Il mio laboratorio è interessato alla meccanobiologia, che esamina come le cellule esercitano e sono influenzate dalle forze meccaniche. Un modo per quantificare la meccanobiologia è misurare la contrattilità cellulare. Nelle cellule aderenti, la contrattilità si manifesta nelle forze di trazione esercitate sul substrato cellulare. Quantifichiamo queste forze utilizzando una metodologia generalmente indicata come microscopia a forza di trazione o TFM. E TFM è implementato in un'ampia varietà di metodi diversi, ma un aspetto comune è che è una tecnica di laboratorio piuttosto seriale e lenta fatta tipicamente in un singolo piatto come questo qui. Questo ci limita a valutare una popolazione o una condizione alla volta. In tutta la coltura cellulare è stato migliorato qualche tempo fa, ma creando piatti multiwell e abbiamo pensato, non sarebbe fantastico che potessimo TFM con la stessa maggiore produttività e la stessa efficienza di tempo e reagenti? E questa era la nostra soluzione. Così abbiamo creato un piatto di forza di trazione di 96 pozzi. E sembra molto simile a un piatto convenzionale di coltura tissutale da 96 pozzi, tuttavia con questo piatto possiamo non solo esaminare 96 diverse condizioni di coltura cellulare, ma anche quantificare la loro contrattilità cellulare. Questo presenta una soluzione di produttività molto più elevata rispetto agli approcci a piatto singolo, che ci consente di esaminare diverse condizioni cellulari e risposte contrattili. Durante la metastasi tumorale, le cellule tumorali viaggiano dal loro sito primario ai siti secondari, diffondendo la malattia nel nostro corpo. Questo comportamento metastatico delle cellule tumorali rappresenta il 90% della morte correlata al cancro. Uno dei meccanismi proposti per le cellule tumorali epiteliali per acquisire un fenotipo più migratore e invasivo è la transizione epiteliale-mesenchimale, EMT. Durante l'EMT, diventano più migratori e invasivi, cambiando il loro comportamento fisico. Per comprendere meglio questi cambiamenti nel comportamento fisico, utilizziamo il nostro substrato di silicio morbido per misurare i cambiamenti nella contrattilità delle cellule della ghiandola mammaria del topo con induzione EMT da parte di TGF-In questo studio, abbiamo studiato come diverse concentrazioni e tempi di incubazione del comportamento fisico delle cellule influenzate dal TGF. Il polidimetilsiloxano è una gomma molto conforme con il modulo di Young più basso di circa 0,6 kilopascal. La rigidità di questo materiale può anche essere tonnibile utilizzando diverse concentrazioni di agente di reticello tra cui SYLGARD 184.To misurare le proprietà meccaniche del PDMS usiamo un reometro. Dopo aver miscelato la parte A e la parte B del PDMS, in un rapporto peso uno a uno e aver aggiunto l'agente polimerizzante con la percentuale di peso specificata, caricare il lotto preparato sulla piastra del reometro. Assicurarsi di caricare abbastanza del campione per coprire completamente l'area del mandrino. È importante assicurarsi che il mandrino tocchi completamente il campione senza lasciare spazio libero sul bordo. Qualsiasi campione aggiuntivo deve essere accuratamente tagliato e pulito dalla piastra. Misurare il modulo di stoccaggio finale e la dipendenza dal tempo della viscoelasticità di ciascun campione facendo sweep di tempo e frequenza a un ceppo di taglio oscillatorio dello 0,5%Newsha]Questo grafico è un esempio di test seq del tempo, dopo aver fatto per misurare il comportamento reologico del polidimetilsiloxano con ceppo oscillatorio applicato dello 0,5% e temperatura del 100
