マウスにおける右冠動脈の永久結紮による右心室心筋梗塞の生成と特徴付け

右心室は左心室よりも虚血に対してより耐性があります。右室梗塞発症時の病態生理学的メカニズムを解明できる右心室感染モデルを生成する技術を導入しました。我々は、血管原価計算によって右冠状動脈の位置を特定し、マウス右室梗塞モデルを首尾よく生成するために重要な結紮領域を定義した。

手順を実演するのは、私の研究室のポスタードクターであるLinhai Ruoです。マウスをパッドの上に置き、つま先離脱反応がないことによって麻酔の深さを確保する。縫合糸で切歯を固定し、粘着テープで四肢を固定する。

脱毛クリームで首から剣状体に髪を取り除きます。ピンセットで舌をわずかに引き出し、舌圧迫器で下顎骨を持ち上げて声門を露出させます。22ゲージカニューレを声門に挿入して気管内挿管を行う。

心電図電極をマウスの四肢に正しく接続し、ECGを記録します。胸を開くには、眼科用はさみで3番目の右肋骨に平行に、皮膚に長さ1センチメートルの切開を行います。第3の肋間腔を再度決定し、胸骨角度に応じて十分な空間を確保する。

第3肋間腔の上にあるはさみとマイクロ鉗子で大胸筋と小胸筋を分離して切断する。その後、肘鉗子で肋間筋を鈍く分離して手術野を露出させ、心膜を切開する。滅菌綿で右心房を持ち上げ、滅菌8-0で右冠状動脈を結紮するナイロン糸、3〜5ミリメートルのライゲーション範囲を有する。

右冠状動脈を結紮した後、STセグメント上昇を示すモニタリングECGリード3に留意する。綿と縫合糸の筋肉と皮膚を滅菌5-0ナイロン糸で取り除きます。次に、マウスを加熱パッドの上に置き、回復を促進します。

動物の固定および超音波操作のための超音波プラットフォーム上の仰臥位でマウスを置きます。その爪を電極にテープで固定し、超音波装置に取り付けられたシステムを介してECG記録を得る。脱毛クリームでマウスの胸から髪を取り除き、超音波ゲルを胸の皮膚に塗布する。

プラットフォームを水平位置に設定します。トランスデューサを左脚に平行に向け、左心室長軸画像を取得します。プローブを時計回りに90度回転させて、左心室のショートアクセスビューを取得します。

シネストアボタンを押して画像を保存します。プラットフォームの左上の最低点で傾けます。探触子を垂直に下に移動し、Bモード下では上腹部上とマウスのダイヤフラムの下の位置を維持します。

右心室、右心房、左心房、左心室が画面に表示されるまで、X軸とY軸を回転させてプラットフォームの位置をわずかに調整します。シネストアまたはフレームボタンを押して画像を保存します。Mモードを押します。

2本のX指示線が現れた後、三尖弁オリフィスに指示線を配置し、三尖弁年間平面の動きを得た。Mモードをもう一度押します。シネストアまたはフレームストアボタンを押して、データと画像を保存します。

プラットフォームの左側を最低点で傾けます。プローブを、右前腋窩線に沿って水平軸に対して 30 度の角度で配置します。プラットフォームのX軸とY軸を回転させて、右心室を表示します。

Mモードボタンを押し、中隔の過エコー点にあるインジケータラインを見つけて、右心室インターフェースのMモード画像を取得します。Mモードボタンをもう一度押します。シネストアボタンを押して画像を保存します。

気管挿管を行い、動物用人工呼吸器のパラメータを設定します。剣状突起の上の皮膚に1センチメートルの両側切開を行い、眼科用はさみで横隔膜と肋骨をトランスクトして心臓を露出させる。右心室自由壁を32ゲージの針で穿刺する。

針を外し、出血を止めるために綿で傷口を押します。カテーテルの先端を穿刺部位を通って右心室に挿入し、ゆっくりとカテーテルを前方に押し出す。先端の位置を調整して、モニターおよび記録システムに表示される典型的なRV圧力波形を取得します。

安定化の10分後、RV収縮期血圧、RVおよび拡張期血圧、ならびにRV最大右心室圧上昇減少率のデータを記録する。選択ボタンをクリックして、計算する心周期を選択します。次に、分析ボタンをクリックして、選択したサイクルの平均値を計算します。

動物をパッドの上に仰臥位に置き、人工換気のために挿管する。外科用はさみで胸を開き、心臓を露出させます。右心房の眼科用はさみで3ミリメートルのノッチを作り、注射器で心臓の頂点を通して5mLの正常な生理食塩水で心臓を灌流します。

大動脈クランプで大動脈からの血液をブロックします。1mg/mLニトログリセリン0.1mLをインジェクターで心臓頂点に通し、冠状動脈を拡張する。心臓の頂点を通る1mLのキャスト試薬で心臓を灌流し、2〜3時間待ちます。

50%水酸化ナトリウムで2〜3日間心臓を侵食する。そして、正常な生理食塩水ですすぎによって筋肉組織または結合組織を除去する。RCAライゲーション後、ECGのリード3にSTセグメント上昇が見られた。

2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド染色は、梗塞領域がRV遊離壁の45%を占めていることを示し、術後24時間。心エコー検査は、拡張期の終わりにRV内部寸法が、RV1において増加したことを示した。そして、それはシャムグループで2回以上でした。

RVフラクション短縮、RV駆出フラクション、および三尖塔環状平面収縮期エクスカーションは、RVIにおいて有意に小さかった。RVによるLV面積比が約50%増加したRV血行動態測定は、RVI群において、右室収縮期血圧、RV圧の最大および最小上昇率、RV収縮性が有意に小さいことを示した。右心室圧および拡張期圧ならびにRV弛緩指数の指数関数的時定数は、Sham群のものよりも有意に有意であった。

RV動脈瘤が梗塞領域に見えた。RVI群における心臓重量対体重比および心臓重量対脛骨長さ比はわずかに大きかった。マッソン染色は、RV遊離壁における有意な線維症を示した。

そしてまれに、RVI群の中隔に線維化が起こった。対照的に、少数の生存した心筋細胞は梗塞領域にあった。結紮領域を露出させ、挿入された針の深さと範囲を把握して、成功率と生存率を高めることが重要です。