La coltura 3D di organoidi da cripte intestinali murine e una singola cellula staminale per la ricerca sugli organoidi

La nostra ricerca si concentra sulla biologia delle cellule staminali, in particolare sulle cellule staminali intestinali, presenti sul fondo della cripta intestinale. L'obiettivo è rispondere a come l'omeostasi viene mantenuta dalla cellula staminale nell'intestino. Questa coltura di organi 3D derivata da cellule staminali intestinali fornisce un potente strumento per studiare la proliferazione, la differenziazione e il mantenimento delle cellule staminali.

La tecnologia degli organi aiuta la coltura delle cellule staminali intestinali per lungo tempo mantenendo il potenziale di auto-rinnovamento e differenziazione. L'organoide è stato ampiamente utilizzato per studi di ricerca di base e traslazionali sulla fragilità intestinale e sulla fragilità passata. La nostra sfida attuale è comprendere il sistema coronarico coinvolto nelle cellule epiteliali intestinali e nelle cellule staminali.

La comprensione dei processi biologici innescati dalla clonazione oggettiva è di fondamentale importanza. Uno dei nostri risultati significativi è che la segnalazione attraverso la clonazione mantiene l'omeostasi della crescita e della differenziazione epiteliale intestinale. Il nostro protocollo descrive un metodo per isolare costantemente le piccole cripte intestinali e la successiva coltura di organoidi 3D per migliorare il tasso di rilascio cripto.

Stabiliamo un metodo di isolamento meccanico che prevede uno scuotimento vigoroso, dopo il trattamento con EDTA. L'EDTA e la dissociazione meccanica possono essere combinati per migliorare i rendimenti criptici. Inoltre, una corretta abilità può ridurre al minimo la contaminazione da virus, aumentando il numero di cripte.

I nostri risultati suggeriscono che la segnalazione attraverso i recettori muscolari e dell'organismo sembra lavorare insieme per mantenere l'omeostasi della crescita e della differenziazione epiteliale intestinale. Questo ci spinge a ipotizzare che il sistema non neurocoronarico-arteritico abbia svolto un ruolo importante nella moderazione della nicchia delle cellule staminali intestinali.