dimethyl sulfate for mutational profiling experiments. It includes in vitro and in vivo probing with two alternative library preparation methods.

디메틸 설페이트를 사용한 RNA 구조 프로빙 시험관 내 및 세포에서 시퀀싱을 사용한 돌연변이 프로파일링

The role of RNA structure in virtually any biological process has become increasingly evident, especially in the past decade. However, classical ...

생화학

<meta charset="utf8"></head><body>디지털 액적 PCR을 사용한 바이러스 게놈 정량을 위한 표준화된 프로토콜

Quantification of Adeno-Associated Viral Genomes in Purified Vector Samples by Digital Droplet Polymerase Chain Reaction

Adeno-associated virus (AAV) is a non-pathogenic virus used as a delivery vehicle to transfer therapeutic genes into patients. Accurate quantification of AAV genome copy number in vector preparations is essential for bioprocess optimization and dosage calculation in both preclinical and clinical studies of AAV-based gene therapy products. Currently, a consensus protocol for AAV viral genome titration is lacking. Here, we present a digital droplet PCR (dd_PCR) protocol for the quantification of viral genomes in purified vector samples. Samples are treated with DNase I to eliminate unpackaged contaminant DNA. DNase-treated samples are then mixed with an appropriate primer-probe set (designed according to the target AAV genome) and PCR reagents, and then loaded into a droplet generator. The prepared droplets are transferred into a PCR plate, where PCR amplification is performed and analyzed. The viral genome titer is calculated based on the concentration (copies/&#181;L), accounting for sample dilutions. A successful measurement shows a clear separation of the positive and negative droplet clouds, has at least 10,000 accepted droplets, shows a value between 10 copies/&#181;L and 10,000 copies/&#181;L, and has a coefficient of variation (CV) between repeats lower than 20%. Reliable viral genome titration will aid in the development of safe and effective AAV-based gene therapy products.

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: 정확한 아데노 관련 바이러스 게놈 정량을 위한 디지털 액적 PCR 방법 최적화

Precise quantification of adeno-associated virus (AAV) vector genome copies is critical, but a standardized protocol has yet to be established. This protocol describes a validated method for preparing purified AAV samples and conducting digital droplet polymerase chain reaction (dd_PCR) to reliably quantify the viral genome titer.

Digital Droplet Polymerase Chain Reaction에 의한 정제된 벡터 샘플의 Adeno-Associated Viral Genomes 정량화

Adeno-associated virus (AAV) is a non-pathogenic virus used as a delivery vehicle to transfer therapeutic genes into patients. Accurate quantification of ...

DMMTA^V 및 환경 응용 프로그램에 대 한 DMA^V 를 사용 하 여 DMDTA^V 의 준비: 합성, 정화, 및 확인

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Entamoeba histolytica DNA와 tRNA Methyltransferase Dnmt2 (Ehmeth) 효소를 체외 tRNA의 Methylation 분석에서

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'단일 바이러스 게놈'을 사용하여 단일 비리의 분리 및 유전체 분석

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디메틸 설페이트를 사용한 RNA 구조 프로빙 시험관 내 및 세포에서 시퀀싱을 사용한 돌연변이 프로파일링

Digital Droplet Polymerase Chain Reaction에 의한 정제된 벡터 샘플의 Adeno-Associated Viral Genomes 정량화

Digital Droplet Polymerase Chain Reaction에 의한 정제된 벡터 샘플의 Adeno-Associated Viral Genomes 정량화

Digital Droplet Polymerase Chain Reaction에 의한 정제된 벡터 샘플의 Adeno-Associated Viral Genomes 정량화