This project was funded by the Government of Canada through Genome Canada and the Ontario Genomics Institute (OGI-046), and Ontario Research Fund&#8211;Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (to M.G. and V.G.). T.V.L. is a postdoctoral fellow of the Fund for Scientific Research Flanders (FWO).

거미 진드기 인구의 1. 유지 보수 참고 : 거미 진드기는 (파세 러스 불가리스)가 캘리포니아 붉은 강 낭 콩에서 사육된다. <ol><li> 이전에 감염 2 ~ 3 주에 씨앗에서 콩 식물을 성장. </li><li> 감염된 식물 인터는이 식물; 성인 진드기 빠르게 신선한 식물 재료에 정착합니다. </li><li> 신선한 식물로 대체, 7 ~ 10 일마다 이전 만연 된 콩 식물을 제거합니다. </li></ol> 2. 성인 여성 진드기를 수집 <ol><li> 세척 방법을 사용하여 컬렉션 진드기 <ol><li> 진드기를 수집하려면 1 ~ 2 일 전에 실험에 감염 식물과 접촉 신선한 콩 식물을 배치. </li><li> 1,000 ~ 2,000 성인 여성 진드기를 수집하기 위해 20 ~ 30 신선한 콩 식물을 사용합니다. </li><li> RT 수돗물을 사용하여 0.001 %에서 트윈 20 용액을 준비합니다. </li><li> 한 번에 2 ~ 3 식물을 사용하여, 트윈 20 용액에 오염 된 콩 식물을 씻으십시오. </li><li&gt; 각각의 식물은 잎의 모든 진드기를 수집하기 위해 2 - 3 배를 세척한다. </li><li> 단계를 완료 진드기 사망을 피하기 위해 10 분 이내 2.1.4. </li></ol></li><li> 정의 메쉬 크기의 체를 통해 진드기 현탁액의 여과 성인 여성 진드기의 분리 <ol><li> 다음 메쉬 크기의 체를 준비 : 500 μm의 (파편을 제거하기 위해) 및 300 μM (여성 성인 진드기를 수집하기 위해) (그림 1A). </li><li> 500 μm의 체를 통해 현탁액을 필터링합니다. </li><li> 300 μm의 체를 통해 서스펜션 대해 필터링. 성인 여성의 진드기가 유지됩니다. </li><li> 트윈 20을 제거하기 위해 깨끗한 수돗물의 성인 여성 진드기와 300 μm의 체를 찍어. </li><li> 체의 바닥에 단일 층으로 진드기를 전파. </li><li> 체의 메쉬 측면에서 과잉의 물을 제거하기 위해 종이 타월을 사용합니다. 참고 : 진드기 복구하기 위해 신속하게 건조해야하기 때문에이 작업이 완료됩니다. </li><li> 도 1에 도시 된 바와 같이 조립체를 준비B; 이 진드기가 자유롭게 이동 할 수 있지만이 빠져 나가는 것을 방지 할 수 있습니다. </li><li> 지원으로 사용되는 체의 상단에 진드기 체를 놓습니다. </li><li> 분산에서 진드기를 방지하기 위해 물과 바닥 체를 둘러싸고 있습니다. 참고 : 진드기 후 약 5 분을 복구하기 시작합니다. 약 30 분 후, 이동하는 진드기의 수는 컬렉션 (도 1D)을 시작하기에 충분하다. 가 컬렉션을 방해 실크를 생산으로 진드기, 1 시간 이내에 수집해야한다. </li></ol></li></ol> 진드기 3. 공장 침입 참고 : 성인 여성 진드기가 회복되면, 그들은 식물의 침입에 사용할 수 있습니다. ) 좋은 브러쉬 (프로토콜 3.1)를 사용하고 B) 펌프 또는 진공 라인 (프로토콜 3.2)를 사용하여 : 성인 여성 진드기 실험 식물을 만연하는 데 2​​ 가지 방법이 있습니다. <ol><li> 브러시를 사용하여 진드기 침입 참고 : 거미 진드기의 침입브러시는 공장 당 최대 30 진드기의 응용 프로그램에 사용됩니다에. <ol><li> 크기 00 또는 미세한의 부드러운 머리카락 라운드 아트 브러쉬를 사용합니다. </li><li> RT 수돗물과 브러쉬를 적시고. </li><li> 부드럽게 브러쉬를 사용하여 체에서 진드기를 들고 식물로 전송. </li></ol></li><li> 펌프를 사용하여 침입 진드기 주 : 30 개 이상의 진드기가 적용되면 펌프 / 진공 라인에 의해 수집 된 진드기와 공장 감염이 사용됩니다. 이 방법을 위해, 마이크로 전자 부품이 픽업 또는 진공 라인을위한 진공 펌프가 사용될 수있다. 그것은 공기 일정하고 충분한 강도 (2-4 PSI)을 유지하는 것이 중요합니다. <ol><li> 펌프 / 진공 튜브와 팁 사이의 어댑터로 바닥에 1.5 ㎖의 원심 분리기 튜브 컷을 사용하여 펌프 또는 진공 라인에 연결하는 튜브에 1 ㎖ 피펫 팁을 부착합니다. </li><li> 피펫 팁 및 어댑터 (1.5 ML의 원심 분리기 튜브) 사이에 종이 타월의 조각을 놓습니다. 참고 : 이것의 목적은 t 내부 트랩 진드기이다그는 흡입 과정에서 끝을 피펫 또한 공기 흐름 (그림 1C)을 줄일 수 있습니다. </li><li> 피펫 팁을 사용하여 체에서 직접 진드기를 수집합니다. </li><li> 또한, 입체경을 사용하여 오염 된 잎에서 진드기 하나 하나를 수집합니다. </li><li> 진드기의 필요한 번호를 수집 한 경우, 피펫 팁의 뒷면에 종이 타월의 조각이 방해받지되어 있는지 확인하고, 관에서 피펫 팁을 제거합니다. </li><li> 피펫 팁을 눌러과 함께 진드기를 응집하여 진드기를 수집합니다. 그런 다음 잎에 배치; 초 이내에, 진드기는 잎에 분산하기 시작합니다. </li></ol></li></ol> 4. 기록하고 평가하는 공장 피해 <ol><li> 녹화 식물의 손상 주 : A. 위해 장대, 식물 손상은 진드기의 먹이의 4 일 후 평가된다. 공격력이 백화 반점의 총 표면적으로서 기록된다. 피해 측정을 위해 전체 장미는 절단 및 스캔됩니다.설명한 스캐닝 파라미터 엡손 V30 스캐너이지만 유사한 평판 스캐너를위한 좋은 출발점으로 작동 할 것이다. 수 있도록 모든 실험에 대한 지속적인 검색 매개 변수를 유지 개별 실험을 실행 사이의 비교. <ol><li> 식물 재료와 스캐너 표면을 오염시키는 것을 방지하기 위해 투명 시트를 스캐너 침대 커버. </li><li> 그래서 잎의 향축 (위) 측이 스캐너의 광원 및 캡처 요소에 직면하고 스캐너 침대에 전체 장미와 장소를 잘라. 또한, 근엽 스캐너 침대에 배치하기 전에 각각의 나뭇잎이나 미세 가위와 겹치지 않는 잎의 그룹으로 장미를 해부, 중복없이 각각의 잎을 캡처 너무 조밀 한 경우. 여러 근엽을 동시에 스캔 할 수 있습니다. </li><li> 준수와 스캐너 덮개의 오염을 방지하기 위해 흰색 종이와 근엽 또는 잎을 커버. </li><li> 닫기 스캐너 덮개 다음과 같은 매개 변수를 사용하여 검사를 수행 : 해상도 : 1,200 dpi로; 컬러 모드 : 어도비 RGB; 밝기 : +25; 파일 형식 : 최대 품질 JPEG. </li><li> 이후 피해 분석을 위해 이미지 파일을 저장합니다. </li></ol></li><li> 식물 피해 정량화 NOTE : 손상의 면적 수동 포토샵을 사용하여 계산된다. 때문에 진드기의 먹이의 결과로 잎 모양과 증상의 색의 강도에 큰 차이로 자동 방법은 신뢰할 수 있었다. 따라서, 그리드 방법은 식물의 손상을 평가하기 위해 사용된다 : <ol><li> 포토샵과 식물의 이미지를 엽니 다. </li><li> (-보기 - 그리드, 단축키 Ctrl + &#39;보기 또는 표시) 새 레이어를 만든 다음 0.25 mm X 0.25 mm 부문의 격자로 스캔 한 이미지를 오버레이. </li><li> 오버레이 층에서 점 ( &quot;연필 도구&quot;, 키보드 단축키 B를 사용)를 사용하여 손상된 잎 영역을 표시합니다. 그리드 유닛의 반 이상을 덮고 손상이있는 아래의 그리드의 각 정사각형에 대한 하나의 점을 사용합니다. 도트의 크기 (픽셀 단위로 정의된다, 즉, </eM&gt; 도트 당 52 픽셀). </li><li> 레이어의 화소 수를 결정하기 위하여 - 그리드 유닛의 적어도 절반을 덮는 식물 손상이 그리드의 모든 사각형은 점으로 표시되는 경우, 히스토그램 도구 (히스토그램 윈도우)를 사용한다. 히스토그램 도구는 픽셀의 개수를 측정하는 일을 허용한다. 각 도트 픽셀의 일정한 알려진 번호로 표시되기 때문에, 히스토그램 도구, 연장에 의해, 도트의 총 수를 나타내는 총 픽셀 수를 측정 한 것이다 표시된 사각형의 총 수. </li><li> 수식을 이용하여 표시된 &quot;점&quot;의 수를 계산한다 : 점의 수 = 도트 당 픽셀의 픽셀 / 수의 총 수입니다. </li><li> 한 점은 그리드의 한 광장에 대응으로, 그리드의 1 평방의 면적으로 이미지에 표시된 점의 수를 곱하여 손상의 전체 면적을 계산합니다. </li></ol></li></ol>

<ol>
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The authors have nothing to disclose.

이 동영상은 분리하고 성인 여성 진드기 많은 수의 식물을 만연하는 데 사용되는 프로토콜을 보여줍니다. 우리는 A.를 사용하여이 프로토콜을 제시하지만 장대, 어떤 식물 거미 진드기의 상호 작용 시스템에 사용할 수 있습니다 및 현재 성공적으로 토마토와 포도 (비 티스 VINIFERA) 식물에도 적용되고있다. 수집 된 진드기 (그림 3) 비교 생리 학적 상태에 있음을 나?...

식물 해충의 상호 작용이 큰 과학 및 경제적 중요성의 주제입니다. 그것은 역사적으로 (예, 토마토 등) 모두 작물과 모델 식물, A.를 사용하여 조사 하였다 장대. 두 경우 모두, 초식 동물에 식물의 감수성은 초식 동물의 공격 또는 간접적으로 해충의 성능 평가를 통해 직접 식물의 표현형의 평가를 통해 하나를 측정 할 수있다. 식물 감수성의 직접적인 측정은 다양한 방법을 사용하여 해충 종의 개수에 대해 이전에 사용되었다. 예를 들어, 나비목 유충의 초식 동물은 격자 (12)의 도움으로 육안으로 배추 xylostella (나방) 또는 Trichoplusia NI (양배추 자벌레) 중 하나에 의해 소비 식물 조직의 일부의 추정으로 측정된다. 또한, 이후의 정량 이미지 분석과 잎 손상의 디지털 이미징을 활용 방법이 있습니다. 이러한 방법이 사용되었다A. 연구 Frankliniella occidentalis (서양 꽃 총채 벌레) 13 Scaptomyza의 Flava의 (잎 마이닝 초파리) (14), 및 T.와 장대의 상호 작용 NI 15. 식물 감수성의 간접 측정 널리 식물 해충의 상호 작용의 연구에 사용된다. A. 예를 들어, 민감도 초식 동물 persicae 진딧물 Myzus을 복숭아하는 장대는 일반적으로 해충의 번식력과의 상호 작용 (16, 17) 후 식물의 심한 형태의 설명의 분석을 통해 평가된다. A.의 또 다른 전형적인 간접 표시 해충에 장대 감수성은 초식 동물의 건조하거나 습 중량 평가입니다. 이 매개 변수는 일반적으로 같은 Pieris rapae (작은 흰색), P.로 lepidoterans의 초식 동물을 특성화하는 데 사용됩니다 xylostella, 또는 T. 자신의 유충이나 번데기에서 NI는 15, 17 스테이지. 거미 진드기는 셀 내용 FE 있습니다eders. 진드기에 의한 손상은 녹색 엷은 흰색의 색상 범위 백화 관광 명소의 컬렉션으로 인식되고 있습니다. 거미 진드기 초식 동물에 식물 호스트의 취약성은 이전에 거미 진드기 성능 일의 분석을 통해 하나를 간접적으로 평가 된 후 감염 18, 19, 또는 직접 식물 주 후 감염 (18)의 심한 형태를 사용하거나 노출 된 잎의 디지털 이미징을 사용하여 이후 자동 이미지 분석 (19) 일 동안 진드기. 이러한 방법은 개발 및 토마토 식물과 T. 사이의 상호 작용의 연구에 사용 된 응애, 전형적 혼합 진드기 모집단으로부터 수거하고 부드러운 강모 솔을 사용하여 잎 표면에 넣었다 거미 응애의 수가 적은 경우 (처리 당 5-15)을 사용 하였다. 그러나, 이들 방법은 더 많은 수의 진드기가 적용될 필요 연구에는 적합하지 않다. 또, 잎 동안 이미지를 직접 처리 이미지 분석 소프트웨어어도비 포토샵 (산호세, CA) 또는 ImageJ에 20 토마토 손상의 분석에 이용 될 수있는 바와 같이, 이들 프로토콜은 표면의 큰 반사율이 있거나 가볍게 착색되어 시인성 상체 (trichome)를 (이 잎에 적용하기 위해 수정이 필요 식물의 손상을 표시 백화 반점의 자동 선택을 방해 예를 들면, A. 장대). 또한, 쉽게 이전의 방법으로 이용 될 수있는 거미 진드기의 발달 단계는 가장 널리 쉽게 식별 성인 여성에 한정하고 다른 발달 단계의 사용을 배제하고 있습니다. 식물 거미 진드기의 상호 작용의 높은 처리량 분석하는 첫 번째 중요한 단계는 거미 진드기와 식물에 도전하고 안정적​​으로 상호 작용의 결과를 평가하기 위해 재생 가능한 간단하고 강력한 프로토콜을 설정하는 것입니다. 이 비디오, 큰 숫자를 빠르고 쉽게 수집을위한 효율적인 방법은BER 성인 여성 진드기, 실험 공장 호스트 인해 거미 진드기의 먹이 식물 손상의 평가에 자신의 응용 프로그램이 설명되어 있습니다. 제시된 프로토콜은 후속 실험 응용 프로그램에 사용될 수있는 모든 발달 단계 (알, 유충, 약충, 성인 남성 및 여성)에 개인의 수백 빠르고 효율적으로 수집 할 수 있습니다. 또한, 이러한 프로토콜은 진드기 숙주 식물에 적용 할 수 있지만, 구체적 A.의 경우 입증된다 장대.

<table><tbody><tr><td>Plant material:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>California red kidney bean</td><td>Stokes, Thorold, ON, Canada</td><td></td><td>2 week old, well infested with spider mites 2 or 3 days before use. Other cultivars of &lt;em&gt;Phaseolus vulgaris&lt;/em&gt; can be used.</td></tr><tr><td>Chemicals:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td>1% stock solution is prepared to simplify aliquoting</td></tr><tr><td>Tap water</td><td></td><td></td><td>At room temperature, heat- and cold-shock affect mite survival rate and performance</td></tr><tr><td>Other materials and equipment:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic tray</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Set of scissors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 L beakers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paper towels</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sets of sieves</td><td>Manufactured in house</td><td></td><td>Detailed instructions are available</td></tr><tr><td>Thin brush</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette tips</td><td></td><td></td><td>0.2 and 1 ml</td></tr><tr><td>1.5 ml centrifuge tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Air pump</td><td></td><td></td><td>Aquarium type pump with inverted air flow. Vacuum line can be used. Required pressure drop is approx. 2-4 psi</td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scanner</td><td>Epson</td><td>V30</td><td>Any flatbed scanner allowing necessary degree of control over scan quality. We use Epson V30 for our experiments.</td></tr><tr><td>Computer</td><td></td><td></td><td>Windows or OS X PC which is compatible with scanner hardware and Adobe Photoshop software.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop software</td><td>Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA</td><td>various</td><td>Any version with Histogram tool included.</td></tr></tbody></table>

application of two-spotted spider mite tetranychus urticae for plant-pest interaction studies

두 점박이 응애, 점박이 응애는 경제적 가치의 150 개 이상의와 종의 매우 광범위한, 피드 유비쿼터스 광식 절지 동물 초식 동물입니다. 그것은, 특히 가지과와 박과 같은 옥수수, 면화와 같은 (예를 들면, 토마토, 가지, 고추, 오이, 호박) 및 온실 장식물 (예를 들면, 장미, 국화, 카네이션), 연간 필드 작물 (에, 온실 작물의 주요 해충이다 대두, 사탕무), 및 다년생 문화 (알팔파, 딸기, 포도, 감귤,, 자두), 2에서. 그것은 중요한 농업 해충, T. 만드는 극단적 인 polyphagy에 추가 응애는 제어 3-7에 사용되는 살충제 및 살비제의 다양한 저항을 개발하는 경향이있다. T. 응애는 (27 ° C에서 7 일 간) 빠른 수명주기를 가지고, 훌륭한 실험 유기체쉽게 실험실에서 고밀도로 유지 될 수있다. (현장 하이브리드 항체 염색법에 포함) 유전자 발현을 분석 실험하고 RNA 간섭을 이용하여 거미 진드기 내인성 유전자의 발현을 불 활성화하는 방법은 8-10 개발되었다. 최근, T.의 전체 게놈 서열 응애는 이미 기주 식물 (애기 장대와 토마토 까 lycopersicum) (11)의 일부에 존재하는 상응하는 게놈 자원 모델 생물로이 해충 초식 동물을 개발할 수있는 기회를 만들어보고되고있다. 함께,이 모델 생물은 식물 해충의 상호 작용의 분자 기초에 대한 통찰력을 제공 할 수있다. 여기에 빠르고 쉽게 성인 여성 진드기의 큰 숫자의 컬렉션, 실험 공장 호스트에서 자신의 응용 프로그램 및 때문에 거미 진드기의 먹이 식물 손상의 평가를위한 효율적인 방법이 설명되어 있습니다. EN 제시 프로토콜이후 실험적인 응용 프로그램에 사용할 수있는 모든 발달 단계 (계란, 애벌레, 애벌레, 성인 남성 및 여성)에 개인의 수백의 신속하고 효율적인 수집을 에이블 스.

20 ~ 30 오염 된 콩 식물을 사용하여, 하나는 체를 사용하여 약 2,000 성인 여성 진드기를 수집 할 수 있습니다. 진드기를 전송하는 브러시를 사용하면 식물 당 20 진드기 10 식물 만연하는 데 필요한 시간은 약 15 분이다. 컬렉션 및 응용 방법의 조합은도 2에 나타낸다. 이 프로토콜은 수집 된 진드기 비슷한 생리 학적 상태와 식물 거미 진드기의 상호 작용 연구에 적합...

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Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

거미 진드기, 실험 식물의 침입, 그리고 식물의 손상 평가의 균일 한 시료의 효율적인 준비를위한 프로토콜, 식물 해충의 상호 작용의 연구에 필요한이 개발되었다.

두 발견 거미 진드기의 적용<em&gt; 점박이 응애</em&gt; 식물 해충의 상호 작용 연구

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

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Research

JoVE Journal

Environment

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

17.6K 조회수.  The University of Western Ontario.  거미 진드기, 실험 식물의 침입, 그리고 식물의 손상 평가의 균일 한 시료의 효율적인 준비를위한 프로토콜, 식물 해충의 상호 작용의 연구에 필요한이 개발되었다. 

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Remote Sensing Evaluation of Two-spotted Spider Mite Damage on Greenhouse Cotton

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the two-spotted spider mite (TSSM), Tetranychus urticae Koch, on greenhouse grown cotton. TSSM is a polyphagous pest which occurs on a variety of field and horticultural crops. It often becomes an early season pest of cotton in damaging proportions as opposed to being a late season innocuous pest in the mid-southern United States. Evaluation of acaricides is important for maintaining the efficacy of and preventing resistance to the currently available arsenal of chemicals and newly developed control agents. Enumeration of spider mites for efficacy evaluations is laborious and time consuming. Therefore, subjective visual damage rating is commonly used to assess density of spider mites. The NDVI (Normalized Difference Vegetation Index) is the most widely used statistic to describe the spectral reflectance characteristics of vegetation canopy to assess plant stress and health consequent to spider mite infestations. Results demonstrated that a multispectral optical sensor is an effective tool in distinguishing varying levels of infestation caused by T. urticae on early season cotton. This remote sensing technique may be used in lieu of a visual rating to evaluate insecticide treatments.

This manuscript describes a multispectral optical sensor that effectively detected damage to early season cotton artificially infested with varying densities of the two-spotted spider mite populations.

온실면에 두 점박이 진드기 피해의 원격 탐사 평가

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the ...

연구

환경과학

Development of Metarhizium anisopliae as a Mycoinsecticide: From Isolation to Field Performance

A major concern when developing commercial mycoinsecticides is the kill speed compared to that of chemical insecticides. Therefore, isolation and screening for the selection of a fast-acting, highly virulent entomopathogenic fungus are important steps. Entomopathogenic fungi, such as Metarhizium, Beauveria, and Nomurea, which act by contact, are better suited than Bacillus thuringiensis or nucleopolyhedrosis virus (NPV), which must be ingested by the insect pest. In the present work, we isolated 68 Metarhizium strains from infected insects using a soil dilution and bait method. The isolates were identified by the amplification and sequencing of the ITS1-5.8S-ITS2 and 26S rDNA region. The most virulent strain of Metarhizium anisopliae was selected based on the median lethal concentration (LC50) and time (LT50) obtained in insect bioassays against III-instar larvae of Helicoverpa armigera. The mass production of spores by the selected strain was carried out with solid-state fermentation (SSF) using rice as a substrate for 14 days. Spores were extracted from the sporulated biomass using 0.1% tween-80, and different formulations of the spores were prepared. Field trials of the formulations for the control of an H. armigera infestation in pigeon peas were carried out by randomized block design. The infestation control levels obtained with oil and aqueous formulations (78.0% and 70.9%, respectively) were better than the 63.4% obtained with chemical pesticide.

Development of Metarhizium anisopliae as a Mycoinsecticide: From Isolation to Field Performance

Here, we report the different stages involved in the knowledge-based development of an effective mycoinsecticide, including the isolation, identification, screening, and selection of the "best-fit" entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae, for the control of insect pests in agriculture.

개발<em&gt; 메타 리지 움 anisopliae</em&gt; Mycoinsecticide로서의 : 분리에서 현장 성능까지

A major concern when developing commercial mycoinsecticides is the kill speed compared to that of chemical insecticides. Therefore, isolation and ...

Detached Leaf Assays to Simplify Gene Expression Studies in Potato During Infestation by Chewing Insect Manduca sexta

The multitrophic nature of gene expression studies of insect herbivory demands large numbers of biological replicates, creating the need for simpler, more streamlined herbivory protocols. Perturbations of chewing insects are usually studied in whole plant systems. While this whole organism strategy is popular, it is not necessary if similar observations can be replicated in a single detached leaf. The assumption is that basic elements required for signal transduction are present within the leaf itself. In the case of early events in signal transduction, cells need only to receive the signal from the perturbation and transmit that signal to neighboring cells which are assayed for gene expression.
The proposed method simply changes the timing of the detachment. In whole plant experiments, larvae are confined to a single leaf which is eventually detached from the plant and assayed for gene expression. If the order of excision is reversed, from last in whole plant studies, to first in the detached study, the feeding experiment is simplified.
Solanum tuberosum var. Kennebec is propagated by nodal transfer in a simple tissue culture medium and transferred to soil for further growth if desired. Leaves are excised from the parent plant and relocated to Petri dishes where the feeding assay is conducted with the larval stages of M. sexta. Damaged leaf tissue is assayed for the expression of relatively early events in signal transduction. Gene expression analysis identified infestation-specific Cys2-His2 (C2H2) transcription factors, confirming the success of using detached leaves in early response studies. The method is easier to perform than whole plant infestations and uses less space.

The presented method creates natural herbivore damaged plant tissue through the application of Manduca sexta larvae to detached leaves of potato. The plant tissue is assayed for expression of six transcription factor homologs involved in early responses to insect herbivory.

분리 된 잎 어설아는 곤충 만두카 sexta를 츄잉에 의해 감염 하는 동안 감자에 유전자 발현 연구를 단순화 하기 위해

The multitrophic nature of gene expression studies of insect herbivory demands large numbers of biological replicates, creating the need for simpler, more ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form loose callus on Murashige and Skoog (MS) basal media with the plant hormones 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D, 1.0 mg L-1) and kinetin (KT, 0.1 mg L-1). Callus formed after 3 or 4 rounds of subculturing, each lasting 28 days. Loose callus (about 3 g) was then inoculated into B5 liquid media containing the same plant hormones and was cultured in a shaking incubator (120 rpm) in the dark at 25 &#177; 1 &#176;C. After 3&#8722;4 subcultures, a cell suspension derived from tea leaf was established at a subculture ratio ranging between 1:1 and 1:2 (suspension mother liquid: fresh medium). Using this platform, six insecticides (5 &#181;g mL-1 each thiamethoxam, imidacloprid, acetamiprid, imidaclothiz, dimethoate, and omethoate) were added into the tea leaf-derived cell suspension culture. The metabolism of the insecticides was tracked using liquid chromatography and gas chromatography. To validate the usefulness of the tea cell suspension culture, the metabolites of thiamethoxan and dimethoate present in treated cell cultures and intact plants were compared using mass spectrometry. In treated tea cell cultures, seven metabolites of thiamethoxan and two metabolites of dimethoate were found, while in treated intact plants, only two metabolites of thiamethoxam and one of dimethoate were found. The use of a cell suspension simplified the metabolic analysis compared to the use of intact tea plants, especially for a difficult matrix such as tea.

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

This work presents a protocol for establishing a cell suspension culture derived from tea (Camellia sinensis L.) leaves that can be used to study the metabolism of external compounds that can be taken up by the whole plant, such as insecticides.

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

생화학

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides in attempts to control its populations eliminates natural enemies and competitor flower thrips species, thereby increasing its populations. An unsustainable situation develops with concomitant resistant pest populations, secondary pest outbreaks, and environmental degradation. Integrated pest management utilizes knowledge of pest and natural enemy relationships to implement tactics that are environmentally friendly and sustainable. Minute pirate bugs are the most important worldwide predators of thrips. They can suppress and ultimately control Frankliniella species flower thrips. Flower samples taken at least weekly are needed to understand predator-prey dynamics. Shown here is the sampling of the flowers of fruiting vegetables and companion plants to estimate the densities of individual thrips and minute pirate bug species. Representative data illustrates how the protocol is used to determine the efficacy of management tactics over time and how to evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs. The sampling protocol is similarly adaptable to sampling thrips and minute pirate bugs in other plant species hosts.

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Presented here is a protocol to determine the number of thrips and minute pirate bug predators in crops over multiple dates in field experiments. Also illustrated is how to determine the efficacy of management tactics against thrips and evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs.

현장 실험에서 프랭클린니엘라 종 꽃 물방울과 오리우스 종 육식 동물을 추정하기위한 샘플링

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...

Leveraging Micro-CT Scanning to Analyze Parasitic Plant-Host Interactions

Micro-CT scanning has become an established tool in investigating plant structure and function. Its non-destructive nature, combined with the possibility of three-dimensional visualization and virtual sectioning, has allowed novel and increasingly detailed analysis of complex plant organs. Interactions among plants, including between parasitic plants and their hosts, can also be explored. However, sample preparation before scanning becomes crucial due to the interaction between these plants, which often differ in tissue organization and composition. Furthermore, the broad diversity of parasitic flowering plants, ranging from highly reduced vegetative bodies to trees, herbs, and shrubs, must be considered during the sampling, treatment, and preparation of parasite-host material. Here two different approaches are described for introducing contrast solutions into the parasite and/or host plants, focusing on analyzing the haustorium. This organ promotes connection and communication between the two plants. Following a simple approach, details of haustorium tissue organization can be explored three-dimensionally, as shown here for&#160;euphytoid, vine, and mistletoe parasitic species. Selecting specific contrasting agents and application approaches also allow detailed observation of endoparasite spread within the host body and detection of direct vessel-to-vessel connection between parasite and host, as shown here for an obligate root parasite. Thus, the protocol discussed here can be applied to the broad diversity of parasitic flowering plants to advance the understanding of their development, structure, and functioning.

Micro-CT is a non-destructive tool that can analyze plant structures in three dimensions. The present protocol describes the sample preparation to leverage micro-CT to analyze parasitic plant structure and function. Different species are used to highlight the advantages of this method when coupled with specific preparations.

Micro-CT 스캐닝을 활용하여 기생 식물-숙주 상호작용 분석

Micro-CT scanning has become an established tool in investigating plant structure and function. Its non-destructive nature, combined with the possibility ...

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

모니터링 살충제 저항 Bioassays

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

생물학

Trichogramma dendrolimi 및 Venom Extraction에 의한 인공 숙주 기생

Extracting Venom from the Parasitoid Wasp Trichogramma dendrolimi Using an Artificial Host

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, parasitoid wasps inject venom into their hosts to suppress their hosts&#39; immunity, modulate hosts&#39; development, metabolism, and even behavior. With over 600,000 estimated species, the diversity of parasitoid wasps surpasses that of other venomous animals, such as snakes, cone snails, and spiders. Parasitoid wasp venom is an underexplored source of bioactive molecules with potential applications in pest control and medicine. However, collecting parasitoid venom is challenging due to the inability to use direct or electrical stimulation and the difficulty in dissection because of their small size. Trichogramma is a genus of tiny (~0.5 mm) egg parasitoid wasps that are widely used for the biological control of lepidopteran pests in both agriculture and forests. Here, we report a method for extracting venom from T. dendrolimi using artificial hosts. These artificial hosts are created with polyethylene film and amino acid solutions and then inoculated with Trichogramma wasps for parasitism. The venom was subsequently collected and concentrated. This method enables the extraction of large amounts of Trichogramma venom while avoiding contamination from other tissues caused by dissection, a common issue in venom reservoir dissection protocols. This innovative approach facilitates the study of Trichogramma venom, paving the way for new research and potential applications.

저자 스포트라이트: Trichogramma Parasitoid Wasps의 효율적인 독 추출 방법 

Here, we present a protocol for extracting venom from Trichogramma dendrolimi using an artificial host created with polyethylene film and amino acid solution.

인공 숙주를 사용하여 기생 말벌 Trichogramma dendrolimi 에서 독 추출

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, ...

두 발견 거미 진드기의 적용

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온실면에 두 점박이 진드기 피해의 원격 탐사 평가

개발

분리 된 잎 어설아는 곤충 만두카 sexta를 츄잉에 의해 감염 하는 동안 감자에 유전자 발현 연구를 단순화 하기 위해

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎

현장 실험에서 프랭클린니엘라 종 꽃 물방울과 오리우스 종 육식 동물을 추정하기위한 샘플링

Micro-CT 스캐닝을 활용하여 기생 식물-숙주 상호작용 분석

모니터링 살충제 저항 Bioassays

인공 숙주를 사용하여 기생 말벌 Trichogramma dendrolimi 에서 독 추출

인공 숙주를 사용하여 기생 말벌 Trichogramma dendrolimi 에서 독 추출

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