In questo video viene fornito un protocollo per il prelievo continuo del sangue. La radioattività del sangue sarà misurata in parallelo a un PET/TC utilizzando uno shunt arteriovenoso extracorporeo. In questo modo, viene generata la funzione di input arterioso per la successiva quantificazione dei dati PET/CT e consente in seguito una precisa modellazione biocinetica.
I principali vantaggi di questo protocollo sono che è riproducibile, genera una perdita di sangue minima e facilita un'elevata precisione nella risoluzione temporale della funzione di input arterioso. È essenziale calibrare attraverso tutti i dispositivi di misurazione da utilizzare per la determinazione della concentrazione di attività del sangue. A dimostrare la procedura sarà Anne Moller, una tecnico del nostro laboratorio.
Dopo aver confermato una mancanza di risposta al dito del dito in un ratto digiunato di 12 ore, radere la gamba e l'inguine sul lato chirurgico dell'animale e pulire la pelle esposta con un disinfettante aggiuntivo. Applicare un unguento all'occhio dell'animale e posizionare una sonda rettale per il monitoraggio continuo e il mantenimento della temperatura corporea. Rastrettare gli arti del topo sulla superficie di lavoro e disinfettare il sito operativo con un disinfettante per mucose.
Fai un'incisione di circa 20 millimetri all'inguine e seziona gli strati fini della pelle per esporre la vena femorale, l'arteria e il nervo. Posizionare due filamenti fini sotto la vena femorale e l'arteria e ligare i vasi con i filamenti distali. Tenendo i vasi in tensione con un morsetto bulldog, utilizzare i filamenti di sutura prossimale per tese il vaso con i morsetti del bulldog senza nodo.
Blocca la vena con un morsetto aneurisma prossimale da due a tre millimetri distale dalla sutura con il morsetto bulldog e usa le forbici corneali per fare un'incisione che è 1/3 del diametro del vaso. L'incisione della nave è il passo più critico del nostro protocollo. Assicurarsi di utilizzare strumenti microchirurgici, come le forbici corneali, e assicurarsi di tagliare il vaso con cura con un angolo di 45 gradi.
Utilizzare un batuffolo di cotone sterile per rimuovere il sangue che perde e dilatare la vena con una forza opaca. Tenendo aperto il recipiente, inserire il catetere affilato nella vena nella direzione prossimale, fino alla clip dell'aneurisma. Apri la clip dell'aneurisma e spingi il catetere da altri due a tre centimetri.
Se il catetere è stato posizionato correttamente, il sangue fluirà nel catetere. Fissare il catetere con i due nodi prossimali. Utilizzare una siringa per insulina per sciacquare e aspirare 100 microlitri di soluzione salina eparinata attraverso il catetere per verificare la funzionalità del catetere.
Quindi posizionare un catetere nell'arteria, come appena dimostrato per la vena, e chiudere la gamba con suture. A dimostrare la procedura sarà Joanna Forster, una tecnico del nostro laboratorio. Per l'acquisizione di immagini, posizionare l'animale in una posizione soggetta a teste sul pallet del letto navetta e spostare il letto navetta nella posizione estesa del letto per l'iniezione.
Collegare i cateteri al sistema shunt e avviare la pompa peristaltica con una portata di 1,52 millilitri al minuto per riempire il sistema di shunt con il sangue dell'animale. Spostare il letto navetta al centro del campo visivo della tomografia ad emissione di positroni, o PET, anello di rilevamento e avviare il sistema di campionamento del sangue online. Quindi avviare il flusso di lavoro PET/tomografia computerizzata, o TC.
Dopo 60 secondi, iniettare da 0,5 a un millilitro di una dose di circa 22 megabecquerel di 18F-fluorodeossiglucosio per via endovenosa attraverso il pezzo a T. Lavare il pezzo a T con circa 150 microlitri di soluzione salina eparinata. Per l'acquisizione delle emissioni di PET, impostare l'opzione acquire by time su 3.600 secondi e selezionare F-18 come isotopo dello studio.
Utilizzare da 350 a 650 kiloelettronici come livello di energia e da 3.438 nanosecondi come finestra di temporizzazione. Per l'acquisizione CT, selezionate la scansione di attenuazione nell'opzione di acquisizione e nel campo delle impostazioni di proiezione selezionate 180 proiezioni per una rotazione totale di metà. Per le impostazioni del campo visivo e della risoluzione, selezionare basso come ingrandimento e quattro per quattro per l'associazione con una lunghezza di scansione assiale di 275 millimetri e 3.328 pixel come dimensione del dispositivo accoppiato alla carica transassiale.
Nel campo delle impostazioni di esposizione, impostare 500 microampe per la corrente, 80 kilovolt per la tensione e 180 millisecondi per il tempo di esposizione. Quindi acquisire un PET dinamico nei prossimi 60 minuti, seguito da una TAC alla fine dell'imaging PET. Per un istogramma a emissione di PET, impostare una serie di 20 fotogrammi come inquadratura dinamica e selezionare sottrai per i ritardi.
Nel campo impostazioni avanzate, selezionare 128 come larghezza del sinogramma, tre come intervallo e 79 come differenza di anello e correzione del tempo morto. Per la ricostruzione pet, utilizzare una massimizzazione delle aspettative del sottoinsieme ordinato bidimensionale e applicare e salvare l'ecogramma a dispersione con quattro iterazioni e Fourier per la ricombinazione come algoritmo di ricostruzione. Quindi seleziona 128 per 128 come dimensione della matrice, usane uno come zoom dell'immagine e seleziona tutto per i fotogrammi e tutto per i segmenti.
Per il prelievo manuale del sangue 30, 60, 90, 600 e 1.800 secondi dopo l'avvio dell'acquisizione dell'imaging, aprire la prima valvola a tre vie. Raccogliere 100 microlitri di sangue arterioso in un tubo di raccolta del sangue capillare EDTA 30 secondi dopo l'iniezione di tracciante. Per misurare l'attività di tutto il sangue, caricare il campione in un contatore del pozzo per consentire il calcolo dell'attività di tutto il sangue per ogni punto temporale del prelievo manuale del sangue in kilobecquerel per millilitro.
Per il prelievo del sangue online, utilizzare la guida del tubo per posizionare il tubo nel rilevatore e avviare il software del campionatore di sangue. Aprire l'interfaccia di acquisizione e verificare che il computer della configurazione di prelievo del sangue online e del PET/CT sia sincronizzato nel tempo. Premere il pulsante Start esattamente 60 secondi prima che il tracciante sia iniettato per acquisire dati sufficienti per la correzione in background.
Salvare i dati non elaborati tramite il pulsante Salva nel database PMOD dopo la misurazione. Per la correzione e la calibrazione dei dati del sangue online, passare all'interfaccia di correzione e abilitare la correzione del decadimento. Selezionare 18 F e definire l'ora di inizio dell'acquisizione dell'immagine, consentendo al pulsante Media di eseguire la correzione in background.
Attivare la calibrazione e immettere il fattore di calibrazione. Salvare i dati del sangue corretti e calibrati utilizzando il pulsante Salva TAC e selezionare il sangue. crv.
All'inizio del prelievo continuo del sangue, si può osservare un picco iniziale nella concentrazione di radioattività a partire da circa cinque secondi dopo l'iniezione di tracciante nell'analisi online. Dopo questo picco, l'attività nel sangue diminuisce rapidamente, raggiungendo un altopiano a circa 15 minuti. Nei dati manuali di prelievo del sangue, il picco rilevato è più piccolo e l'altopiano non è facilmente definito.
Nei dati derivati dall'immagine, il picco e il punto di partenza dell'altopiano sono chiaramente visibili. Tuttavia, il massimo del picco è inferiore rispetto ai dati di prelievo continuo del sangue. In questo prelievo continuo non ottimale del sangue, non è stata possibile alcuna acquisizione di dati durante i primi 3 minuti e mezzo del campionamento a causa della coagulazione del sangue.
Dopo aver cancellato il coagulo, il flusso nel sistema di tubi è stato riavviato e la misurazione è stata continuata, rivelando un picco a circa quattro minuti che non ha registrato la massima radioattività nel sangue. Il prelievo manuale del sangue e le analisi di immagine erano ancora possibili in questo campionamento non ottimale, tuttavia, e dimostravano risultati paragonabili a quelli osservati per correggere i risultati continui del prelievo del sangue. Tieni a mente il benessere dell'animale durante l'intera procedura, prepara il sistema di shunt esattamente come raccomandato e cerca di ridurre la lunghezza dei tubi.
Il protocollo può essere utilizzato per la variazione di nuove tracce diagnostiche di PET, la caratterizzazione di nuovi modelli di malattia e la valutazione della risposta terapeutica di nuove terapie in ambiente preclinico.
