角膜上皮掻爬術と角膜縫合糸の併用に基づくラットにおける重篤な角膜炎症モデルの確立

ナンバースター細胞欠損症の再生可能なモデルを確立することを歓迎し、角膜上皮の掻き取りと角膜縫合を組み合わせた重度の情報によって引き起こされるナンバースター細胞欠損症のモデルを確立することに成功しました。赤い角膜の厚さは人間の目の3分の1に過ぎないため、角膜表面を縫合すると穿孔が起こりやすく、手術技術に対する要求が高くなります。このモデルは、辺縁系上皮幹細胞を直接損傷することなく角膜炎症を誘発し、それによって角膜炎症が辺縁系上皮幹細胞に及ぼす影響とメカニズムの研究を促進します。

これは、重篤な炎症が辺行幹細胞の生物学的メカニズムに与える影響を観察するのに役立ちます。まず、滅菌された角膜錆リングリムーバー、皮膚サンプリングマーカー、ニードルホルダー、プレートレイヤーナイフ、眼科用手術用ハサミ、鉗子などの手術器具を作業プラットフォームに並べ、7〜8週齢の雌のスプレイグドリーラットを選択し、スリットランプの下に眼表面病変がないことを確認します。麻酔をかけた後、ラットはイオタフォーを使用して目の周りの皮膚と髪を消毒します。

炎症モデルを確立するには、ラットを外側褥瘡の位置に配置します。眼球を手術用顕微鏡で露出させます。次に、中央の瞳孔の周りに2ミリメートルの皮膚サンプリングマーカーを配置します。

角膜樹の細い角膜上皮スクレーパーと角膜上皮スクレーパーを使用して、内側の角膜上皮を掻き取ります。10.0ナイロンワイヤー、ニードルホルダー、眼科用手術用ハサミ、鉗子を使用して、リンバスから約3mmのところに120度の角膜縫合糸を3本入れます。縫合後、感染を防ぐためにオフロキサシン点眼軟膏を塗布します。

術後、1日目、3日目、7日目にスリットランプ拡大10倍レンズの下で角膜を観察し、撮影します。毛様体鬱血のレベルをスコアリングします。混雑しない場合は 0 ポイント、混雑の場合は 1 ポイント、1 ミリメートル未満の場合は 1 ポイント、1 ミリメートルから 2 ミリメートルの充血の場合は 2 ポイント、2 ミリメートルを超える充血の場合は 3 ポイントを割り当てます。

次に、中央の角膜浮腫にスコアを付けます。浮腫がない場合にゼロポイントを割り当てます。虹彩の視認性がはっきりしている浮腫が1点、虹彩の視界がはっきりしない浮腫が2点、虹彩が不明瞭な浮腫が3点です。

同様に、傍中心性角膜浮腫を採点します。すべてのスコアを合計し、9で割ることにより、炎症指数を計算します。スリットランプを使用して、角膜新生血管を観察します。

スリットランプ画像処理ソフトウェアを使用して画像を解析および処理します。各観察時点での角膜血管新生の成長を記録し、角膜中央部への最長の角膜血管新生を最小限の湾曲で測定します。角膜血管新生の程度を等級付けします。

角膜上皮の治癒は、7日目までに不完全な治癒が見られるように、縫合による角膜中央上皮切除モデルで損なわれ、3日目までに角膜辺縁浮腫と血管新生が見られました。炎症が進行するにつれて、角膜新生血管と炎症指数は継続的に増加しました。