生細胞におけるCRAFと14-3-3タンパク質との相互作用を測定するための生物発光共鳴エネルギー移動(BRET)ベースのアッセイ

私たちの研究の主な焦点は、Ras-MAPKキナーゼ経路内の希少疾患関連変異の研究を通じて、Ras-MAPKキナーゼ経路の新たな脆弱性を明らかにすることです。私たちは最近、生細胞におけるRAFキナーゼの自己阻害活性を測定するための別のBRETベースのアッセイを開発しました。重要なことに、このアッセイは、BRAFシステインリッチドメインのまれな生殖細胞変異のグループを特徴付けるために不可欠であり、BRAF自己阻害を維持し、構成的BRAF生物学的活性を防止するためにこのドメインが決定的に重要であることを示しました。

このアッセイは、1433タンパク質とRAFキナーゼCRAFとの相互作用を測定し、これらの相互作用は、発生と疾患の両方でRAF機能を媒介する上で重要な役割を果たします。さらに、このアッセイは、RAFの自己阻害およびRAF-RAF相互作用を測定するための以前に確立されたアッセイと組み合わされ、生細胞におけるRAFキナーゼの調節メカニズムを解剖するためのツールキットの基礎を形成します。