הטיפוח, הגדילה והכדאיות של חיידקי חומצה לקטית: נקודת מבט של בקרת איכות

הפרוטוקול שלנו משמעותי מכיוון שהוא מבטיח טוהר כבדיקת בקרת איכות. הוא גם מקדם ביצועי תסיסה חמורים ועקביות של תפוקה בתסיסה של חיידקי חומצה לקטית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יכולה לשפר את ביצועי התסיסה של חיידקי חומצה לקטית באמצעות טוהר התא, הכדאיות והפונקציונליות.

טכניקה זו היא ידידותית למשתמש וניתן לבצע בקלות על ידי כל אדם בשל השימוש בציוד בסיסי בלבד ללא דרישות טכניות רבות. פיליפ יבואה הוא עוזר המחקר שלנו לתואר שני והוא ידגים את ההליך. כדי להתחיל, קח את מלאי הגליצרול המוכן של חיידקי חומצה לקטית, או זני LAB, בשני מיליליטר צינורות צנטריפוגה מהמקפיא האולטרה-נמוך מינוס 80 מעלות צלזיוס.

אין לאפשר להם להפשיר לפני השימוש. נקו וחטאו את פתח צינורות הצנטריפוגה ב-70% אלכוהול ומערבלים בעדינות לפני השימוש. פיפטה על 250 מיקרוליטרים של תרבית LAB המניות מצינורות הצנטריפוגה ועד מבחנות MRS טריות של שני מיליליטר.

מערבלים בעדינות את המבחנות, עושים להן פרפרם, ומדגרים אותן באופן אנאירובי למשך הלילה בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 16 שעות. לאחר מכן, קחו כ-500 מיקרוליטרים מהתרביות שגודלו בן לילה משתי מבחנות MRS של מיליליטר ועד מבחנות MRS טריות של שבעה מיליליטר, ערבלו אותן והדגירו אותן באופן אנאירובי למשך הלילה בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 16 שעות. הערך את הגידול המיקרוביאלי על ידי מדידת הצפיפות האופטית או הצמיחה של התרביות ב-610 ננומטר עם ספקטרופוטומטר גלוי UV ותעד תוצאות מקובלות בין 0.7 ל-0.9.

פזרו את תרביות הלילה מצינורות MRS של שבעה מיליליטר על צלחות אגר MRS ו- MRCMPYR ודגרו אותן באופן אנאירובי במשך 72 שעות בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס. בחרו את המושבות המבודדות מלוחות האגר, העבירו אותן למבחנות MRS טריות של שבעה מיליליטר, מערבולות עדינות, ודגרו אותן באופן אנאירובי למשך הלילה בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 16 שעות. אחסנו את צלחות האגר המכילות את הזנים המבודדים בארבע מעלות צלזיוס במקרר למשך שבוע.

לאחר מכן, מדוד ואשר את הצפיפות האופטית ממבחנות MRS של שבעה מיליליטר של תרביות LAB שבודדו מהלוחות המפוספסים ב-610 ננומטר והשתמש בהם כתרביות עבודה לכל הניסויים הקשורים. השתמש בתשעה מיליליטר של מי פפטון כדי לבצע זיהומים פי עשרה של תרביות LAB שגדלו משבעת מבחנות MRS האחרונות של מיליליטר כדי להשיג יחס של 1 עד 10. קחו כ-250 מיקרוליטרים מההזיות הסדרתיות המתאימות לכל ניסויי התסיסה והפעילו את המרק המכיל את הזנים על ידי העברתם למרק MRS טרי של שבעה מיליליטר והדגירה שלהם באופן אנאירובי בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס למשך 16 שעות.

חזור על השלבים כדי להבטיח צמיחת תאים בת קיימא ומעולה מתרביות LAB. מורפולוגיה של תאים של זני לקטובצילוס בולגריקוס S9 ו-LB6 שטופחו באמצעות פרוטוקול בקרת האיכות וזני לקטובצילוס בולגריקוס S9 שטופחו ללא פרוטוקול בקרת האיכות מוצגים כאן. הזנים היו מפוספסים במשולשים והודגרו באופן אנאירובי בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס במשך 72 שעות.

בעת ניסיון הליך זה, הקפד לחטא את צינורות תרבית המלאי מהמקפיא עם 70% אלכוהול כדי למנוע זיהום צולב. מדידת צפיפות אופטית של תרביות גדילה צריכה להיות תמיד בין 0.7 ל-0.9. בעקבות פרוטוקול זה, ניתן להשיג תסיסות מעבדה יעילות או פעולות עיבוד ביולוגי עם שימוש מעולה בתרבית.