הצטברות והפצה של מיקרופלסטיק פלואורסצנטי בשלבי החיים המוקדמים של דגי זברה. מבוא. הביואקומולציה של מיקרופלסטיק לשחק תפקיד מפתח ההשפעות הרעילות שלהם. עם זאת, כמו חלקיקים, bioaccumulations שלהם שונים מזהמים רבים אחרים.
המתוארת כאן היא שיטה אפשרית כדי לקבוע חזותית את הצטברות והפצה של מיקרופלסטיק בעוברים זברה או זחלים באמצעות מיקרופלסטיק פלואורסצנטי. הניסויים נערכו בהתאם לקו המנחה הלאומי של מעבדת בעלי החיים לבדיקה אתית של רווחת בעלי החיים. אחד, אוסף עוברים.
דגי זברה בוגרים מקורם במרכז המשאבים של דגי הזברה בסין. דגים נשמרים במיכלי זכוכית 20 ליטר עם מערכת מי ברז מסוננת פחם בטמפרטורה קבועה, כלומר, 28 מעלות צלזיוס, על פוטופריוד של 14 ו -10 שעות, אור: כהה. דגים ניזונים פעמיים ביום עם ארטמיה נאופלי.
מומלץ כי המזון ניתן לכל היותר 3% משקל דגים ליום, ויש לאכול אותו תוך חמש דקות בכל פעם. דגי זברה בוגרים מפותחים מועברים למיכל ההשרצה ביחס של זכר אחד לשתי נקבות בלילה שלפני הרבייה. למחרת בבוקר, הדגים מתחילים להשריץ לאחר תחילת מחזור האור.
ביצים נאספות באמצעות פיפטה פסטר, שטף עם 10% הפתרון של האנק מספר פעמים, ולאחר מכן נבדק להפריה באמצעות מיקרוסקופ. ביצים מופרות עוברות את תקופת המחשוף לאחר הפריה של כשעתיים וניתן לזהותן בבירור. העוברים המופריים דגירה ב 500 מיליליטר המכילה 200 מיליליטר של 10% התמיסה של האנק עם 1% כחול מתילן לחיטוי ב 28 מעלות צלזיוס.
קצב הטעינה אינו עולה על עובר אחד בכל פתרון של 2 מיליליטר. שתיים, הכנת מתלים מיקרופלסטיק. פתרון המלאי של חרוזי פוליסטירן ירוקים עם תווית פלואורסצנטית בקוטר נומינלי של 500 ננומטר הם sonicated במשך 10 דקות.
לדלל את פתרון המניה עם 10% הפתרון של האנק לייצר את פתרונות החשיפה הרצויים, כלומר 0.1, 1 ו 10 מיליגרם לליטר. פתרונות החשיפה של מיקרופלסטיק תמיד מוכנים טריים לפני החשיפה. שלוש, חשיפה למיקרופלסטיק.
שישה עוברים שזה עתה הופרו נבחרים באקראי, ולאחר מכן מועברים לכל באר של שש צלחת באר המכילה חמישה מיליליטר של פתרונות מיקרופלסטיק עם ריכוזים שונים. קבוצות הבקרה המכילות את הפתרון של האנק 10% כלולות. בארות משולשות, עם סך של 18 עוברים, משמשים עבור כל טיפול.
העוברים הם דגירה תחת אותו מחזור כהה בהיר וטמפרטורה כמו מבוגרים, והם נצפו כל 12 שעות. המתים מוסרים מיד. פתרונות המיקרופלסטיק מתחדשים ב-90% כל 24 שעות.
במהלך תקופת החשיפה, הדגים אינם ניזונים. בדרך כלל, הבקיעה של העובר מתחילה בהפריה של 48 שעות לאחר ההפריה ומשלימה בערך 72 שעות לאחר ההפריה. ארבע, הערכה של התפלגות מיקרופלסטיק.
ב 24-48-72-96-ו 120 שעות לאחר ההפריה, העוברים והזחלים, אחד מכל אחד משלושת השכפולים, נבחרים באופן אקראי ושטוף עם 10% הפתרון של האנק. העוברים והזחלים מסודרים ומוכנים להשגחה. לפני כן, הזחלים מועברים לצלחת פטרי, ונחשפים ל-0.016% טריקאין להרדמה.
הדגים נצפו במיקרוסקופ פלואורסצנטי, ומדובבים בתוכנת הדמיה. עוצמת הפלואורסצנטיות בדגים מכומתת עוד יותר עם ImageJ NIH. תוצאות מייצגות.
הוא הראה בתוצאות כי מיקרופלסטיק יכול bioaccumulate בעוברים זברה וזחלים באופן תלוי ריכוז. לפני הבקיעה, פלואורסצנטיות חזקה נמצא סביב chorion עוברי;בעוד זחלים דג זברה, שק החלמון, קרום הלב, ומערכת העיכול הם האתרים המצטברים העיקריים של מיקרופלסטיק. דיון. תוצאה זו תקדם את הבנתנו לגבי הרעילות של מיקרופלסטיק לדגים, ואת השיטה המתוארת כאן ניתן להכליל באופן פוטנציאלי כדי לקבוע את הצטברות והפצה של סוגים אחרים של חומרים פלואורסצנטיים בשלבי החיים המוקדמים של זברה.
מאז chorion ישמש מחסום יעיל נגד חלקיקים עם גודל גדול, תהליך dechorionation לפני החשיפה עשויה להיות נחוצה. עם זאת, העובר עם chorion שלם מומלץ יותר להעריך את ecotoxicity של מזהמים כאשר בוחנים את מצב החשיפה בעולם האמיתי. ההתנהגות של מיקרופלסטיק בתמיסה היא קריטית גם הזמינות הביולוגית.
יש לעקוב אחר המאפיינים הפיזיוכימיים של מיקרופלסטיק לאורך משך החשיפה.
