低酸素/SU5416モデルを用いたマウスにおける肺高血圧の誘導と特徴づけ

このプロトコルは、肺高血圧症を誘発し、右心室の機能測定を行うために使用することができる。Sugen低酸素モデルは、実装が容易であり、誘導後2〜3週間以内に肺高血圧症の特徴の一部を再現することができます。このモデルを用いて、疾患の発症に関与する新しい経路を特定できる。

私たちは、新しいターゲットを特定し、その治療の可能性をテストすることができます。誘導手順を開始する前に、低酸素室の近くに窒素タンクを固定し、酸素コントローラを10%酸素の位置に設定します。次に、25ゲージ針を備えた1ミリリットルシリンジに作りたてのSU5416溶液をロードし、注入する最初の動物を手動で拘束する。

皮膚をつかんで背骨に平行なテントを形成し、マウスによる咬傷の可能性を避けるために、頭の後ろをつかむことを確認します。緩い皮膚の側面の上に皮下に針を挿入し、皮膚に平行に折り畳まれ、注射器の内容物の100マイクロリットルを提供します。10秒後、針を引き出し、動物をケージに戻します。

すべての動物が注射されたら、マウスを換気された低酸素室に入れます。低酸素暴露の場合、チャンバーに酸素レベルを測定し、3日ごとに20分以下の間、洗浄し、食べ物と水を加えるためにチャンバーを開けるための酸素センサーが装備されていることを確認してください。毎日動物にストレスの兆候がないか検査し、毎週3週間連続してSU5416注射を繰り返します。

圧力測定手順を開始する前に、Yチューブコネクタを準備し、手動モードで換気装置の機能を確認します。気圧を避けるために、吸気圧を1センチメートル未満の水に設定し、呼吸数を毎分110呼吸に設定します。20ゲージの血管内カテーテルを切断して気管内チューブを作成し、圧力量制御ユニットをオンにします。

データ取得ソフトウェアを開始し、37°Cの水浴でPBSの15ミリリットル遠心分離管に圧力体積カテーテルを置きます。次に、メーカーのプロトコルに従ってカテーテルを較正します。マウスを加熱パッドの上に置き、体温を監視するための直腸プローブを設置します。

次に、麻酔マウスのつまみつまみへの反応が無い場合を確認し、首と胸部を剃ります。外科用テープでマウスの手足を固定し、内側頸部皮膚に1センチメートルの切開を行います。綿の先端アプリケーターを使用して、耳下腺と顎下唾液腺をぶっきらぼうに分離して、気管の根底にある筋肉を露出させる。

慎重に気管を完全に露出するために筋肉をカットし、気管軟骨の間に小さな切開を作るためにはさみを使用しています。準備した気管内チューブを挿入し、血管内カテーテルの金属ガイドを取り外します。次に、カテーテルを人工呼吸器に接続し、手動で肺を静かに膨らませて気管管の位置を確認します。

テープでポジションを固定します。右心室圧測定の場合、シフォイドプロセスと上腹部に1センチメートルの皮膚切開を行い、中線からシフォイドに遠位し、両側を慎重に横方向に移動させ、胸と腹壁の上に皮膚を分離します。腹腔を開き、横隔膜を慎重に切り、鼓動する心臓または肺を傷つけないように注意する。

そして、綿の先端のアプリケーターを使用して、心膜を穏やかに取り除きます。マウスの近くに圧力カテーテルを持ってきて、右心室の非定型遠位部分に刺し傷を作るために針を装備した綿の先端のアプリケーターを使用する。慎重に圧力カテーテルで針を交換し、肺動脈に面した先端と右心室の方向に平行に圧力カテーテルを挿入します。

カテーテルの正しい位置を確認するために圧力波のトレースを見てください。圧力信号が安定したら、呼吸を一時停止し、少なくとも3つの測定値を得ます。すべての測定が記録されたら、慎重に水浴中のPBS充填遠心管にカテーテルを戻します。

ここで、観察期間の終わりに右心室圧の代表的な圧力曲線および定量的な分析が示されている。低酸素症とSU5416治療後の再モデリングされた肺動脈の組織学的分析は、ノルモキシ動物と比較して内側壁の厚さの増加を明らかにする。心筋細胞肥大を評価する小麦胚芽凝集剤染色は、低酸素とSU5416曝露が心筋細胞サイズおよび右心室肥大の著しい増加をもたらすことを示す。

また、フルトン指数の測定による右心室肥大の形態評価は、低酸素動物における右心室肥大の増加を確認する。これは研究の結果に悪影響を及ぼす可能性があるため、出血を避けるために機能測定を行うことが重要です。このプロトコルは、わずかな変更を伴うラットの肺高血圧症を誘発するためにも使用することができる。

特に、ラットにおける唯一のSugen注射は、肺高血圧を誘発するのに十分である。